免疫原性组合物制造技术

本发明专利技术涉及用于提供针对由志贺氏菌属（

Immunogenic composition

The present invention relates to the provision of a target for the genus Shigella (

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】免疫原性组合物
本专利技术涉及用于提供针对由志贺氏菌属（Shigella）菌株的细菌感染造成的疾病的保护的免疫原性组合物，特别是疫苗组合物。专利技术背景志贺氏菌病是一个重大的全球健康问题，引起超过700万伤残调整寿命年（Disability-AdjustedLifeYears）和每年100,000例死亡，特别是在发展中国家的5岁以下的儿童中[1,2,3]。志贺氏菌病由志贺氏菌属的革兰氏阴性细菌造成，基于脂多糖（LPS）的外多糖抗原（O抗原，OAg）的结构和组成，将所述志贺氏菌属分成4个种并进一步分成50个血清型：宋氏志贺氏菌（S.sonnei）（1个血清型）、弗氏志贺氏菌（S.flexneri）（15个血清型）、鲍氏志贺氏菌（S.boydii）（19个血清型）和痢疾志贺氏菌（S.dysenteriae）（15个血清型）[4]。有限数目的血清型促成全球疾病负担，并且这些在区域之间和随时间变化[4,5,6,7]。宋氏志贺氏菌（Shigellasonnei）和弗氏志贺氏菌（Shigellaflexneri）2a是世界上当前占优势的血清型[4,6]。临床志贺氏菌病的标志是与发热、恶心、厌食、脱水、粘液脓性和血性腹泻以及里急后重有关的急性直肠结肠炎。志贺氏菌造成的痢疾是地方性流行的，且在发展中国家中造成数百万的发病。例如，据估计每年有1.25亿例志贺氏菌腹泻，其中99%发生在发展中国家，且其中69%发生在5岁以下的儿童中。由志贺氏菌病引起的发病率和死亡率在发展中国家的儿童中是特别高的。对志贺氏菌疫苗的现有方案(在[8]中综述)已经基于活减毒菌株，其用于口服免疫、与O糖缀合用于注射、用于鼻内使用的蛋白体(具有连接的志贺氏菌属LPS的脑膜炎球菌外膜囊泡)、用于鼻内使用的侵染素复合物(invaplex)(包含IpaB、IpaC和LPS的志贺氏菌属的亚细胞提取物)和从具有脱毒LPS的ΔmsbB菌株制备的核蛋白-核糖体复合物。尽管这些疫苗中的两种已经在现场试验中是有效的，但是都没有针对多种志贺氏菌属血清型进行保护。最成功的最近疫苗候选物（胃肠外宋氏志贺氏菌OAg缀合物）在一次免疫接种以后在年轻成年人中表现出针对同源宋氏志贺氏菌感染的74%保护[9]，且在两次免疫接种以后在大于3岁的儿童中表现出71%效力[10]。相反，所述疫苗在3岁以下的儿童中表现出低免疫原性和保护的缺乏[10]。保护的水平与OAg疫苗-特异性抗体应答的水平平行，所述应答测量为对含有同源OAg的宋氏志贺氏菌LPS的抗体应答(抗-LPS应答)[10]。因而，本专利技术的一个目的是提供改善的免疫原性组合物，特别是可以用于针对志贺氏菌属的多种血清型进行保护的疫苗组合物。更具体地，一个目的是提供产生对OAg的更强应答（特别是在幼儿中）的疫苗组合物。专利技术概述在第一方面，本专利技术提供了一种免疫原性组合物，其包含从宋氏志贺氏菌和弗氏志贺氏菌纯化的膜抗原的泛化模块(GMMA)。具体地，所述GMMA包含经修饰的脂质A。具体地，所述经修饰的脂质A是脂质A的低毒或脱毒形式，作为非限制性例子，五酰化的脂质A、非天然存在的六酰化的脂质A（其中所述酰基基团之一被取代）和/或六酰化的脂质A（其中月桂酰基链被棕榈油酰基链替换）。更具体地，至少75%的宋氏志贺氏菌GMMA具有在25nm至40nm范围内的直径，如通过电子显微术确定的。宋氏志贺氏菌GMMA可以具有在32nm至38nm范围内的平均半径(通过HPLC-SECMALLS确定)，且弗氏志贺氏菌GMMA可以具有21nm至28nm之间的平均半径(HPLC-SECMALLS)。在一个实施方案中，从至少一种选自2a、3a和6的菌株中纯化所述弗氏志贺氏菌GMMA。具体地，所述免疫原性组合物包含从菌株2a、3a和6中的每一种纯化的弗氏志贺氏菌GMMA。在一个实施方案中，所述免疫原性组合物包含从以下菌株纯化的GMMA：(a)宋氏志贺氏菌，(b)弗氏志贺氏菌2a，(c)弗氏志贺氏菌3a和(d)弗氏志贺氏菌6。具体地，所述GMMA以1:1:1:1的比率存在。更具体地，所述免疫原性组合物包含小于100µg/mL的浓度的GMMA蛋白。具体地，所述免疫原性组合物包含从菌株2a、3a和6中的每一种中纯化的弗氏志贺氏菌GMMA和从至少一种选自1b和2b菌株的其它弗氏志贺氏菌菌株纯化的GMMA。