一种分析羊肉中残留兽药的方法技术

本发明专利技术涉及分析测试领域，具体涉及到一种分析羊肉中残留兽药的方法。至少包括样品前处理、酶解、提取、净化，以及上机测试等步骤。与现有的检测方法相比具有更高的准确度，可以同时提取、净化和测试多种兽药，快速高效。本发明专利技术提供的方法采用三类不同的溶剂多次提取的方法，尽可能充分提取羊肉中的兽药，提高检测的准确性，减少基质对兽药检测过程中的影响。此外，在梯度淋洗过程中引入第三个流动相，避免原有的两个流动相由于溶解性以及色谱柱中的吸附剂等的作用下而分层，使目标药物分在两个溶剂中，检测器检测出的特征峰分裂成两个主次特征峰，降低检测出的药物的含量，同时影响其余药物的测定。

【技术实现步骤摘要】
一种分析羊肉中残留兽药的方法
本专利技术涉及检测分析兽药领域，具体涉及到一种分析羊肉中残留兽药的方法。
技术介绍
如今在畜牧业生产中兽药的使用不可避免，为了保证食品安全，我国已经建立了对应的兽药休药期制度。兽药残留的休药期指畜禽停止给药到许可屠宰或其产品许可上市的间隔时间。我国农业部278号公告规定，凡是供食用动物使用的药物或其他化学物质，均需规定休药期。但在实际畜牧养殖过程中，由于缺乏相关方面的知识，以及经济利益的驱动，部分畜牧养殖户未能按照国家规定的休药期制度执行，从而使得兽药在动物体内残留。此外，未经批准的药物的使用也是兽药残留产生的重要原因之一。我国农业部265号公告中明文规定，不得使用不符合《兽药标签和说明书管理办法》规定的兽药产品，不得使用《食品动物禁用的兽药及其他化合物清单》所列21类药物及未经农业部批准的兽药，不得使用进口国明令禁用的兽药，畜禽产品中不得检出禁用药物。虽然相关规定已明确指出了不得使用的兽药品种，但目前违禁药物(如克伦特罗、莱克多巴胺、氯霉素等)在畜牧生产中的使用现象仍然存在，肉类食品安全事故时而发生，例如，当年震惊全国的为了促进脂肪分解，提高瘦肉率的效本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分析羊肉中残留兽药的方法，其特征在于，至少包括如下步骤：(1)将羊肉样品绞碎，于匀浆机中匀浆；(2)称取5.00g匀浆好的羊肉样品于50ml离心管中，加入0.2mol/L的乙酸钠缓冲溶液10ml，并加乙酸调节PH值到5～5.5，混合均匀；再加入0.1ml等量的β‑葡萄糖醛甙酶和芳基硫酸酯酶，震荡混合均匀后在35～40℃恒温水浴中水解12～24小时，4000转/min离心5min，将分离所得到的清液转移至50ml离心管中；离心分离后的残渣中加入5ml甲酸，于旋涡混合器上涡旋2min，4000转/min，离心5min，并与所得清液合并；(3)所得清液中加入高氯酸调节PH值到0.5～1.5，混合...

【技术特征摘要】
1.一种分析羊肉中残留兽药的方法，其特征在于，至少包括如下步骤：(1)将羊肉样品绞碎，于匀浆机中匀浆；(2)称取5.00g匀浆好的羊肉样品于50ml离心管中，加入0.2mol/L的乙酸钠缓冲溶液10ml，并加乙酸调节PH值到5～5.5，混合均匀；再加入0.1ml等量的β-葡萄糖醛甙酶和芳基硫酸酯酶，震荡混合均匀后在35～40℃恒温水浴中水解12～24小时，4000转/min离心5min，将分离所得到的清液转移至50ml离心管中；离心分离后的残渣中加入5ml甲酸，于旋涡混合器上涡旋2min，4000转/min，离心5min，并与所得清液合并；(3)所得清液中加入高氯酸调节PH值到0.5～1.5，混合均匀10～20min，然后4000转/min离心5min后浓缩所得清液，并将其转移至50ml离心管中；(4)第三步中所得的清液中加入氢氧化钠，调节其PH值到9.5～11.5，并且加入1.0g盐析剂，在漩涡混合器上涡旋混合5min，再加入适量提取剂提取，并且提取液4000转/min离心5min；(5)于所得提取液中加入10ml正己烷涡旋混合5min，离心分离，所得的清液中依次加入100mg的C18吸附剂和100mg乙二胺-N-丙基硅烷，在漩涡混合器上涡旋混合5min，并且4000转/min离心5min后，清液在40℃和氮气氛围的条件下吹干，并用1ml体积比为1：9的甲醇和0.1wt％甲酸水混合溶液定容，过滤，以备测试；(6)分别称取适量的各兽药标准品用甲酸溶解，并用甲醇定容，配成浓度为100μg/mL的标准储备液；分别吸取所得标准储备液置于一个50ml容量瓶中，配成1.0μg/mL的混合标准工作液；(7)对空白的羊肉样品按照上述(1)～(5)步骤的方式进行处理，定容得到空白样品基质溶液；取适量的混合标准工作液，浓缩吹干，并用空白样品基质溶液溶解，配成浓度为1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、25.0μg/mL、100.0μg/mL的系列基质匹配标准溶液；(8)采用UPLC-MS/MS法对基质匹配标准溶液进行测试得到标准曲线，并求得其浓度的线性相关性，再用同样的方法对待测样品进行测试与标准曲线对比得到目标兽药的残留量。2.如权利要求1所述的分析羊肉中残留兽药的方法，其特征在于，第(4)步骤中所述的提取剂提取过程包括如下步骤；A)对调节PH值到9.5～11.5，并且添加盐析剂离心分离所得的清液中加入10ml第一类提取剂，匀质15～30min，离心分离，过滤取上层清液；对离心分离所得的样品残渣按照此步骤进行2～3次重复提取，并将所得的清液合并共混得到X1提取液；B)将A步骤中所得的X1提取液浓缩并转移至50ml离心管中，加入10ml第二类提取剂，匀质15～30min，离心分离，过滤取上层清液；对离心分离所得的样品残渣按照此步骤进行2～3次重复提取，并将所得的清液合并共混得到X2提取液；C)将B步骤中所得的X2提取液浓缩并转移至50ml离心管中，加入10ml第三类提取剂，匀质15～30min，离心分离，过滤取上层清液；对离心分离所得的样品残渣按照此步骤进行2～3次重复提取，并将所得的清液共混得到X3提取液。3.如权利要求2所述的分析羊肉中残留兽药的方法，其特征在于，所述第一类提取剂选自甲酸、乙酸、二甲基亚砜中的一种或多种。4.如权利要求2所述的分析羊肉中残留兽药的方法，其特征在于，所述第二类提取剂为四氢呋喃和/或乙腈。5.如权利要求2所述的分析羊肉中残留兽药的方法，其特征在于，所述第三类提取剂选自甲醇、乙酸乙酯、异丙醇中的一种或多种。6.如权利要求1所述的分析羊肉中残留兽药的...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡波，高维明，宫平，魏佩玲，周卫东，吕雪峰，
申请(专利权)人：新疆畜牧科学院畜牧业质量标准研究所新疆维吾尔自治区种羊与羊毛羊绒质量安全监督检验中心，
类型：发明
国别省市：新疆,65