一种显著提高亚油酸异构酶在重组大肠杆菌中可溶性表达量的方法技术

本发明专利技术公开了一种显著提高亚油酸异构酶在重组大肠杆菌中可溶性表达量的方法，属于遗传工程领域。本发明专利技术是以重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)(pET‑22b(+)/pai)作为出发菌株，通过共表达分子伴侣蛋白，辅助亚油酸异构酶的折叠，增加亚油酸异构酶的可溶性表达水平，从而增加亚油酸异构酶酶活力的方法。最后优选出分子伴侣系统GroEL‑GroES，使亚油酸异构酶的酶活力提高了56％。

A method to significantly improve the soluble expression of linoleic acid isomerase in recombinant E. coli

The invention discloses a method for significantly improving the soluble expression of linoleic acid isomerase in recombinant Escherichia coli, belonging to the field of genetic engineering. The present invention is based on the recombinant Escherichia coli E.coli BL21 (DE3) (pET 22b (+) /pai) as the starting strain, by CO expressing the molecular chaperone protein, assisting the folding of linoleic isomerase, increasing the soluble expression level of linoleic isomerase, and thus increasing the activity of linoleic isomerase. Finally, a molecular chaperone system, GroEL GroES, was selected to improve the enzyme activity of linoleate isomerase by 56%.

【技术实现步骤摘要】
一种显著提高亚油酸异构酶在重组大肠杆菌中可溶性表达量的方法
本专利技术涉及一种显著提高亚油酸异构酶在重组大肠杆菌中可溶性表达量的方法，属于遗传工程领域。技术背景共轭亚油酸作为一种新发现的营养素，目前在欧美的健康食品界，几乎已经成了预防现代文明病的万灵丹，从抗癌到预防心血管疾病、糖尿病，到体重控制上，几乎是生活在二十一世纪现代人不可或缺的健康食品。目前，共轭亚油酸主要是通过化学方法合成，不仅造成了严重的化工污染，而且合成得到的是多种结构共轭亚油酸的混合物，下游分离成本十分高昂。最近几年，研究的焦点逐渐转移到利用生物法合成专一的共轭亚油酸上来了。目前，利用生物法合成专一性共轭亚油酸的方法是将来源于痤疮丙酸杆菌的亚油酸异构酶在其它宿主中异源表达，再用重组菌直接催化生产共轭亚油酸或者提取胞内表达的酶，用酶催化共轭亚油酸的生产。其中以大肠杆菌为宿主构建工程菌生产亚油酸异构酶时，重组亚油酸异构酶主要以包涵体的形式存在，具有酶活性的可溶性重组蛋白很少，严重限制了利用酶法催化生产共轭亚油酸的进程，提高重组亚油酸异构酶可溶性表达量和酶活力成为利用生物转化法生产共轭亚油酸的关键。分子伴侣是一类能够协本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种显著提高亚油酸异构酶在重组大肠杆菌中可溶性表达量的方法，其特征在于，以重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)(pET‑22b(+)/pai)为出发菌株，导入含有分子伴侣蛋白的质粒pG‑KJE8(dnaK‑dnaJ‑grpE/groES‑groEL)、pGro7(groES‑groEL)、pTf1(tig)、pKJE7(dnaK‑dnaJ‑grpE)和pG‑Tf2(groES‑groEL/tig)。

【技术特征摘要】
1.一种显著提高亚油酸异构酶在重组大肠杆菌中可溶性表达量的方法，其特征在于，以重组大肠杆菌E.coliBL21(DE3)(pET-22b(+)/pai)为出发菌株，导入含有分子伴侣蛋白的质粒pG-KJE8(dnaK-dnaJ-grpE/groES-groEL)、pGro7(groES-groEL)、pTf1(tig)、pKJE7(dnaK-dnaJ-grpE)和pG-Tf2(groES-groEL/tig)。2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，以重组大肠杆菌E.coliBL21(DE3)(pET-22b(+)/pai)作为PAI生产出发菌株，是以E.coliBL21(DE3)为宿主，以启动子T7调控PAI的表达。3.应用权利要求1或2所述重组大肠杆菌发酵产PAI的方法，其特征在于，将重组大肠杆菌37℃、200rpm条件下培养12h，将重组菌株以2％的接种量转入发酵培养基，同时根据需要加入终浓度为1.5mg/mL的L-阿拉伯糖和10ng/mL的四环素诱导分子伴侣表达，37℃、20...

【专利技术属性】
技术研发人员：诸葛斌，黄孟楠，陆信曜，宗红，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32