The invention discloses a D - ALCONE 3 - epi - EPI mutant with improved thermal stability, which belongs to the field of enzyme engineering technology. In the future, the invention deriving from the D of the microorganism Dorea sp. and the alalone isomerase as a parent and constructed the mutant enzyme F154Y/E191D/I193F. The thermal stability and structural stability of the mutant were improved: the t1/2 value of 50 and 60 C reached 20.47 and 3.09h, respectively, and the Tm value reached 74.18 degrees C. The optimum temperature of multipoint mutants increased to 75 C, which was 5 degrees higher than that of wild-type mutant. Under the optimum conditions, the relative enzyme activity of the enzyme catalyzed substrate, D, to produce D alalosin was increased by 3.8%. This discovery has important research value for the industrialization of the preparation of D alalosin.
【技术实现步骤摘要】
一种热稳定性提高的D-阿洛酮糖3-差向异构酶突变体
本专利技术涉及一种热稳定性提高的D-阿洛酮糖3-差向异构酶突变体，属于酶工程
技术介绍
D-阿洛酮糖(D-Allulose)是稀有糖家族的重要成员，是一种新型的低能量甜味剂。D-阿洛酮糖属于己酮糖，是一种六碳糖，是D-果糖的C-3差向异构体。因具有较高的甜度和较低的能量，D-阿洛酮糖被认为是一种理想的甜味剂和蔗糖的有效替代品。此外，因其独特的生理功能，D-阿洛酮糖在临床医学中具有潜在较大的应用价值，例如治疗肥胖症、糖尿病、高血压、高脂血症和动脉粥样硬化等疾病。此外，D-阿洛酮糖还可以通过添加辅料进行喷雾干燥，这将有助于肺部药物给送。除此外，有文献报道D-阿洛酮糖还是合成其他稀有糖的重要材料，在D-阿卓糖、D-阿洛糖和D-塔洛糖醇的生物生产中起着至关重要的作用。然而，D-阿洛酮糖在自然界中存在量极其稀少，而且化学法合成困难，所以D-阿洛酮糖的生物合成法成为了研究的热点。根据Izumoring稀有糖转化策略，酮糖3-差向异构酶在D-阿洛酮糖生物转化中起着不可替代的作用——催化D-果糖和D-阿洛酮糖在C-3位...
【技术保护点】
一种D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶的突变体酶，其特征在于，是将来源于微生物Dorea sp.的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶的154位的苯丙氨酸突变为络氨酸Tyr，191位的谷氨酸突变为天冬氨酸Asp，同时193位的异亮氨酸突变为苯丙氨酸Phe。
【技术特征摘要】
1.一种D-阿洛酮糖3-差向异构酶的突变体酶，其特征在于，是将来源于微生物Doreasp.的D-阿洛酮糖3-差向异构酶的154位的苯丙氨酸突变为络氨酸Tyr，191位的谷氨酸突变为天冬氨酸Asp，同时193位的异亮氨酸突变为苯丙氨酸Phe。2.根据权利要求1所述的一种D-阿洛酮糖3-差向异构酶的突变体酶，其特征在于，编码所述D-阿洛酮糖3-差向异构酶的突变体酶的基因序列如SEQIDNo:3所示，突变体酶的氨基酸序列如SEQIDNo:4所示。3.编码权利要求1或2所述突变体酶的基因。4.携带权利要求3所述基因的质粒或细胞。5.一种表达权利要求1或2所述突变体酶的重组大肠杆菌，其特征在于，以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主，转化重组表达质粒pET-22b(+)-F154Y/E191D/I193F。6....
【专利技术属性】
技术研发人员：沐万孟，张文立，黄嘉苇，江波，张涛，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。