一种蝼蛄抗菌肽的提取方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种蝼蛄抗菌肽的提取方法及其应用，还提供了一种将蝼蛄抗菌肽用于饲料的配方。针对蝼蛄抗菌肽的提取，其操作主要包括：清洗虫体，注射培养好的微生物，破碎虫体制成匀浆，使用提取剂进行提取并过滤分离，最后得到所需抗菌肽。本发明专利技术使用微生物刺激促进蝼蛄生成抗菌肽，并通过使用特殊物质减少抗菌肽的变质，同时以超声技术加快提取速度，进一步防止抗菌肽变质，使制成的抗菌肽具有较理想的活性。

Extraction method and application of a kind of mole cricket antibacterial peptide

The invention discloses a method for extracting the antibacterial peptide from mole cricket and its application, and also provides a formula for using the antibacterial peptide of mole cricket to feed. In view of the extraction of mole cricket mole cricket antibacterial peptide, its operation mainly includes: cleaning insect body, injecting good microorganism, breaking worm body into homogenate, extracting and filtering separation by using extractor, and finally obtaining the required antibacterial peptide. The invention uses microbial stimulation to promote mole crickets to produce antibacterial peptides, and reduce the deterioration of antimicrobial peptides by using special substances, speed up extraction by ultrasonic technology, and further prevent the metamorphism of antimicrobial peptides, so that the antibacterial peptides have ideal activity.

【技术实现步骤摘要】
一种蝼蛄抗菌肽的提取方法及其应用
本专利技术涉及一种抗菌肽的提取方法，具体涉及一种从蝼蛄中提取抗菌肽的方法。
技术介绍
：昆虫是生物界种类最多、分布最广、数量最大的一类节肢动物，约占整个动物数量的90％。由于其体型小，不具有大型动物体那样的完整复杂的免疫系统与机制，但也进化出了属于昆虫自己的特殊的免疫系统与机制。昆虫体的免疫主要通过应激性的分泌出各种凝集素、抗菌肽、溶菌酶等小分子抗菌物质。抗菌肽是一种从生物体内各组织细胞中提取出的具有一定免疫作用的小分子类物质，具有广谱抗微生物的活性，且不易产生耐药性，稳定性好，是一种优秀的抗菌物质。由于昆虫抗菌肽还具有分子量小，无免疫原型，且对宿主细胞无不良影响等有点，可用于替代耐药性日益严重的抗生素。具体的说，抗菌肽无论对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌还是真菌均有高效的抗菌作用，可以在5min内清除大部分细菌，且对正常细胞不会损伤，也不会产生毒素的累积，具有辅助生物提高其免疫机能的作用。而针对蝼蛄抗菌肽，尚未发现有报道与其提取技术有关。
技术实现思路
