富马酸比索洛尔胶囊的微生物限度检查方法技术

本发明专利技术属于药物检测技术领域，具体涉及一种富马酸比索洛尔胶囊的微生物限度检查方法。所述的富马酸比索洛尔胶囊的微生物限度检查方法，步骤如下：(1)菌液制备；(2)供试液制备：取富马酸比索洛尔胶囊供试品10g，置于无菌均质袋中，加100mL的45℃pH7.0无菌氯化钠‑蛋白胨缓冲液，用均质器拍打1min，摇匀，作为1：10的供试液；(3)需氧菌、霉菌和酵母菌总数的测定；(4)大肠埃希菌的检查。本发明专利技术能够防止样品在检验过程中假阴性的出现，降低患者用药安全风险。

Microbial limit test of Bisoprolol Fumarate Capsules

The invention belongs to the field of drug detection technology, in particular to a microbial limit test method for Bisoprolol Fumarate Capsules. The method of microbial limit inspection of Bisoprolol Fumarate Capsules is as follows: (1) preparation of bacterial liquid; (2) preparation of test liquid: take Bisoprolol Fumarate Capsules test product 10g, put in aseptic homogeneous bag, add 100mL 45 C pH7.0 aseptic Sodium Chloride Peptone slow punching solution, beat 1min with homogenizer, shake well, as 1: 10 of the test solution; (3) determination of aerobic bacteria, molds and yeasts; (4) detection of E. coli. The invention can prevent the occurrence of false negatives in the examination process and reduce the safety risk of patients.

