双佐剂疫苗组合物、制备和用途制造技术

本发明专利技术涉及疫苗，并涉及其制备方法和用途，所述疫苗包含在水包油包水(WOW)乳液中的有效量的至少一种抗原和另外的佐剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】双佐剂疫苗组合物、制备和用途本专利技术涉及疫苗、它们的制备和用途。本专利技术更具体涉及双佐剂疫苗，其包含在水包油包水(WOW)乳液中的至少一种抗原和另外的佐剂。本专利技术的疫苗可包含任何类型的抗原(优选细菌抗原)，并且特别适宜兽医用途，例如用于给鸡(chicken)接种疫苗。专利技术背景疫苗通常与佐剂一起配制，以增强并改善免疫反应，尤其延长抗体反应。例如弗氏佐剂(Freund’sadjuvant)(ProceedingsofTheSocietyforExperimentalBiologyandMedicine,1942,49,548-553)，其对应于乳化于矿物油中的抗原溶液，首先被用作免疫增强剂或用作免疫加强剂(immunobooster)。弗氏佐剂形成油包水(WO)乳液，并本质上通过抗原的持续释放来展现佐剂效果。已经评估了各种各样的其它佐剂系统，以便提供有效的疫苗。这些包括例如壳聚糖、细胞因子、寡核苷酸、脂质、毒素、半抗原载体或氢氧化铝。在这方面，Matsumoto等人(Aviandiseases,1971,15,109-117)已经测试了铝衍生物(例如氢氧化铝凝胶和铬铝)在疫苗中的功效。Blackall等人(AvianDiseases,1992,36,632-636)已经比较了氢氧化铝佐剂和WO乳液。角鲨烯、皂苷、QuilA、类脂胺、聚糖或阿夫立定也已经作为佐剂被添加到疫苗中，以改善它们的功效。EP0640348涉及包含WO乳液和免疫刺激性聚糖的疫苗。US2014/0099358提议包含油包水乳液以及铝或铝的化合物或TiterMax(角鲨烯)的疫苗。然而，组合的乳液-佐剂系统的设计因为可能的副作用而产生安全性问题(Reid和Blackall,AvianDiseases,1987,31,59-63)。此外，传统的WO乳液经常具有高粘度并且难以配制或注射。基于WOW乳液的疫苗已经在禽类胚胎的卵内免疫中测试(US5,817,320)，并针对(against)具体的病毒例如纽卡斯尔病病毒、传染性支气管炎病毒(Cajavec等人,ActaVeterinariaHungarica,1998,46,25-34)和传染性鼻炎(Blackall,World’sPoultryScienceJournal,1995,51,17-26)进行测试。根据用于制备WOW乳液的表面活性剂的性质和比例，已经在稳定性方面使此类在WOW乳液中的疫苗得到了改善。关于这一点，Hunter和Bennet已经研究了在低于2的亲水-亲脂平衡(HLB)下的式HO(C2H4O)b(C3H6O)a(C2H4O)b的聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物(US5,622,649)。他们还已经在用于乙型肝炎感染的接种疫苗方法中测试了此类WOW乳液，并已提及它们对抗破伤风、疟疾、艾滋病、流感和肺炎球菌性肺炎的效力。Jiao和Burgess(AAPSPharm.Sci.,2003,5,1-12)已经关于两种具体的表面活性剂(司盘83(Span83)和吐温80(Tween80))的浓度评估了WOW多相乳液的长期稳定性，并且已确定，20％司盘83和0.1％吐温80的浓度比率提供了WOW乳液的最佳长期稳定性。然而，WOW乳液不总是产生令人满意的免疫反应。此外，WOW可能涉及许多潜在的缺点，包括它们缺乏均一性(例如在颗粒的尺寸分布轮廓(profile)中)和不均匀的制剂的可能的粘性。此外，尚未确立此类系统用于配制大的对象(例如细胞)的合适性。因此，本领域对替代的、安全的和改善的疫苗，尤其用于动物中的疫苗存在着需求。专利技术概述本专利技术提供具有改善的功效的新颖疫苗。本专利技术特别公开了将WOW乳液与佐剂化合物组合的双佐剂系统疫苗。本专利技术源自专利技术人的意料不到的以下发现：此类双佐剂系统是安全的并且在体内产生改善的免疫反应。尤其，本专利技术显示，此类疫苗在非人动物中诱导有效的保护性免疫反应，并且特别适合于细菌抗原，优选包括全细胞细菌。因此，本专利技术的一个目的涉及疫苗，其包含有效量的在水包油包水(WOW)乳液中的至少一种抗原和另外的佐剂。本专利技术的另一个目的涉及疫苗，其在水包油包水(WOW)乳液中包含有效量的至少一种抗原和佐剂化合物。本专利技术的另一个目的是如上所定义的疫苗，其用于在非人动物中诱导针对所述抗原的免疫反应。本专利技术的进一步目的涉及在非人动物中诱导针对抗原的免疫反应的方法，其包括对所述动物施用组合物，所述组合物包含有效量的在WOW乳液中的所述至少一种抗原和另外的佐剂。本专利技术的另一个目的是制备疫苗的方法，其包括：a)将至少一种抗原的溶液在油基(oilbase)中乳化，由此形成WO乳液，b)将所述WO乳液加入到分散相中，由此形成WOW乳液，并且任选地，进一步乳化所述WOW乳液，和c)将所述WOW乳液与另外的佐剂混合，所述另外的佐剂优选与额外量的所述至少一种抗原组合。在特别的实施方式中，另外的佐剂是氢氧化铝。在另一个特别的实施方式中，至少一种抗原是细菌抗原，优选为活细菌、减毒细菌或灭活细菌。在本专利技术的特别方面，如上所定义的疫苗包含包埋在油性颗粒中的所述抗原，所述油性颗粒优选具有1至40μm的尺寸。如将进一步公开的，本专利技术组合物特别适合给非人动物，特别是家禽(例如鸡(chicken)、水禽)或鸟类接种。附图说明图1：WOW乳液的说明。图2A-2B：通过皮下途径(SQ,图2A)和肌内途径(IM,图2B)用疫苗A处理的鸡中针对肠炎沙门氏菌(SalmonellaEnteritidis)(SE)的保护百分率。图3A-3B：通过皮下途径(SQ,图3A)和肌内途径(IM,图3B)用疫苗A处理的鸡中针对鼠伤寒沙门氏菌(SalmonellaTyphimurium)(ST)的保护百分率。图4：通过皮下和肌内途径用疫苗A处理的鸡中针对肯塔基沙门氏菌(SalmonellaKentucky)(SK)的保护百分率。图5A-5B：通过皮下途径(SQ,图5A)和肌内途径(IM,图5B)用疫苗A处理的鸡中针对海德尔堡沙门氏菌(SalmonellaHeidelberg)(SH)的保护百分率。图6：小母鸡中对于疫苗A的肌内注射位点反应。专利技术详述本专利技术提供新颖且改善的疫苗组合物、其制备方法和它们的用途。本专利技术尤其公开了新颖的疫苗，其包含在WOW乳液中的有效量的至少一种抗原，并进一步包含佐剂。本专利技术源自专利技术人的意料不到的以下发现：此类双佐剂系统可容易注射、是安全的，并且提供比使用其它佐剂系统的现有技术疫苗更大的功效(保护性免疫)。尤其，专利技术人已经证明了关于包含至少一种抗原和双佐剂系统的本专利技术的疫苗的协同效应。专利技术人也已经证明了此类疫苗在体内针对沙门氏菌感染的改善的保护功效以及它们的安全性。因此，本专利技术的一个目的涉及疫苗或组合物，其包含有效量的在WOW乳液中的至少一种抗原和另外的佐剂。本专利技术的另一个目的是疫苗或免疫原性组合物，其在WOW乳液中包含抗原和另外的佐剂，其中所述抗原包括在包含内水相和油相的油性颗粒中，并且其中所述另外的佐剂包括在外水相中，所述另外的佐剂优选与所述抗原复合。本专利技术的另一个目的是疫苗或免疫原性组合物，其在WOW乳液中包含全细胞，其中WOW乳液中的至少90％的油性颗粒具有低于20μm的尺寸，所述组合物具有优于4的OD600/m本文档来自技高网...