：本专利技术的目的在于，提供一种从蝼蛄中提取抗菌肽的方法，以解决上述技术问题。本专利技术提取的蝼蛄抗菌肽，通过在提取过程中防止相关成分变质，从而使成品具有较高的品质，能产生理想的抗菌作用。为实现上述目的，本专利技术提供如下方案：本专利技术提供一种从蝼蛄中提取抗菌肽的方法，包括如下步骤：(1)挑选新鲜的蝼蛄，洗净，晾干备用；(2)将大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在培养基中培养过夜，按照1:3～5体积比的菌液混合，离心收集菌体；(3)取步骤(2)收集的菌体，用灭菌生理盐水重悬沉淀，作为诱导源，用接种针蘸取混合菌液，轻刺入蝼蛄腹部，继续饲养1～3d；(4)取步骤(3)诱导后的蝼蛄置于酒精中浸泡10s，用无菌水冲洗残留的酒精，充分研磨成匀浆；(5)往步骤(4)的匀浆中加入10～20倍体积的乙酸提取液，进行超声提取，过滤，收集滤液；(6)将步骤(5)收集的滤液于0～4℃下静置过夜后，冷冻离心，取滤液在4℃下保存，得抗菌肽。进一步的，所述步骤(4)的酒精浓度为70～75％。进一步的，所述步骤(5)的乙酸提取液含有1～3％的0.01g/L苯甲基硫酰氟。进一步的，所述步骤(5)的超声提取条件：提取时间为40～60min，超声功率为100～250W，超声频率为30～50kHz。进一步的，所述步骤(6)的离心条件：转速为4000～5000r/min，时间为20～30min。进一步的，所述蝼蛄抗菌肽可应用于饲料中。进一步的，所述饲料为鸡饲料。进一步的，本专利技术还提供了一种鸡饲料，包含以下重量份的成分：蝼蛄抗菌肽1～3份、米糠12～20份、豆饼15～25份、酵母粉1～3份、山梨酸钾0.1～0.5份、水30～40份。研究表明，昆虫体在被注射细菌、真菌等各类微生物或者在体壁受伤等的情况下，会应激性的高效合成大量抗菌肽，用以迅速杀死或者防止自身受到进一步侵害。而抗菌肽本身由于是一种热稳定性良好，同时拥有较好水溶性的多肽物质，因此可以通过注射大肠杆菌和枯草芽孢杆菌，随后进一步对蝼蛄虫体进行匀浆制得大量蝼蛄抗菌肽。与现有技术相比，本专利技术具有如下的有益效果：(1)本专利技术的蝼蛄抗菌肽提取方法中，往提取液添加了用于减缓酶促反应的苯甲基硫酰氟，进而减少蛋白质的降解，同时使用了超声提取进行辅助，能减短提取时间的同时减少各成分的损失；(2)本专利技术的提取过程中，利用了大肠杆菌结合枯草芽孢杆菌诱导产生的抗菌肽，且具有活性高的优点；(3)本专利技术还提供了一种将抗菌肽应用在鸡饲料中的配方，使用后能提高鸡的抗病力。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的详细说明。实施例1一种从蝼蛄中提取抗菌肽的方法，包括如下步骤：(1)挑选新鲜的蝼蛄，洗净，晾干备用；(2)将大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在培养基中培养过夜，按照1:4体积比的菌液混合，离心收集菌体；(3)取步骤(2)收集的菌体，用灭菌生理盐水重悬沉淀，作为诱导源，用接种针蘸取混合菌液，轻刺入蝼蛄腹部，继续饲养2d；(4)取步骤(3)诱导后的蝼蛄置于75％酒精中浸泡10s，用无菌水冲洗残留的酒精，充分研磨成匀浆；(5)往步骤(4)的匀浆中加入15倍体积含有2％的0.01g/L苯甲基硫酰氟的乙酸提取液，进行超声提取，提取时间为50min，超声功率为200W，超声频率为40kHz，过滤，收集滤液；(6)将步骤(5)收集的滤液于2.5℃下静置过夜后，冷冻离心25min，转速为4500r/min，取滤液在4℃下保存，得抗菌肽。实施例2一种从蝼蛄中提取抗菌肽的方法，包括如下步骤：(1)挑选新鲜的蝼蛄，洗净，晾干备用；(2)将大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在培养基中培养过夜，按照1:3体积比的菌液混合，离心收集菌体；(3)取步骤(2)收集的菌体，用灭菌生理盐水重悬沉淀，作为诱导源，用接种针蘸取混合菌液，轻刺入蝼蛄腹部，继续饲养1d；(4)取步骤(3)诱导后的蝼蛄置于70％酒精中浸泡10s，用无菌水冲洗残留的酒精，充分研磨成匀浆；(5)往步骤(4)的匀浆中加入10倍体积含有1％的0.01g/L苯甲基硫酰氟的乙酸提取液，进行超声提取，提取时间为40min，超声功率为100W，超声频率为30kHz，过滤，收集滤液；(6)将步骤(5)收集的滤液于0℃下静置过夜后，冷冻离心20min，转速为4000r/min，取滤液在4℃下保存，得抗菌肽。