一种通过内皮细胞来源的外泌体扩增神经干细胞的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用内皮细胞来源的外泌体扩增神经干细胞的方法，使用无血清培养基培养P3‑P4代的人原代内皮细胞72小时后，收集培养基上清液；将培养上清液离心后，再经滤膜过滤，加入终浓度为12％的聚乙二醇6000并混匀；混匀后12小时进行转速为12000g/分钟的1小时离心，从而得到外泌体；将人原代血管内皮细胞来源的外泌体加入小鼠神经干细胞中，共孵育12小时,培养5天后，神经干细胞自我更新及增殖能力增强；本发明专利技术的方法操作简便，耗时短，并能维持NSCs的正常干细胞特性与多向分化潜能，为以NSCs为细胞来源的干细胞替代疗法提供充足的细胞量。

【技术实现步骤摘要】
一种通过内皮细胞来源的外泌体扩增神经干细胞的方法
：本专利技术属于生物医药领域，涉及一种内皮细胞的外泌体及其扩增神经干细胞的方法，尤其涉及一种人原代脐静脉内皮细胞来源的外泌体在小鼠神经干细胞扩增方面的应用。
技术介绍
：经过近十年的囊泡研究，外泌体等是细胞间普遍的通信方式。几乎生物体中所有的细胞都可以释放外泌体，细胞释放的外泌体或者被周围细胞摄取，或者在各种液体，如血液、尿液、脑脊液和母乳中循环最终被远端的细胞摄取。外泌体来自于内涵体，是由脂质包裹的一个内容物载体，可运输蛋白质、核酸和脂质等生物活性分子。核酸，蛋白和脂质被包装到外泌体后经多囊泡体与细胞膜融合后释放，外泌体接触于受体细胞表面，接触细胞的外泌体或者用其膜蛋白刺激细胞上相应受体，或者与细胞膜融合进入细胞，或者由胞吞途径进入内吞小室，由此向受体细胞传递蛋白，脂质与核酸，外泌体携带的蛋白质部分具有其来源细胞的特异性，也有部分是外泌体所保守的如胞浆蛋白，内体蛋白等。外泌体携带的核酸包括mRNA，microRNA，rRNA，lncRNA以及一些DNA，并且这些核酸成份会受到细胞自身状态的影响而改变。外泌体产生过程大致如下：质膜向内本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种体外扩增神经干细胞的方法，其特征在于：(1)使用无血清培养基培养P3‑P4代的人原代脐静脉内皮细胞，收集培养基上清液；(2)将培养上清液离心，再经滤膜过滤及聚乙二醇6000混匀后，12000g/分钟离心1小时，从而得到外泌体；(3)将外泌体加入小鼠神经干细胞中，浓度为10μg/ml，孵育时间为12小时，培养5天，实现体外扩增神经干细胞。

【技术特征摘要】
1.一种体外扩增神经干细胞的方法，其特征在于：(1)使用无血清培养基培养P3-P4代的人原代脐静脉内皮细胞，收集培养基上清液；(2)将培养上清液离心，再经滤膜过滤及聚乙二醇6000混匀后，12000g/分钟离心1小时，从而得到外泌体；(3)将外泌体加入小鼠神经干细胞中，浓度为10μg/ml，孵育时间为12小时，培养5天，实现体外扩增神经干细胞。2.根据权利要求1所述方法，其特征在于：所述的人原代脐静脉内皮细胞的外泌体加至小鼠神经干细胞后的自我更新及增殖能力增强，凋亡比例减少。其自我更新指标为：相对于对照组，外泌体处理组神经干细胞产生的神经克隆球数目增多；神经干细胞内的细胞增殖因子Ki67经实时定量PCR检测后表达水平增高；神经干细胞经EdU掺入染色后阳性增殖信号比例上升；神经干细胞TUNEL染色阳性凋亡信号比例下降。3.一种来源于人脐静脉内皮细胞的外泌体，其特征在于：所述的人脐静脉内皮细胞的外泌体经过透射电子显微镜可观察到呈“杯状”的典型外泌体形态，并且直径介于20nm至200nm之间，另外经过蛋白印迹实验检测外泌体抗原CD9、Alix和CD31均为阳性。4.如权利要求3所述外泌体，其制备方法的特征在于：(1)使用无血清培养基培养P3-P4代的人原代脐静脉内皮细胞72小时...

【专利技术属性】
技术研发人员：张一哲，郑敏化，韩骅，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61