【技术实现步骤摘要】
富马酸比索洛尔胶囊的微生物限度检查方法
本专利技术属于药物检测
，具体涉及一种富马酸比索洛尔胶囊的微生物限度检查方法。
技术介绍
富马酸比索洛尔，为β受体阻滞剂，对支气管和血管平滑肌的β1-受体有高亲和力，从而使血管扩张，血压降低。适用于高血压、冠心病、及中度至重度慢性稳定性心力衰竭等症。富马酸比索洛尔胶囊适用于原发性高血压的治疗，是富马酸比索洛尔药物中比较常用的一种。非无菌药品的微生物限度标准是基于药品的给药途径和对患者健康潜在的危害以及中药的特殊性而制订的。微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。关于富马酸比索洛尔胶囊的微生物限度检查方法至今尚未有报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种富马酸比索洛尔胶囊的微生物限度检查方法，在微生物限度检查过程中避免假阴性的现象，降低患者用药安全风险。本专利技术所述的富马酸比索洛尔胶囊的微生物限度检查方法，步骤如下：(1)菌液制备分别制备金黄色葡萄球菌菌悬液、铜绿假单胞菌菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液、白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液；(2)供试液制备取富马酸比索洛尔胶囊供试品10g，置于无菌均质袋中，加100mL的45℃pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，用均质器拍打1min，摇匀，作为1：10的供试液；(3)需氧菌、霉菌和酵母菌总数的测定①供试品组取1:10的供试液1mL注皿，倒入胰酪大豆琼脂培养基，平皿倒置30～35℃培养5天；取1:10的供试液1mL注皿，倒入沙氏葡萄糖琼脂培养基，平皿倒置20～25℃培养7天；②菌液组取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液9.9mL和0.1mL菌液混匀，取1mL注皿；其中，金黄色葡萄球菌菌悬液、铜绿假单胞菌菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液、白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液分别加入到胰酪大豆胨琼脂培养基中，平皿倒置30～35℃培养3天；白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液分别加入到沙氏葡萄糖琼脂培养基中，平皿倒置20～25℃培养5天；③试验组取1:10的供试液9.9mL和0.1mL试验菌混匀，取1mL注皿，其中，金黄色葡萄球菌菌悬液、铜绿假单胞菌菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液、白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液分别加入到胰酪大豆胨琼脂培养基中，平皿倒置30～35℃培养3天；白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液分别加入到沙氏葡萄糖琼脂培养基中，平皿倒置20～25℃培养5天；④各平皿培养后进行需氧菌、霉菌和酵母菌总数的测定试验组菌落数减去供试品组菌落数的值与菌液组菌落数的比值在0.5～2范围内即为合格；(4)大肠埃希菌的检查①菌液制备：制备大肠埃希菌菌悬液；②检查方法：供试品组：取1：10的供试液10mL，加入100mLTSB培养基中，混匀，30～35℃培养18～72小时，得到培养物；取上述培养物1mL接种至100mL麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48小时；取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时；结果判断若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判定供试品组未检出大肠埃希菌；试验组：取1：10的供试液10mL及不大于100cfu大肠埃希菌加入100mLTSB培养基中，混匀，30～35℃培养18～72小时，得到培养物；取上述培养物1mL接种至100mL麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48小时；取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时；结果判断若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判定试验组未检出大肠埃希菌；阳性对照组：取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10mL及不大于100cfu大肠埃希菌加入100mLTSB培养基中，混匀，30～35℃培养18～72小时，得到培养物；取上述培养物1mL接种至100mL麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48小时；取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时；结果判断若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判定阳性对照组未检出大肠埃希菌；阴性对照组：取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10mL加入100mLTSB培养基中，混匀，30～35℃培养18～72小时，得到培养物；取上述培养物1mL接种至100mL麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48小时；取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时；结果判断若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判定阴性对照组未检出大肠埃希菌。步骤(1)中金黄色葡萄球菌菌悬液的制备方法是取经30～35℃培养18～24小时的金黄色葡萄球菌新鲜培养物，用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1mL含菌数为5000～10000cfu的菌悬液。步骤(1)中铜绿假单胞菌菌悬液的制备方法是取经30～35℃培养18～24小时的铜绿假单胞菌新鲜培养物，用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1mL含菌数为5000～10000cfu的菌悬液。步骤(1)中枯草芽孢杆菌菌悬液的制备方法是取经30～35℃培养18～24小时的枯草芽孢杆菌新鲜培养物，用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1mL含菌数为5000～10000cfu的菌悬液。步骤(1)中白色念珠菌菌悬液的制备方法是取经20～25℃培养2～3天的白色念珠菌新鲜培养物，用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1mL含菌数为5000～10000cfu的菌悬液。步骤(1)中黑曲霉孢子悬液的制备方法是取经20～25℃培养5～7天的黑曲霉的新鲜培养物，加3～5mL0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1mL含孢子数为5000～10000cfu的孢子悬液。步骤(4)中大肠埃希菌菌悬液的制备方法是取经30～35℃培养18～24小时的大肠埃希菌新鲜培养物，用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1mL含菌数为5000～10000cfu的菌悬液。本专利技术与现有技术相比，具有如下有益效果：本专利技术能够防止样品在检验过程中假阴性的出现，降低患者用药安全风险。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术做进一步描述。实施例1(1)菌液制备①金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌取经30～35℃培养18～24小时的铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌新鲜培养物，用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1mL含菌数为5000～10000cfu的菌悬液。②白色念珠菌取经20～25℃培养2～3天的白色念珠菌新鲜培养物，用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1mL含菌数为5000～10000cfu的菌悬液。③黑曲霉取经20～25℃培养5～7天的黑曲霉的新鲜培养物，加3～5mL0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1mL含孢子数为5000～10000cfu的孢子悬液。(2)供试液制备取富马酸比索洛尔胶囊供试品10g，置于无菌均质袋中，加100mL的45℃pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，用均质器拍打1min，摇匀，作为1：10的供试液。(3)需氧菌、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种富马酸比索洛尔胶囊的微生物限度检查方法，其特征在于步骤如下：(1)菌液制备分别制备金黄色葡萄球菌菌悬液、铜绿假单胞菌菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液、白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液；(2)供试液制备取富马酸比索洛尔胶囊供试品10g，置于无菌均质袋中，加100mL的45℃pH7.0无菌氯化钠‑蛋白胨缓冲液，用均质器拍打1min，摇匀，作为1：10的供试液；(3)需氧菌、霉菌和酵母菌总数的测定①供试品组取1:10的供试液1mL注皿，倒入胰酪大豆琼脂培养基，平皿倒置30～35℃培养5天；取1:10的供试液1mL注皿，倒入沙氏葡萄糖琼脂培养基，平皿倒置20～25℃培养7天；②菌液组取pH7.0无菌氯化钠‑蛋白胨缓冲液9.9mL和0.1mL菌液混匀，取1mL注皿；其中，金黄色葡萄球菌菌悬液、铜绿假单胞菌菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液、白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液分别加入到胰酪大豆胨琼脂培养基中，平皿倒置30～35℃培养3天；白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液分别加入到沙氏葡萄糖琼脂培养基中，平皿倒置20～25℃培养5天；③试验组取1:10的供试液9.9mL和0.1mL试验菌混匀，取1mL注皿，其中，金黄色葡萄球菌菌悬液、铜绿假单胞菌菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液、白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液分别加入到胰酪大豆胨琼脂培养基中，平皿倒置30～35℃培养3天；白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液分别加入到沙氏葡萄糖琼脂培养基中，平皿倒置20～25℃培养5天；④各平皿培养后进行需氧菌、霉菌和酵母菌总数的测定试验组菌落数减去供试品组菌落数的值与菌液组菌落数的比值在0.5～2范围内即为合格；(4)大肠埃希菌的检查①菌液制备：制备大肠埃希菌菌悬液；②检查方法：供试品组：取1：10的供试液10mL，加入100mLTSB培养基中，混匀，30～35℃培养18～72小时，得到培养物；取上述培养物1mL接种至100mL麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48小时；取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时；结果判断若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判定供试品组未检出大肠埃希菌；试验组：取1：10的供试液10mL及不大于100cfu大肠埃希菌加入100mLTSB培养基中，混匀，30～35℃培养18～72小时，得到培养物；取上述培养物1mL接种至100mL麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48小时；取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时；结果判断若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判定试验组未检出大肠埃希菌；阳性对照组：取pH7.0无菌氯化钠‑蛋白胨缓冲液10mL及不大于100cfu大肠埃希菌加入100mLTSB培养基中，混匀，30～35℃培养18～72小时，得到培养物；取上述培养物1mL接种至100mL麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48小时；取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时；结果判断若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判定阳性对照组未检出大肠埃希菌；阴性对照组：取pH7.0无菌氯化钠‑蛋白胨缓冲液10mL加入100mLTSB培养基中，混匀，30～35℃培养18～72小时，得到培养物；取上述培养物1mL接种至100mL麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48小时；取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时；结果判断若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判定阴性对照组未检出大肠埃希菌。...