【技术保护点】
疫苗，其在水包油包水(WOW)乳液中包含有效量的至少一种抗原和佐剂化合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.06.16 US 14/3053291.疫苗，其在水包油包水(WOW)乳液中包含有效量的至少一种抗原和佐剂化合物。2.根据权利要求1所述的疫苗，其中所述佐剂化合物是氢氧化铝。3.根据权利要求1所述的疫苗，其中所述至少一种抗原是细菌细胞，优选活细菌、减毒细菌或灭活细菌。4.根据权利要求3所述的疫苗，其中所述细菌是沙门氏菌属细菌，优选选自肠炎沙门氏菌、肯塔基沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、海德尔堡沙门氏菌或其组合。5.根据权利要求1所述的疫苗，其中所述WOW乳液包含一种或数种油和至少一种表面活性剂。6.根据权利要求5所述的疫苗，其中所述油包括植物油、动物油、矿物油或其混合物，优选矿物油。7.根据权利要求5所述的疫苗，其中所述至少一种表面活性剂选自聚氧乙烯失水山梨糖醇单油酸酯、失水山梨糖醇单油酸酯。8.根据权利要求1所述的疫苗，其包含包埋在油性颗粒内的水泡，所述油性颗粒分散在外水相中。9.根据权利要求8所述的疫苗，其中所述疫苗中的所述至少一种抗原的总量的至少60％(w/w)，优选60％至75％含于所述油性颗粒中。10.根据权利要求8所述的疫苗，其中所述油性颗粒包含植物油、动物油、矿物油或其混合物，优选矿物...

【专利技术属性】
技术研发人员：RH吕林，B福特，
申请(专利权)人：生物免疫公司，
类型：发明
国别省市：美国,US