一种紫苏籽油中总多酚的定量检测方法技术

本发明专利技术涉及化学分析技术领域，特别涉及一种紫苏籽油中总多酚含量的检测方法。该方法包括：将紫苏籽油样品与正己烷混合，加入萃取剂涡旋萃取，离心，取上清液，过滤，得到样品溶液；取所述样品溶液加入纳米金溶液和硝酸银溶液，经孵育得到待测溶液；在400‑500nm波长下检测待测溶液的吸光度，根据标准曲线计算待测溶液中总多酚的含量。本发明专利技术实现了紫苏籽油中总多酚含量和抗氧化活性的快速检测，检测结果准确度高、线性范围好、精密度高，且操作简单、成本低。

【技术实现步骤摘要】
一种紫苏籽油中总多酚的定量检测方法
本专利技术涉及化学分析
，特别涉及一种紫苏籽油中总多酚的定量检测方法。
技术介绍
紫苏(Perillafrutesceu(L)Brit.)又名赤苏、香苏等，为唇形科一年生草本植物，是我国传统的药食两用植物。紫苏籽油是由紫苏籽经烘焙、压榨和精炼获得食用油，具有防止动脉粥样硬化、降血脂、抗氧化、抗衰老、抑菌、抗肿瘤、平喘等作用。有研究表明，紫苏主要含有紫苏苷、原花色素、紫苏素、木犀草素和芹黄素等多酚类化合物，具有抗炎、镇痛、抗衰老、清除和抑制自由基等作用。由于多酚具有重要的生理活性，在农业、环境、食品、医疗、化工产业中起着非常重要的作用。因此发展分析方法测定植物中多酚的含量吸引了广大研究者的兴趣。目前，植物油中建立的多酚的测定方法主要包括色谱法，毛细管电泳法、电化学法、荧光法以及化学发光法。这些方法大部分需要使用高成本的精密仪器以及耗时的样品前处理过程。而电化学和光谱方法往往涉及到酶修饰过程，会增加实验复杂度及成本。基于方法的简单度，目前最常用来测定植物多酚的方法主要Folin-Ciocalteu显色法。这种方法由于在实验过程中使用的是传统的有机试剂，因此灵敏度较差。因此，发展简单、灵敏、低成本、有效地植物多酚检测方法十分重要。金纳米颗粒(AuNPs)具有非常高的消光系数(如13nm金纳米颗粒的消光系数高达2.7x108mol/(L·cm)，比一般的染料分子高1000倍以上，金纳米颗粒所能达到的检测限远低于染料分子,而且基于AuNPs建立的比色方法仅仅通过紫外可见光谱或者是肉眼即可读出。通常，AuNPs建立的比色方法机理是：单分散金纳米颗粒在溶液中呈现红色，当加入被检测物时，金纳米颗粒发生聚集，从而使颗粒间的等离子体耦合发生改变，吸收峰发生红移，溶液的颜色由红色变为紫色或蓝色。这种方法在复杂样品使用过程中会抗干扰能力较差。目前，非聚集的AuNPs建立比色方法被提出，其原理是在酶或者托伦试剂(Ag(NH3)2OH)的作用下，银离子在AuNPs表面被还原，形成金核银壳的纳米结构，溶液颜色由红色变为棕黄色。这种方法已经成功应用于葡萄糖、蛋白、甲醛等的检测中。该方法灵敏度高、颜色变化明显、背景低，无需复杂仪器。但其仍然存在一些缺点，如在实验中使用的酶储存条件特殊，成本高；Ag(NH3)2OH配置过程复杂，实验重现性受到影响。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种紫苏籽油中总多酚含量的检测方法。该方法可快速、准确地检测出紫苏籽油中总多酚的含量，同时具有灵敏度高，成本低的优点。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种紫苏籽油中总多酚含量的检测方法，包括如下步骤：将紫苏籽油样品与正己烷混合，加入萃取剂涡旋萃取，离心，取上清液，过滤，得到样品溶液；取所述样品溶液加入纳米金溶液和硝酸银溶液，经孵育得到待测溶液；在400-500nm的检测波长下检测待测溶液的吸光度，根据标准曲线计算待测溶液中总多酚的含量。本专利技术采用金纳米颗粒检测建立了一种低成本、简单的非聚集定量检测总多酚含量的新方法。本专利技术基于多酚的抗氧化性质，能够使银离子在AuNPs表面还原，实现总多酚含量测定，通过分析反应前后的颜色变化对多酚进行定性分析，通过紫外可见吸收光谱定量分析，还可用于评价紫苏籽油抗氧化能力的强弱。本专利技术检测原理如图1所示:当不存在多酚时，没有银离子(Ag+)沉积在AuNPs表面，溶液仍然显示AuNPs的粉红色。加入多酚后，由于多酚强的抗氧化作用，Ag+被还原为银原子吸附在AuNPs表面，导致Au@Ag核壳纳米结构的产生。与此同时溶液颜色由粉红转变为黄色。Au@Ag核壳纳米颗粒的量直接与溶液中多酚的量有关。多酚含量越高，溶液黄色越强，紫外可见吸收强度越高。基于此，可实现目标物总多酚的比色检测及定性分析。进一步根据标准曲线可实现总多酚的定量分析。本专利技术提供的方法具有操作简单、检测快速、灵敏度高等优点，并能用于实际紫苏籽油样品中总多酚的分析测定，具有广阔的应用前景。优选的，所述检测波长为450nm。优选的，所述纳米金溶液的浓度为5-10nM，更优选为5nM、7.5n或5nM。