一种枇杷叶总三萜提取物的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种枇杷叶总三萜提取物的应用。更具体地，公开了一种枇杷叶总三萜提取物在治疗有害气体引起的血脂代谢紊乱及非酒精性脂肪肝中的应用。所述的一种枇杷叶总三萜取物可显著改善有害气体引起的小鼠脂质代谢紊乱，减轻该模型中小鼠肝脏细胞变性坏死，减少脂质沉积，防止非酒精性脂肪肝的形成，可用于制备治疗有害气体引起的血脂紊乱及非酒精性脂肪肝的药物或保健品。

【技术实现步骤摘要】
一种枇杷叶总三萜提取物的应用
本专利技术属于中药领域，具体涉及一种从中药枇杷叶中得到的总三萜提取物在治疗有害气体引起的高血脂及非酒精性脂肪肝的药物或保健品上的应用。
技术介绍
有害气体是指对人或动物的健康产生不利影响的气体，比如大气污染、烟草烟雾等。空气污染中的二氧化硫、一氧化碳等气体会诱发炎症、影响人体的新陈代谢，影响机体生长发育。大气中的PM2.5颗粒物可经呼吸直达肺泡，沉积于肺泡表面，并可透过呼吸屏障进入循环系统，随血流而作用于全身的各个靶器官，引起脏器功能紊乱，诱发疾病。研究表明，PM2.5颗粒能诱导肝脏产生胰岛素抵抗、干扰糖脂代谢、并引起脂肪组织炎症和肝细胞内质网应激等一系列与代谢性疾病发生和发展相关的病理过程。烟草中含有数百种复杂的化学成分，大部分对人体有害，其中焦油、尼古丁、酚类、醇类、酸类、醛类等40种是有毒和有致癌作用的物质。烟在点燃后，所产生的烟雾，包含了烟草中所有的化学成分，同时比烟草本身又增加了一些有害物质，如一氧化碳和烟焦油等，这些有毒成分可以引起肺、胃、脑、肝等多器官损伤。所以寻找能缓解有害气体对人体的伤害的药物很有意义。枇杷叶是蔷薇科枇杷属植物枇杷（Eriobotryajaponica(Thunb.)Lindl.）的干燥叶，作为一味常用中药，收载于历版中国药典供中医临床使用，具有清肺止咳、降逆止呕等作用，用于治疗肺热咳嗽、气逆喘气。国内已公开的专利技术专利（200810018820.8，200810024412.3，200410015695.7，201410802741.1）分别指出了枇杷叶总三萜酸、总黄酮和总倍半萜具有抗糖尿病作用。专利号为ZL201010607483.3的专利公开了一种枇杷叶总三萜酸提取物的提取方法。本专利技术通过建立有害气体诱导的小鼠模型，全面模拟大气污染条件下机体对脂质的代谢和消耗，考察枇杷叶枇杷叶总三萜提取物干预下代谢紊乱小鼠脂质的代谢和消耗，以及对非酒精性脂肪肝的影响，评价枇杷叶对有害气体导致的脂代谢紊乱及对非酒精性脂肪肝的治疗作用，对防治大气污染或者烟草烟雾引起的高血脂及非酒精性脂肪肝病的药物研发具有积极意义。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是一种枇杷叶总三萜提取物在治疗血脂紊乱及非酒精性脂肪肝病领域中的应用。为了达到上述目的，本专利技术制备了一种枇杷叶总三萜提取物。该方法包括以下步骤：（1）将枇杷叶干燥粉碎；（2）用乙醇或甲醇为溶剂提取步骤（1）中得到的枇杷叶干燥粉末，将提取液减压浓缩成浸膏；（3）将步骤（2）中得到的浸膏用80-90%乙醇或甲醇溶解，过滤或离心除去不溶物，得到醇溶液；所述乙醇或甲醇的重量为浸膏重量的10-40倍；（4）取活性炭装柱，将步骤（3）得到的醇溶液上样，用乙醇或甲醇进行梯度洗脱，收集洗脱液；所述活性炭与步骤（1）中所述枇杷叶的重量比为：0.2-5:1；（5）将步骤（4）收集的洗脱液浓缩干燥，得枇杷叶总三萜酸提取物；或将步骤（4）收集的洗脱液浓缩至醇浓度为20-50%，放置6-12小时，过滤，将沉淀物干燥，得枇杷叶总三萜酸提取物。本专利技术在动物模型的造模过程中采用燃烧烟草制造烟草烟雾，烟草烟雾中含有多种有毒化学成分和小颗粒污染物，再结合二氧化硫气体被动吸入，模拟大气污染、吸烟和被动吸烟对人体造成的危害。动物模型造模后，模型组动物与空白组相比，血浆中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）含量显著升高，高密度脂蛋白（HDL）显著降低，说明模型小鼠出现脂代谢紊乱。模型小鼠的肝脏切片中，肝细胞出现典型的胞浆疏松变性、气球样变性和脂肪沉积等，说明小鼠出现非酒精脂肪肝症状。上述枇杷叶总三萜提取物在可以显著降低有害气体模型小鼠血浆中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）含量，升高高密度脂蛋白（HDL），减少脂质在肝脏中的累积，减轻小鼠肝脏细胞的变性坏死，提示其具有降血脂功能，且具有治疗非酒精性脂肪肝的作用，可以应用于制备治疗有害气体引起的高血脂及非酒精性脂肪肝病药物或保健品。所述治疗有害气体引起的高血脂及非酒精性脂肪肝病药物或保健品分别为含有治疗有效剂量或功效成分的枇杷叶总三萜提取物在药学上可接受的载体和保健食品。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。