一株高效异源表达Disorazole Z的工程菌株和构建该菌株的基因簇及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种Disorazole Z的生物合成基因簇dis427，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明专利技术还公开了利用所述dis427基因簇构建的高效异源表达Disorazole Z的工程菌株DK1622::Km‑Ptet‑dis427，是利用黄色粘球菌Myxococcus xanthus DK1622为出发菌株，通过转座的方法在其基因组上整合了Disorazole Z的生物合成基因簇dis427获得。本发明专利技术还公开了工程菌株DK1622::Km‑Ptet‑dis427在制备Disorazole Z中的应用。本发明专利技术所提供的Disorazole Z生物合成途径及其在异源宿主中的高效表达方法为开发新的抗肿瘤或抗感染药物、降低发酵生产成本具有重要的研究和应用价值。

An engineered strain with highly efficient heterologous expression of Disorazole Z and gene cluster for construction of this strain and its application

The invention discloses a biosynthetic gene cluster dis427 of Disorazole Z, and its nucleotide sequence is shown as SEQ ID ID No.1. The invention also discloses an engineering strain DK1622:, which is constructed by the dis427 gene cluster to express the Disorazole Z, Km Ptet dis427, which is a starting strain using the Myxococcus of the yellow sticky Myxococcus xanthus xanthus DK1622, and the biosynthesis gene cluster of Disorazole Z is obtained by the transposing method. . The invention also discloses the application of the engineering strain DK1622:: Km Ptet Ptet dis427 in the preparation of Disorazole Z. The Disorazole Z biosynthesis pathway and the efficient expression in the heterologous host provided by this invention have important research and application value for developing new antitumor or anti infective drugs and reducing the cost of fermentation production.

【技术实现步骤摘要】
一株高效异源表达DisorazoleZ的工程菌株和构建该菌株的基因簇及其应用
本专利技术属于微生物基因资源和生物合成
，具体涉及一种DisorazoleZ生物合成基因簇和利用该基因簇构建的一株高效异源表达DisorazoleZ的工程菌株及其应用。
技术介绍
Disorazoles是最早由Jansen等人于1994年从纤维堆囊菌SorangiumcellulosumSoce12的发酵液中分离得到的结构新颖的大环双内酯类化合物。至今，在SorangiumcellulosumSoce12中已经发现29个Disorazoles衍生物，分别为DisorazoleA1至DisorazoleI。研究表明，Disorazoles类化合物能够抑制微管蛋白聚合，促进微管蛋白解聚，从而干扰细胞分裂，诱导细胞凋亡，对于多种肿瘤细胞系，包括多药耐药肿瘤细胞系均具有很强的生物活性，是一类新型的细胞微管抗稳定剂。DisorazoleAl和DisorazoleC1是目前研究较多的组分，对于多种人类肿瘤细胞系，包括多药耐药肿瘤细胞系，其半抑制浓度IC50在pM至nM水平。近期研究发现，Disorazoles类化本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种Disorazole Z的生物合成基因簇，其特征在于：该基因簇命名为dis427，其包含Disorazole Z生物合成所必需的编码聚酮合成酶及非核糖体多肽合成酶的四个核心基因disA，disB，disC和disD，一个假设蛋白基因orf4和一个后修饰基因orf6；该基因簇来源于纤维堆囊菌Sorangium cellulosum So ce 427，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种DisorazoleZ的生物合成基因簇，其特征在于：该基因簇命名为dis427，其包含DisorazoleZ生物合成所必需的编码聚酮合成酶及非核糖体多肽合成酶的四个核心基因disA，disB，disC和disD，一个假设蛋白基因orf4和一个后修饰基因orf6；该基因簇来源于纤维堆囊菌SorangiumcellulosumSoce427，其核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。2.一株高效异源表达DisorazoleZ的工程菌株，其特征在于：该菌株命名为工程菌株DK1622::Km-Ptet-dis427，其基因型为：MyxococcusxanthusDK1622，kanamycinresistance，tetracyclineinduciblePtetpromoter,disA,disB,disC,orf4,disDandorf6，是利用黄色粘球菌MyxococcusxanthusDK1622为出发菌株，通过转座的方法在其基因组上整合了DisorazoleZ的生物合成基因簇dis427获得。3.权利要求2所述高效异源表达DisorazoleZ的工程菌株的构建方法，步骤是：(1)利用Red/ETDNA重组技术将DisorazoleZ的生物合成基因簇(dis427)直接克隆至p15A-cm-tetR-tetO-hyg-ccdB载体上...

【专利技术属性】
技术研发人员：张友明，李瑞娟，高运生，涂强，王宗杰，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：山东,37