用于抑制HAO1(羟酸氧化酶1(乙醇酸盐氧化酶))基因表达的组合物及方法技术
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于抑制HAO1(羟酸氧化酶1(乙醇酸盐氧化酶))基因表达的组合物及方法相关申请案的交叉参考本申请案主张2014年10月10日申请的美国临时申请案第62/062,751号及2015年4月15日申请的美国临时申请案第62/147,976号以及2015年9月4日申请的美国临时申请案第62/214,602号的权利，其中每一个以全文引用的方式并入本文中。序列表本申请案含有序列表，该序列表已以ASCII格式以电子方式提交且其全部内容以引用的方式并入本文中。2015年10月8日_创建的该ASCII复本的名称为30864PCT_CRF_sequencelisting.txt且大小为735,705字节。专利技术背景1型原发性高草酸盐尿症(PH1)为乙醛酸盐代谢的常染色体隐性遗传病。肝乙醛酸盐解毒作用由于AGXT基因的突变而减弱，AGXT基因编码肝过氧化物酶体丙氨酸-乙醛酸盐转氨酶(AGT)。AGT1为羟脯氨酸的代谢分解中的最终酶。将中间代谢物乙醛酸盐转化成甘氨酸的AGT功能的丧失可引起乙醛酸盐聚集及还原成乙醇酸盐，其由酶乙醇酸盐氧化酶(GO，亦称为羟酸氧化酶(HAO1))氧化成草酸盐。乙醛酸盐(草酸盐的关键前驱体)的调节在多个细胞位点处发生，包括粒线体、过氧化物酶体及胞溶质。PH1患者中的过量草酸盐不能由肾完全排出，引起肾及泌尿道中形成及沉积草酸钙晶体。肾损伤是由来自草酸盐的肾小管毒性、肾钙沉着及由结石引起的肾堵塞的组合引起。超过30％的患者发展成末期肾病(ESRD)。HAO1基因编码酶羟酸氧化酶1，亦称为乙醇酸盐氧化酶(“GO”)。HAO1蛋白质主要表达于肝中且为对乙醇酸...
【技术保护点】
一种双链RNAi药剂，其能够抑制细胞中HAO1的表达，其中该双链RNAi药剂包含形成双链区域的有义链及反义链，其中该有义链包含与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6的核苷酸序列中的任一个相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，且该反义链包含与SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8的核苷酸序列中的任一个相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸；其中该有义链的基本上所有这些核苷酸及该反义链的基本上所有这些核苷酸皆为经修饰的核苷酸，及其中该有义链结合于在3'‑端处连接的配位体。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.10.10 US 62/062,751;2015.04.15 US 62/147,976;1.一种双链RNAi药剂，其能够抑制细胞中HAO1的表达，其中该双链RNAi药剂包含形成双链区域的有义链及反义链，其中该有义链包含与SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:5或SEQIDNO:6的核苷酸序列中的任一个相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，且该反义链包含与SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:7或SEQIDNO:8的核苷酸序列中的任一个相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸；其中该有义链的基本上所有这些核苷酸及该反义链的基本上所有这些核苷酸皆为经修饰的核苷酸，及其中该有义链结合于在3'-端处连接的配位体。2.如权利要求1所述的双链RNAi药剂，其中该有义链的所有这些核苷酸及该反义链的所有这些核苷酸皆为经修饰的核苷酸。3.如权利要求1所述的双链RNAi药剂，其中该有义链及该反义链包含互补区，该互补区包含与表2中列举的反义序列中的任一个相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸。4.如权利要求1至3中任一项所述的双链RNAi药剂，其中这些经修饰的核苷酸中的至少一个是选自下组，该组由以下各项组成：3'-端脱氧-胸腺嘧啶(dT)核苷酸、经2'-O-甲基修饰的核苷酸、经2'-氟修饰的核苷酸、经2'-脱氧修饰的核苷酸、锁核苷酸、无碱基核苷酸、经2'-氨基修饰的核苷酸、经2'-烷基修饰的核苷酸、吗啉基核苷酸、氨基磷酸酯、包含非天然碱基的核苷酸、包含5'-硫代磷酸酯基团的核苷酸、包含5'磷酸酯或5'磷酸酯模拟物的核苷酸及连接至胆固醇基衍生物或十二酸双癸基酰氨基团的末端核苷酸。5.如权利要求1所述的双链RNAi药剂，其中至少一个链包含具有至少1个核苷酸的3'悬垂物。6.如权利要求1所述的双链RNAi药剂，其中至少一个链包含具有至少2个核苷酸的3'悬垂物。