优选的，所述硝酸银溶液的浓度为1～2mM，更优选为1mM、1.5mM或2mM。优选的，所述纳米金溶液与所述硝酸银溶液的体积比为(4-8)：(3-6)。进一步优选，1g紫苏籽油加入40-80μL浓度为5-10nM的AuNPs，加入浓度为1-2mM的AgNO3溶液30-60μL。在本专利技术提供的一些实施例中，1g紫苏籽油加入40μL浓度为5nM的AuNPs，加入浓度为1mM的AgNO3溶液30μL。在本专利技术提供的一些实施例中，1g紫苏籽油加入60μL浓度为5nM的AuNPs，加入浓度为1.5mM的AgNO3溶液50μL。在本专利技术提供的一些实施例中，1g紫苏籽油加入80μL浓度为5nM的AuNPs，加入浓度为2mM的AgNO3溶液60μL。优选的，所述紫苏籽油与所述正己烷的质量体积比为1:(1～3)。优选的，所述正己烷与所述萃取剂的体积比为(1～3):(1～3)。本专利技术中，所述萃取剂优选为70vt％～90vt％的乙醇水溶液或70vt％～90vt％的丙酮水溶液。在本专利技术提供的一些实施例中，所述萃取剂为70％乙醇水溶液、80％乙醇水溶液、90％乙醇水溶液或80％丙酮水溶液。优选的，所述萃取的次数为1-3次，更优选为2次。本专利技术中，在取所述样品溶液加入纳米金溶液和硝酸银溶液，经孵育得到待测溶液；优选的，所述孵育的温度为20-40℃，所述孵育的时间为10-30min。在本专利技术提供的具体实施例中，所述孵育的温度为20℃，孵育的时间为2min。优选的，所述加入纳米金溶液和硝酸银溶液后、所述孵育前还包括用缓冲液调至pH8.0～10.0的步骤。在本专利技术提供的具体实施例中，所述加入纳米金溶液和硝酸银溶液后、所述孵育前用Tris-HCl缓冲溶液调至pH9.0。本专利技术中，所述标准曲线以标准品溶液的浓度为横坐标，以其对应的吸光度值为纵坐标进行绘制。作为优选，标准品溶液中的溶剂为甲醇。作为优选，所述标准品溶液含有肉桂酸、对羟基乙醇，3,4-二羟基苯甲酸，对香豆酸，香草酸，咖啡酸，阿魏酸，丁香酸，芹黄素，槲皮素中的一种或两种以上的化合物，其中，所述标准品溶液为多酚物质总量的浓度为0.05～15μg/ml的溶液。作为优选，所述标准曲线按照以下方法建立：制备含有肉桂酸、对羟基乙醇，3,4-二羟基苯甲酸，对香豆酸，香草酸，咖啡酸，阿魏酸，丁香酸，芹黄素，槲皮素的标准品溶液，将标准品溶液与正己烷混合，加入萃取剂涡旋萃取，离心，取上清液，过滤，加入纳米金溶液和硝酸银溶液，经孵育，在400-500nm波长下检测其吸光度，以标准品溶液的浓度为横坐标，以其对应的吸光度值为纵坐标进行绘制，分别得到不同检测波长下的标准曲线。在本专利技术提供的一些实施例中，所述检测波长为400nm、450nm、500nm。本专利技术通过分析反应前后的颜色变化和紫外可见吸收光谱，可实现对多酚的定性及定量分析，还可用于评价紫苏籽油抗氧化能力的强弱，至少具有如下优势之一：1、本专利技术方法利用纳米金和硝酸银在多酚还原作用下显色的原理，只需20min，即可完成紫苏籽油中总多酚含量快速准确检测。2、本本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种紫苏籽油中总多酚含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：将紫苏籽油样品与正己烷混合，加入萃取剂涡旋萃取，离心，取上清液，过滤，得到样品溶液；取所述样品溶液加入纳米金溶液和硝酸银溶液，经孵育得到待测溶液；在400‑500nm波长下检测待测溶液的吸光度，根据标准曲线计算紫苏籽油样品中总多酚的含量。

【技术特征摘要】
1.一种紫苏籽油中总多酚含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：将紫苏籽油样品与正己烷混合，加入萃取剂涡旋萃取，离心，取上清液，过滤，得到样品溶液；取所述样品溶液加入纳米金溶液和硝酸银溶液，经孵育得到待测溶液；在400-500nm波长下检测待测溶液的吸光度，根据标准曲线计算紫苏籽油样品中总多酚的含量。2.根据权利要求1所述的定量检测方法，其特征在于，所述纳米金溶液的浓度为5-10nM。3.根据权利要求1所述的定量检测方法，其特征在于，所述硝酸银溶液的浓度为1～2mM。4.根据权利要求1所述的定量检测方法，其特征在于，所述纳米金溶液与所述硝酸银溶液的体积比为(4～8)：(3～6)。5.根据权利要求1所述的检测方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖俊勇，从仁怀，范罗嫡，马方励，马忠华，
申请(专利权)人：无限极中国有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44