【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学，尤其是涉及一种dna聚合酶及其制备方法与应用、表达基因、表达载体及重组细胞。
技术介绍
1、等温扩增技术是一种在恒定温度下进行核酸扩增的分子生物学方法，与传统的pcr技术相比，不需要热循环仪器，具有操作简便、反应速度快、灵敏度高、特异性强等优点，适用于多种领域。
2、相关技术中，等温扩增使用具有链置换活性的dna聚合酶来分离双链dna。具备链置换属性的等温扩增酶，具有成本低、无需扩增设备、减少污染概率以及对反应抑制剂的敏感性较低、可用于即时检验(poct)等特征。然而，目前的等温扩增酶耐盐性较差，当反应体系中盐浓度超过一定范围后，其活性会急剧下降，甚至完全丧失；且保真性尚不能完全达到要求。
3、因此，解决目前常见的等温扩增酶不能完全满足使用要求的问题，开发新型的具有一定耐盐性、保真性高的等温扩增酶具有重要意义。
技术实现思路
1、本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种dna聚合酶及其制备方法与应用、表达基因、表达载体及重组细胞，旨在解决目前缺乏具有一定耐盐性且保真性高的等温扩增酶的问题。
2、本专利技术的第一方面，提供了一种dna聚合酶，包括氨基酸序列如seq id no.1～seqid no.2中任一项所示的蛋白片段。
3、seq id no.1：
4、mdkhtqyvkahsfihseykkaqfndieclifdtesctnyendntgarvygwgl
5、seq id no.2：
6、mdlnerlkniknngimnfiskdkikatsekdvlnfafdieacainnksemltysialmscnndsdlcywynnvskfndmllnlnckqinlfahnclydvkpflldfvkrygnkqrqedyflkkqwnefekiyevlnfqssdkenkelkpfeyrllmkngvfykltiatefglinfydtfklapfslkkccsdflglklgkdgldydkertldddlteqemtyiyedvyglsylvkllkingidlngqkikydkltnsgqalanykltlledylnkqnafenenlydmvdtklmktnfhklknkgnvteiksnivfealfpkqsyfqdawqrhsyygglstveydnvkkfskrknkhgivldvnslypfvmtsrllpygeaqyrdtayknmnekykevyplyiqditiydlkvkknkmsflqvkdnkhfsgreclknnikdgkkltlhlrltnvlldllfecydvkayklgghmafrgsynlfknyidfwskikqenegalrafaklmqnglygkfgmagvteltnfqnvddvftiehthenvvsdtiylpmatfitswakqylvkainnnyerfmycdtdslhlfgtieqvkgveigkkiyglwdnemcfedfkyigskryaekntkthkweikccgltdeimkklddinvfdvceysakelakmeyftkegsiyyykdkectqkikglikskkskiikggtiiqeqpymislnnyfer
7、根据本专利技术实施例的dna聚合酶，至少具有以下有益效果：本专利技术提供的dna聚合酶具有良好的耐盐性，可以适用于较高盐浓度下的扩增，且扩增效率高，还具有较强的链置换属性以及持续性；不仅如此，所述dna聚合酶的n端为3’-5’外切酶结构域，外切酶活性使得该dna聚合酶能够识别错配碱基和校正功能，从而具有较高的保真性。上述耐盐且高保真的dna聚合酶在等温扩增以及测序领域具有较大的应用价值。
8、在本专利技术的一些实施方式中，所述dna聚合酶的核心序列为seq id no.1～2所示的氨基酸序列，还可以包括其他的蛋白片段、修饰或者标签等。本领域技术人员根据实际需要，基于上述核心序列做出的调整，均在本专利技术的保护范围之内。
9、在本专利技术的一些实施方式中，所述蛋白片段的氨基酸序列的中间连接了标签或dna结合结构域；和/或，所述蛋白片段的氨基酸序列的n端连接了标签或dna结合结构域；和/或所述蛋白片段的氨基酸序列的c端连接了标签或dna结合结构域。
10、在本专利技术的一些实施方式中，所述标签包括利于dna聚合酶的溶解、纯化和检测的标签中的至少一种。可以理解的是，本专利技术的dna聚合酶可以包含一个或多个标签；多个标签可以包含多个相同标签的组合，也可以为多个不同标签的组合。
11、在本专利技术的一些实施方式中，所述dna结合结构域包括但不限于spy-catvher、sso7d、dbd、hi。
12、在本专利技术的一些实施方式中，所述dna聚合酶的氨基酸序列如seq id no.3所示。所述dna聚合酶为cps2 dna聚合酶，来自于clostridium phage(梭状芽孢杆菌噬菌体)cps2，通过基因合成获得，氨基酸序列如seq id no.3所示，其中下划线部分为聚合酶氨基酸核心序列，n端依次为his-tag、spy-catcher和连接肽sggs，spy-catcher标签能够特异性的与spy-tag标签形成稳定的共价键，从而使得聚合酶能够与其他蛋白形成二元复合物。
13、seq id no.3：<本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种DNA聚合酶，其特征在于，包括氨基酸序列如SEQ ID No.1～SEQ ID No.2中任一项所示的蛋白片段。
2.根据权利要求1所述的DNA聚合酶，其特征在于，所述蛋白片段的氨基酸序列的中间和/或N端和/或C端连接了标签或DNA结合结构域。
3.根据权利要求1所述的DNA聚合酶，其特征在于，所述DNA聚合酶的氨基酸序列如SEQID No.3～SEQ ID No.4中任一项所示。
4.一种DNA聚合酶的表达基因，其特征在于，包括编码如权利要求1-3任一所述的DNA聚合酶的核苷酸片段。
5.一种表达载体，其特征在于，包括如权利要求4所述的表达基因。
6.一种重组细胞，其特征在于，包括如权利要求4所述的表达基因或如权利要求5所述的表达载体。
7.一种DNA聚合酶的制备方法，其特征在于，包括步骤：将编码如权利要求1-3任一所述的DNA聚合酶的表达基因导入生物细胞中，使所述表达基因得到表达，得到所述DNA聚合酶。
8.一种酶制剂，其特征在于，包括如权利要求1-3任一所述的DNA聚合酶或者如权利要
9.一种如权利要求1-3任一所述的DNA聚合酶在核酸扩增或测序中的应用。
10.一种核酸扩增或测序产品，其特征在于，包括如权利要求1-3任一所述的DNA聚合酶或者如权利要求8所述的酶制剂。
...【技术特征摘要】
1.一种dna聚合酶，其特征在于，包括氨基酸序列如seq id no.1～seq id no.2中任一项所示的蛋白片段。
2.根据权利要求1所述的dna聚合酶，其特征在于，所述蛋白片段的氨基酸序列的中间和/或n端和/或c端连接了标签或dna结合结构域。
3.根据权利要求1所述的dna聚合酶，其特征在于，所述dna聚合酶的氨基酸序列如seqid no.3～seq id no.4中任一项所示。
4.一种dna聚合酶的表达基因，其特征在于，包括编码如权利要求1-3任一所述的dna聚合酶的核苷酸片段。
5.一种表达载体，其特征在于，包括如权利要求4所述的表达基因。
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【专利技术属性】
技术研发人员：高亚平，林武，叶作城，田晖，何筠，伊戈尔·伊万诺夫，王壹，韩磊，
申请(专利权)人：深圳清华大学研究院，
类型：发明
国别省市：
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