【技术特征摘要】
1.一种富马酸比索洛尔胶囊的微生物限度检查方法，其特征在于步骤如下：(1)菌液制备分别制备金黄色葡萄球菌菌悬液、铜绿假单胞菌菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液、白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液；(2)供试液制备取富马酸比索洛尔胶囊供试品10g，置于无菌均质袋中，加100mL的45℃pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，用均质器拍打1min，摇匀，作为1：10的供试液；(3)需氧菌、霉菌和酵母菌总数的测定①供试品组取1:10的供试液1mL注皿，倒入胰酪大豆琼脂培养基，平皿倒置30～35℃培养5天；取1:10的供试液1mL注皿，倒入沙氏葡萄糖琼脂培养基，平皿倒置20～25℃培养7天；②菌液组取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液9.9mL和0.1mL菌液混匀，取1mL注皿；其中，金黄色葡萄球菌菌悬液、铜绿假单胞菌菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液、白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液分别加入到胰酪大豆胨琼脂培养基中，平皿倒置30～35℃培养3天；白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液分别加入到沙氏葡萄糖琼脂培养基中，平皿倒置20～25℃培养5天；③试验组取1:10的供试液9.9mL和0.1mL试验菌混匀，取1mL注皿，其中，金黄色葡萄球菌菌悬液、铜绿假单胞菌菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液、白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液分别加入到胰酪大豆胨琼脂培养基中，平皿倒置30～35℃培养3天；白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液分别加入到沙氏葡萄糖琼脂培养基中，平皿倒置20～25℃培养5天；④各平皿培养后进行需氧菌、霉菌和酵母菌总数的测定试验组菌落数减去供试品组菌落数的值与菌液组菌落数的比值在0.5～2范围内即为合格；(4)大肠埃希菌的检查①菌液制备：制备大肠埃希菌菌悬液；②检查方法：供试品组：取1：10的供试液10mL，加入100mLTSB培养基中，混匀，30～35℃培养18～72小时，得到培养物；取上述培养物1mL接种至100mL麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48小时；取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时；结果判断若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判定供试品组未检出大肠埃希菌；试验组：取1：10的供试液10mL及不大于100cfu大肠埃希菌加入100mLTSB培养基中，混匀，30～35℃培养18～72小时，得到培养物；取上述培养物1mL接种至100mL麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48小时；取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时；结果判断若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判定试验组未检出大肠埃希菌；阳性对照组：取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10mL及不大于100cfu大肠埃希菌加...

【专利技术属性】
技术研发人员：张静，翟卫东，
申请(专利权)人：北京朗依制药有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11