实施例1：高效液相色谱法：色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（C18柱，250mm*4.6mm,5μm）；以甲醇(A)-0.15%甲酸(B)为流动相梯度洗脱，0~1minA:B=73:27，2~48minA:B=80:20，49~60minA:B=90:10。柱温30℃；检测波长208nm。对照品溶液的制备：精密称取三萜对照品适量加甲醇溶解配置成含野鸭椿酸、委陵菜酸、山楂酸、克罗索酸、齐墩果酸、熊果酸各0.1mg·ml-1的混合对照品溶液作为对照品溶液。样品溶液的制备：精确称取枇杷叶总三萜酸提取物10.0mg于10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，即得。样品测定：分别取样品溶液和对照品溶液各10μl，进样，按外标法以峰面积计算样品含量。紫外分光光度法：对照品溶液的制备：精密称取熊果酸5.0mg于25ml容量瓶中，加无水乙醇溶解并定容至25ml，摇匀即得。样品溶液的制备：精确称取枇杷叶总三萜酸提取物6.0mg于25ml容量瓶中，加无水乙醇超声溶解，定容至25ml，摇匀即得。样品测定：精密移取0.2~0.4ml样品溶液于试管中，水浴蒸干溶剂，加入新配5%香草醛-冰醋酸溶液0.3ml，再加入高氯酸1.0ml，60℃水浴反应15min，立即置于冰水浴中冷却，再加冰醋酸5ml混合均匀后于紫外-可见分光光度计下测量545nm处的吸收值，根据熊果酸标准曲线计算样品总三萜酸含量。根据专利ZL201010607483.3所述的制备方法，取干燥枇杷叶5.0kg粉碎成粗粉，依次用90%乙醇6L、4L加热回流提取2次，每次分别为2小时、1小时，合并提取液，减压浓缩呈稠膏，加40倍稠膏重量的90%乙醇，搅拌，放置。置离心机沉降离心，取上清液备用。取0.2kg活性炭颗粒装柱，用15kg的95%乙醇进行洗脱，收集乙醇洗脱液。减压浓缩至醇为50%，放置6h冷析，过滤，沉淀干燥，得57g枇杷叶总三萜酸提取物。提取物经HPLC检测，其中主要三萜酸成分含量分别为：野鸭椿酸12.7%、委陵菜酸4.9%、山楂酸7.2%、克罗索酸17.1%、齐墩果酸4.3%、熊果酸18.6%，总含量为64.8%，经紫外分光光度法测得提取物总三萜酸含量以熊果酸计为86.78%。实施例2：枇杷叶总三萜提取物治疗有害气体引起的脂质代谢紊乱实验动物与分组：C57BL6小鼠，雄性，体重（20±2）g，购自南京市江宁区青龙山动物繁殖场，随机分为4组，每组10只，分别为模型组（有害气体诱导组）及枇杷叶总三萜组（有害气体诱导+不同剂量的枇杷叶总三萜），其中枇杷叶总三萜组给予按照实施例1制备获得的枇杷叶总三萜80mg/kg（低剂量组），200mg/kg（高剂量组）。有害气体诱导脂质代谢紊乱小鼠模型的建立：将小鼠置于自制的有机玻璃染毒箱内。红梅烟（红塔集团，焦油含量13mg）点燃后置染毒箱内，4支/次，持续30min/次，一日一次。间隔4小时后，接本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种枇杷叶总三萜提取物在治疗有害气体引起的血脂紊乱及非酒精性脂肪肝的应用，其特征在于该制备方法为：（1）将枇杷叶干燥粉碎；（2）用乙醇或甲醇为溶剂提取步骤（1）中得到的枇杷叶干燥粉末，将提取液减压浓缩成浸膏；（3）将步骤（2）中得到的浸膏用80‑90%乙醇或甲醇溶解，过滤或离心除去不溶物，得到醇溶液；所述乙醇或甲醇的重量为浸膏重量的10‑40倍；（4）取活性炭装柱，将步骤（3）得到的醇溶液上样，用乙醇或甲醇进行梯度洗脱，收集洗脱液；所述活性炭与步骤（1）中所述枇杷叶的重量比为：0.2‑5:1；（5）将步骤（4）收集的洗脱液浓缩干燥，得枇杷叶总三萜酸提取物；或将步骤（4）收集的洗脱液浓缩至醇浓度为20‑50%，放置6‑12小时，过滤，将沉淀物干燥，得枇杷叶总三萜酸提取物。

【技术特征摘要】
1.一种枇杷叶总三萜提取物在治疗有害气体引起的血脂紊乱及非酒精性脂肪肝的应用，其特征在于该制备方法为：（1）将枇杷叶干燥粉碎；（2）用乙醇或甲醇为溶剂提取步骤（1）中得到的枇杷叶干燥粉末，将提取液减压浓缩成浸膏；（3）将步骤（2）中得到的浸膏用80-90%乙醇或甲醇溶解，过滤或离心除去不溶物，得到醇溶液；所述乙醇或甲醇的重量为浸膏重量的10-40倍；（4）取活性炭装柱，将步骤（3）得到的醇溶液上样，用乙醇或甲醇进行梯度洗脱，收集洗脱液；所述活性炭与步骤（1）中所述枇杷叶的重量比为：0.2-5:1；（5）将步骤（4）收集的洗脱液浓缩干燥，得枇杷叶总三萜酸提取物；或将步骤（4）收集的...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕寒，简暾昱，吴月娴，丁晓琴，陈剑，李维林，任冰如，
申请(专利权)人：江苏省中国科学院植物研究所，
类型：发明
国别省市：江苏,32