7.一种双链RNAi药剂，其能够抑制细胞中HAO1(羟酸氧化酶1)的表达，其中该双链RNAi药剂包含与反义链互补的有义链，其中该反义链包含与mRNA中编码HAO1的部分互补的区域，其中各链的长度为约14至约30个核苷酸，其中该双链RNAi药剂由式(III)表示：有义：5'np-Na-(XXX)i-Nb-YYY-Nb-(ZZZ)j-Na-nq3'反义：3'np'-Na'-(X'X'X')k-Nb'-Y'Y'Y'-Nb'-(Z'Z'Z')l-Na'-nq'5'(III)其中：i、j、k及l各自独立地为0或1；p、p'、q及q'各自独立地为0-6；各Na及Na'独立地表示包含0-25个经修饰或未经修饰的核苷酸或其组合的寡核苷酸序列，各序列包含至少两个经不同修饰的核苷酸；各Nb及Nb'独立地表示包含0-10个经修饰或未经修饰的核苷酸或其组合的寡核苷酸序列；各np、np'、nq及nq'，其中每一个可存在或可不存在，独立地表示悬垂核苷酸；XXX、YYY、ZZZ、X'X'X'、Y'Y'Y'及Z'Z'Z'各自独立地表示一个在三个连续核苷酸上具有三个相同修饰的基序；Nb的修饰与Y的修饰不同且Nb'的修饰与Y'的修饰不同；及其中该有义链结合于至少一个配位体。8.如权利要求7所述的双链RNAi药剂，其中i为0；j为0；i为1；j为1；i及j皆为0；或i及j皆为1。9.如权利要求7所述的双链RNAi药剂，其中k为0；l为0；k为1；l为1；k及l皆为0；或k及l皆为1。10.如权利要求7所述的双链RNAi药剂，其中XXX与X'X'X'互补，YYY与Y'Y'Y'互补，且ZZZ与Z'Z'Z'互补。11.如权利要求7所述的双链RNAi药剂，其中YYY基序位于该有义链的裂解位点处或其附近。12.如权利要求7所述的双链RNAi药剂，其中该Y'Y'Y'基序位于该反义链的离5'端的11、12及13号位置处。13.如权利要求12所述的双链RNAi药剂，其中该Y'为2'-O-甲基。14.如权利要求7所述的双链RNAi药剂，其中式(III)由式(IIIa)表示：有义：5'np-Na-YYY-Na-nq3'反义：3'np'-Na'-Y'Y'Y'-Na'-nq'5'(IIIa)。15.如权利要求7所述的双链RNAi药剂，其中式(III)由式(IIIb)表示：有义：5'np-Na-YYY-Nb-ZZZ-Na-nq3'反义：3'np'-Na'-Y'Y'Y'-Nb'-Z'Z'Z'-Na'-nq'5'(IIIb)其中各Nb及Nb'独立地表示包含1-5个经修饰的核苷酸的寡核苷酸序列。16.如权利要求7所述的双链RNAi药剂，其中式(III)由式(IIIc)表示：有义：5'np-Na-XXX-Nb-YYY-Na-nq3'反义：3'np'-Na'-X'X'X'-Nb'-Y'Y'Y'-Na'-nq'5'(IIIc)其中各Nb及Nb'独立地表示包含1-5个经修饰的核苷酸的寡核苷酸序列。17.如权利要求7所述的双链RNAi药剂，其中式(III)由式(IIId)表示：有义：5'np-Na-XXX-Nb-YYY-Nb-ZZZ-Na-nq3'反义：3'np'-Na'-X'X'X'-Nb'-Y'Y'Y'-Nb'-Z'Z'Z'-Na'-nq'5'(IIId)其中各Nb及Nb'独立地表示包含1-5个经修饰的核苷酸的寡核苷酸序列且各Na及Na'独立地表示包含2-10个经修饰的核苷酸的寡核苷酸序列。18.如权利要求7所述的双链RNAi药剂，其中该双链区域的长度为15-30个核苷酸对。19.如权利要求18所述的双链RNAi药剂，其中该双链区域的长度为17-23个核苷酸对。20.如权利要求18所述的双链RNAi药剂，其中该双链区域的长度为17-25个核苷酸对。21.如权利要求18所述的双链RNAi药剂，其中该双链区域的长度为23-27个核苷酸对。22.如权利要求18所述的双链RNAi药剂，其中该双链区域的长度为19-21个核苷酸对。23.如权利要求18所述的双链RNAi药剂，其中该双链区域的长度为21-23个核苷酸对。24.如权利要求7所述的双链RNAi药剂，其中各链具有15-30个核苷酸。25.如权利要求1或7所述的双链RNAi药剂，其中各链具有19-30个核苷酸。26.如权利要求7所述的双链RNAi药剂，其中这些核苷酸上的修饰是选自下组，该组由以下各项组成：LNA、HNA、CeNA、2'-甲氧基乙基、2'-O-烷基、2'-O-烯丙基、2'-C-烯丙基、2'-氟、2'-脱氧、2'-羟基及其组合。27.如权利要求26所述的双链RNAi药剂，其中这些核苷酸上的修饰为2'-O-甲基或2'-氟修饰。28.如权利要求1或7所述的双链RNAi药剂，其中该配位体为经由二价或三价支链连接体连接的一个或多个GalNAc衍生物。29.如权利要求1或7所述的双链RNAi药剂，其中该配位体为30.如权利要求1或7所述的双链RNAi药剂，其中该配位体连接至该有义链的该3'端。31.如权利要求30所述的双链RNAi药剂，其中该RNAi药剂结合至该配位体，如以下示意图中所示其中X为O或S。32.如权利要求1或7所述的双链RNAi药剂，其中该药剂进一步包含至少一个硫代磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸间键。