具体地，所述免疫原性组合物包含从以下菌株纯化的GMMA：(a)宋氏志贺氏菌ΔtolR，ΔhtrB，virG::nadAB，(b)弗氏志贺氏菌2aΔtolR，ΔmsbB，(c)弗氏志贺氏菌3aΔtolR，ΔmsbB和(d)弗氏志贺氏菌6ΔtolR，ΔmsbB或ΔhtrB。更具体地，所述弗氏志贺氏菌菌株是毒性质粒消除的。所述组合物还可以含有其它弗氏志贺氏菌菌株的GMMA。具体地，所述免疫原性组合物包含佐剂。更具体地，所述佐剂是吸附剂。更具体地，所述佐剂是不会增强GMMA的免疫原性（例如，如通过抗-LPS抗体应答测得的）的吸附剂。特定佐剂包括，例如，铝佐剂，包括氢氧化铝、ALHYDROGEL®、磷酸铝、硫酸铝钾和明矾。在第二方面，本专利技术提供了一种用于针对志贺氏菌属感染免疫患者的方法，所述方法包括下述步骤：给所述患者施用本专利技术的第一方面的免疫原性组合物。在第三方面，本专利技术提供了用于针对志贺氏菌属感染免疫患者的方法中的本专利技术的第一方面的组合物。附图简述图1：肌肉内注射含有100μg蛋白的剂量的1790GAHB(圆圈)或等体积的生理盐水(菱形)以后在兔中的平均温度升高(疫苗接种后的平均值-疫苗接种前温度)。垂直条表明平均值标准误差。对于1790GAHB，N=12；且对于注射盐水的兔，N=6。图2(A)：在使用人主体的临床试验中免疫剂量1、2和3后产生的抗-宋氏志贺氏菌LPS抗体水平(中位疫苗接种后水平)。图2(B)：在使用人主体的临床试验中在整个研究（包括免疫3后6个月随访）中的抗-宋氏志贺氏菌LPS抗体水平(中位疫苗接种后水平)。图3：该框图显示了使用从(A)宋氏志贺氏菌、(B)弗氏志贺氏菌3a和(C)弗氏志贺氏菌2a纯化的LPS作为包被抗原通过ELISA评估的用1790GAHB、弗氏志贺氏菌-2a、弗氏志贺氏菌-3a和4-价组合免疫的组中的抗体分布。在(A)和(B)中，绘制了ELISA单元，在(C)中，显示了ELISAOD。将25%至75%显示为矩形，将最小值和最大值显示为短线，且将中位值显示为矩形中的水平条。测定中的检测限为2.2(A)和1.6(B)ELISA单元。给低于检测限的结果指定检测限的一半的值(在A中的1.1，在B中的0.8)。在(C)中显示的测定的平均背景OD为0.056。图4：该散布图显示了每组中抗-宋氏志贺氏菌OAg(A)、抗-弗氏志贺氏菌3a(B)或抗-弗氏志贺氏菌2a的ELISAOD结果(C)抗体分布的对数转化的各个结果相对于对数转化的剂量的关系。显示了单一制剂和4-价制剂的平行剂量-响应曲线。(A)1790GAHB和4-价组合对来自宋氏志贺氏菌的LPS的剂量-响应曲线。(B)弗氏志贺氏菌3a和4-价组合对来自弗氏志贺氏菌3a的LPS的剂量-响应曲线。(C)弗氏志贺氏菌2a和4-价组合对来自弗氏志贺氏菌2a的LPS的剂量-响应曲线。曲线的Y截距不是显本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫原性组合物，其包含(a)纯化的宋氏志贺氏菌GMMA、(b)纯化的弗氏志贺氏菌GMMA和(c)佐剂，其中所述GMMA包含经修饰的脂质A。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.06.16 EP 15020097.01.一种免疫原性组合物，其包含(a)纯化的宋氏志贺氏菌GMMA、(b)纯化的弗氏志贺氏菌GMMA和(c)佐剂，其中所述GMMA包含经修饰的脂质A。2.权利要求1的免疫原性组合物，其中所述经修饰的脂质A是五酰化的脂质A。3.权利要求1或2的免疫原性组合物，其中所述弗氏志贺氏菌GMMA从至少一种选自2a、3a和6的菌株纯化。4.权利要求3的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物包含从菌株2a、3a和6中的每一种纯化的弗氏志贺氏菌GMMA。5.权利要求4的免疫原性组合物，其中所述GMMA从(a)宋氏志贺氏菌ΔtolR、ΔhtrB、virG::nadAB、(b)弗氏志贺氏菌2aΔtolR、ΔmsbB或弗氏志贺氏菌2aΔtolR、ΔhtrB(c)弗氏志贺氏菌3aΔtolR、ΔmsbB或弗氏志贺氏菌3aΔtolR、ΔhtrB和(d)弗氏志贺氏菌6ΔtolR、ΔmsbB或弗氏志贺氏菌6ΔtolR、ΔhtrB纯化。6.前述权利要求任一项的免疫原性组合物，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：C格克，LB马丁，AJ索，
申请(专利权)人：葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时,BE