【技术实现步骤摘要】
PttKNI基因在碎米荠中的遗传转化方法
本专利技术涉及一种PttKNl基因在碎米荠中的遗传转化方法，属于生物遗传
。
技术介绍
同源异型盒基因(homeobox genes)编码同源异型盒蛋白，能够结合各自祀基因的顺式调节区域，从而作为转录因子在生物的发育过程中扮演重要作用。从酵母、真菌到动植物，同源异型盒基因已经被大量地分离出来并进行了广泛地研究；并且发现，同源异型盒蛋白在生物的形态建成中发挥着重要作用。在植物中第一个被分离的同源异型盒基因是玉米中的KNOTTEDl(ZmKNl)基因，在顶端分生组织(shoot apical meristem, SAM)中发挥作用。ZmKNl获得性功能突变体/异源表达植株的研究表明，ZmKNl抑制了叶的分化并在叶脉附近形成了瘤状结构。而功能缺失突变体的研究则表明ZmKNl对于顶端分生组织的形成和维持是必需的。植物中存在多种同源异型盒基因，比如拟南芥中的KNOX(KNOTTEDl-like homeoboxgenes) > WOX (WUSCHEL-like homeobox genes) > BE...
【技术保护点】
一种PttKN1基因在碎米荠中的遗传转化方法，其特征在于：具体包括以下步骤：(1)准备植物材料与载体：将春化过的碎米荠种子种于蛭石∶泥炭土∶珍珠岩按照1∶1∶1的混合基质中，覆保鲜膜，两天后光照，三天后揭膜；选取生长健壮，有较多未开放花蕾的碎米荠植株备用；培养条件：相对湿度80％，恒温20～24℃，光照强度80～200μmol/M2S，16h光照培养；(2)采用农杆菌介导的花絮浸染法对碎米荠的转化：采用花序浸染法对碎米荠进行遗传转化；首先挑取单菌落，接种于YEB+25mg/LKm+75mg/LCb液体培养基中，于27℃、180rpm培养过夜；将菌液倒入无菌带盖离心管内，盖上...
【技术特征摘要】
1.一种PttKNl基因在碎米荠中的遗传转化方法，其特征在于:具体包括以下步骤: (1)准备植物材料与载体:将春化过的碎米荠种子种于蛭石:泥炭土:珍珠岩按照1:1:1的混合基质中，覆保鲜膜，两天后光照，三天后揭膜；选取生长健壮，有较多未开放花蕾的碎米荠植株备用；培养条件:相对湿度80%，恒温20~24°C，光照强度80~.200 μ mo I/M2S, 16h 光照培养； (2)采用农杆菌介导的花絮浸染法对碎米荠的转化:采用花序浸染法对碎米荠进行遗传转化；首先挑取单菌落，接种于YEB+25mg/LKm+75mg/LCb液体培养基中，于27°C、180rpm培养过夜；将菌液倒入无菌带盖离心管内，盖上盖子，用石蜡膜封口，4000rpm于室温下离心10分钟；弃上清，用无菌1/2MS 液体培养基(含5mg/L BA或/和0.01% Silwet L-77)稀释菌体至OD6tltl为0.3 ;在开花期，将未开放花序浸入装有上述液体的I升塑料烧杯中，浸泡5min ;然后用黑色塑料袋套住花序保湿，24h后去袋，恢复正常光照培养；生长3~5周以后收种； (3)抗性植株筛选和表型观察:将收取的碎米荠种子先在4°C下春化48h，再分别用70%乙醇浸泡Imin, 0.1 %升萊浸泡8min,无菌蒸懼水冲洗三次；然后接种于含有100mg/L卡那的MS培养基上，于25°C下光照培养；45天左右，将具有卡那霉素抗性的碎米荠植株移栽到蛭石:泥炭土:珍珠岩按1:1:1的混合基质中，并覆盖塑料薄膜，弱光生长2-3天后让其在自然条件下生长；对各时期植株的表型仔细观察比较，并用照相； (4)RT-PCR鉴定:称取0.1g叶片，于液氮中充分冷冻后研磨后移入2ml离心管中，加入Iml Trizol (Invitrogen),震荡混匀，室温下静置5分钟;再加入0.2ml氯...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐全乐，郭瑞军，胡鑫，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61
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