33.如权利要求32所述的双链RNAi药剂，其中该硫代磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸间键位于一个链的3'-端处。34.如权利要求33所述的双链RNAi药剂，其中该链为该反义链。35.如权利要求33所述的双链RNAi药剂，其中该链为该有义链。36.如权利要求32所述的双链RNAi药剂，其中该硫代磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸间键位于一个链的5'-端处。37.如权利要求36所述的双链RNAi药剂，其中该链为该反义链。38.如权利要求36所述的双链RNAi药剂，其中该链为该有义链。39.如权利要求32所述的双链RNAi药剂，其中该硫代磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸间键位于一个链的5'-端及3'-端处。40.如权利要求39所述的双链RNAi药剂，其中该链为该反义链。41.如权利要求32所述的双链RNAi药剂，其中该RNAi药剂包含6-8个硫代磷酸酯核苷酸间键。42.如权利要求41所述的双链RNAi，其中该反义链包含该5'-端处的两个硫代磷酸酯核苷酸间键及该3'-端处的两个硫代磷酸酯核苷酸间键，且该有义链包含该5'-端或该3'-端中的任一个处的至少两个硫代磷酸酯核苷酸间键。43.如权利要求1或7所述的双链RNAi药剂，其中双螺旋的该反义链的该5'-端的1号位置处的该碱基对为AU碱基对。44.如权利要求7所述的双链RNAi药剂，其中这些Y核苷酸含有2'-氟修饰。45.如权利要求7所述的双链RNAi药剂，其中这些Y'核苷酸含有2'-O-甲基修饰。46.如权利要求7所述的双链RNAi药剂，其中p'>0。47.如权利要求7所述的双链RNAi药剂，其中p'＝2。48.如权利要求47所述的双链RNAi药剂，其中q'＝0，p＝0，q＝0，且p'悬垂核苷酸与目标mRNA互补。49.如权利要求47所述的双链RNAi药剂，其中q'＝0，p＝0，q＝0，且p'悬垂核苷酸不与该目标mRNA互补。50.如权利要求41所述的双链RNAi药剂，其中该有义链具有总共21个核苷酸且该反义链具有总共23个核苷酸。51.如权利要求46至50中任一项所述的双链RNAi药剂，其中至少一个np'经由硫代磷酸酯键连接至相邻核苷酸。52.如权利要求51所述的双链RNAi药剂，其中所有np'经由硫代磷酸酯键连结至相邻核苷酸。53.如权利要求1或7所述的双链RNAi药剂，其中该RNAi药剂是选自表1或2中的任一个中列举的RNAi药剂的组。54.如权利要求1所述的双链RNAi药剂，其中该RNAi药剂是选自下组，该组由以下各项组成：AD-62994及AD-62933。55.如权利要求7所述的双链RNAi药剂，其中该RNAi药剂为AD-62994及AD-62933。56.一种双链RNAi药剂，其能够抑制细胞中HAO1的表达，其中该双链RNAi药剂包含形成双链区域的有义链及反义链，其中该有义链包含与SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:5或SEQIDNO:6的核苷酸序列中的任一个相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，且该反义链包含与SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:7或SEQIDNO:8的核苷酸序列中的任一个相差不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，其中该有义链的基本上所有这些核苷酸包含选自下组的修饰，该组由以下各项组成：2'-O-甲基修饰及2'-氟修饰，其中该有义链包含5'-端处的两个硫代磷酸酯核苷酸间键，其中该反义链的基本上所有这些核苷酸包含选自下组的修饰，该组由以下各项组成：2'-O-甲基修饰及2'-氟修饰，其中该反义链包含该5'-端处的两个硫代磷酸酯核苷酸间键及3'-端处的两个硫代磷酸酯核苷酸间键，及其中该有义链结合于一个或多个GalNAc衍生物，该一个或多个GalNAc衍生物经由该3'-端处的支链二价或三价连接体连接。57.如权利要求56所述的双链RNAi药剂，其中该有义链的所有这些核苷酸及该反义链的所有这些核苷酸皆包含修饰。58.一种双链RNAi药剂，其能够抑制细胞中HAO1(羟酸氧化酶1)的表达，其中该双链RNAi药剂包含与反义链互补的有义链，其中该反义链包含与mRNA中编码HAO1的部分互补的区域，其中各链的长度为约14至约30个核苷酸，其中该双链RNAi药剂由式(III)表示：有义：5'np-Na-...
【专利技术属性】
技术研发人员：W·奎贝斯，K·菲茨杰拉德，B·贝腾考特，A·利鲍，D·V·厄布，
申请(专利权)人：阿尔尼拉姆医药品有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。