实施例3一种从蝼蛄中提取抗菌肽的方法，包括如下步骤：(1)挑选新鲜的蝼蛄，洗净，晾干备用；(2)将大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在培养基中培养过夜，按照1:5体积比的菌液混合，离心收集菌体；(3)取步骤(2)收集的菌体，用灭菌生理盐水重悬沉淀，作为诱导源，用接种针蘸取混合菌液，轻刺入蝼蛄腹部，继续饲养3d；(4)取步骤(3)诱导后的蝼蛄置于75％酒精中浸泡10s，用无菌水冲洗残留的酒精，充分研磨成匀浆；(5)往步骤(4)的匀浆中加入20倍体积含有3％的0.01g/L苯甲基硫酰氟的乙酸提取液，进行超声提取，提取时间为60min，超声功率为250W，超声频率为50kHz，过滤，收集滤液；(6)将步骤(5)收集的滤液于4℃下静置过夜后，冷冻离心30min，转速为5000r/min，取滤液在4℃下保存，得抗菌肽。实施例4一种鸡饲料，具体如表1表1：鸡饲料重量份蝼蛄抗菌肽2.0米糠16豆饼20酵母粉2.0山梨酸钾0.25水35实施例5一种鸡饲料，具体如表2表2：鸡饲料重量份蝼蛄抗菌肽2.5米糠15豆饼22酵母粉2.5山梨酸钾0.3水38对比例1一种从蝼蛄中提取抗菌肽的方法，包括如下步骤：(1)挑选新鲜的蝼蛄，洗净，晾干备用；(2)将大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在培养基中培养过夜，按照1:4体积比的菌液混合，离心收集菌体；(3)取步骤(2)收集的菌体，用灭菌生理盐水重悬沉淀，作为诱导源，用接种针蘸取混合菌液，轻刺入蝼蛄腹部，继续饲养2d；(4)取步骤(3)诱导后的蝼蛄置于75％酒精中浸泡10s，用无菌水冲洗残留的酒精，充分研磨成匀浆；(5)往步骤(4)的匀浆中加入15倍体积的乙酸提取液，进行超声提取，提取时间为50min，超声功率为200W，超声频率为40kHz，过滤，收集滤液；(6)将步骤(5)收集的滤液于2.5℃下静置过夜后，冷冻离心25min，转速为4500r/本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蝼蛄抗菌肽的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)挑选新鲜的蝼蛄，洗净，晾干备用；(2)将大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在培养基中培养过夜，按照1:3～5体积比的菌液混合，离心收集菌体；(3)取步骤(2)收集的菌体，用灭菌生理盐水重悬沉淀，作为诱导源，用接种针蘸取混合菌液，轻刺入蝼蛄腹部，继续饲养1～3d；(4)取步骤(3)诱导后的蝼蛄置于酒精中浸泡10s，用无菌水冲洗残留的酒精，充分研磨成匀浆；(5)往步骤(4)的匀浆中加入10～20倍体积的乙酸提取液，进行超声提取，过滤，收集滤液；(6)将步骤(5)收集的滤液于0～4℃下静置过夜后，冷冻离心，取滤液在4℃下保存，得抗菌肽。

【技术特征摘要】
1.一种蝼蛄抗菌肽的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)挑选新鲜的蝼蛄，洗净，晾干备用；(2)将大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在培养基中培养过夜，按照1:3～5体积比的菌液混合，离心收集菌体；(3)取步骤(2)收集的菌体，用灭菌生理盐水重悬沉淀，作为诱导源，用接种针蘸取混合菌液，轻刺入蝼蛄腹部，继续饲养1～3d；(4)取步骤(3)诱导后的蝼蛄置于酒精中浸泡10s，用无菌水冲洗残留的酒精，充分研磨成匀浆；(5)往步骤(4)的匀浆中加入10～20倍体积的乙酸提取液，进行超声提取，过滤，收集滤液；(6)将步骤(5)收集的滤液于0～4℃下静置过夜后，冷冻离心，取滤液在4℃下保存，得抗菌肽。2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(4)的酒精浓度为70～75％。3.根据权利要求1所述的提取...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：佛山汇沐化学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44