一种猴子单倍体神经干细胞的获得方法技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域，公开了一种猴子单倍体神经干细胞的获得方法，在原有普通猴子干细胞培养基的基础上进行优化培养，用0.05％的胰蛋白酶/EDTA处理单倍体胚胎干细胞克隆，成为单细胞状态，用EB培养基进行悬浮培养，形成拟胚体球；从分化第一天开始，培养基中要加ROCK抑制剂Y‑27632来抑制细胞凋亡；在第五天EB培养基换为神经诱导培养基；将初步形成神经外胚层的EB球种在基底胶铺底的培养皿中，加入神经诱导培养基进行分化；挑取神经花环，种在30μg/ml多鸟氨酸和3μg/ml层粘连蛋白铺底的培养皿中；培养14天后，进行流式细胞术，分选单倍体细胞。本发明专利技术第一次实现了在体外获得猴子单倍体神经干细胞，并具有向神经下游方向分化的能力。

A method for obtaining monkey haploid neural stem cells

The invention belongs to the biological engineering technical field, and discloses a method for obtaining the haploid neural stem cells of the monkey. On the basis of the original common monkey stem cell culture medium, 0.05% trypsin /EDTA is used to treat haploid embryonic stem cell clone and become a single cell state, and the suspension culture is carried out with the EB medium. From the first day of differentiation, the ROCK inhibitor Y 27632 was used to inhibit the apoptosis; the EB culture medium was replaced by the nerve inducible medium on the fifth day, and the neuroectoderm species was initially formed in the culture dish of the base glue paving, and the nerve induced medium was added to the differentiation; pick up the God. Through a wreath, it was planted in a Petri dish with 30 uh g/ml of ornithine and 3 - g/ml laminin. After 14 days, the haploid cells were selected by flow cytometry. The invention realizes the monkey haploid neural stem cells in vitro and has the ability to differentiate into the downstream nerve.

【技术实现步骤摘要】
一种猴子单倍体神经干细胞的获得方法
本专利技术属于生物工程
，尤其涉及一种猴子单倍体神经干细胞的获得方法。
技术介绍
由于猴子单倍体胚胎干细胞系很难建系(目前文献报道的仅有一个课题组建立该细胞系)。猴子单倍体胚胎干细胞分化能力较弱，而且在单倍体神经分化过程中会存在严重的二倍化现象。所以目前尚未有报道证明能通过体外分化的方法得到猴子单倍体神经干细胞。综上所述，现有技术存在的问题是：通过体外分化的方法得到猴子单倍体神经干细胞数据技术空白。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种猴子单倍体神经干细胞的获得方法。由于单倍体神经干细胞只有一套基因组，在遗传学筛选过程中可以避免隐性基因性状被遮盖的情况。同时由于神经干细胞有分化成下游神经元和神经胶质细胞的能力，所以该细胞系可以用于各种神经疾病靶点基因的筛选。是非常良好的筛选工具。起初用正常的灵长类干细胞培养液培养并分化发现猴子单倍体胚胎干细胞的神经分化能力很弱，分化到神经方向的细胞很少。于是就大胆猜测可能是由于单倍体只有一半基因组，控制多能性的蛋白剂量不够。于是就参考前人发表的工作，提升猴子单倍体胚胎干细胞的多能性。保障向神本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猴子单倍体神经干细胞的获得方法，其特征在于，所述猴子单倍体神经干细胞的获得方法包括以下步骤：步骤一，在原有普通猴子干细胞培养液中加入10ng/ml的人白血病抑制因子，0.5μM的PD0325901，3μM的CHIR99021，10μM的SB203580和10μM的SP600125。步骤二，用0.05％的胰蛋白酶/EDTA处理单倍体胚胎干细胞克隆，成为单细胞状态，用EB培养基进行悬浮培养，形成拟胚体球；步骤三，从分化第一天开始，培养基中要加ROCK抑制剂Y‑27632来抑制细胞凋亡；在第五天EB培养基换为神经诱导培养基；步骤四，将初步形成神经外胚层的EB球种在基底胶铺底的培养皿中，加入神经诱...

【技术特征摘要】
1.一种猴子单倍体神经干细胞的获得方法，其特征在于，所述猴子单倍体神经干细胞的获得方法包括以下步骤：步骤一，在原有普通猴子干细胞培养液中加入10ng/ml的人白血病抑制因子，0.5μM的PD0325901，3μM的CHIR99021，10μM的SB203580和10μM的SP600125。步骤二，用0.05％的胰蛋白酶/EDTA处理单倍体胚胎干细胞克隆，成为单细胞状态，用EB培养基进行悬浮培养，形成拟胚体球；步骤三，从分化第一天开始，培养基中要加ROCK抑制剂Y-27632来抑制细胞凋亡；在第五天EB培养基换为神经诱导培...

【专利技术属性】
技术研发人员：帅领，王海松，张文豪，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：天津,12