一种埃可病毒30型PCR检测方法技术

本发明专利技术公开了一种检测埃可病毒３０型的方法，包括以下步骤：（１）特异性引物的设计；（２）总ＲＮＡ的抽提；（３）逆转录反应（ＲＴ）：将总ＲＮＡ通过逆转录反应得到ｃＤＮＡ；（４）聚合酶链式反应，即ＰＣＲ反应：以ｃＤＮＡ作为模板，采用特异性引物对，进行聚合酶链式扩增；（５）电泳分析：将ＰＣＲ产物进行琼脂糖凝胶电泳，经ＥＢ染色后用凝胶成像系统分析。本发明专利技术的有益之处在于：１．针对埃可病毒３０型ＶＰ基因保守区设计特异性引物，结果准确；２．采用逆转录和聚合酶链式扩增技术，灵敏度高；３．操作步骤简便，耗时少，所需设备普通且种类少。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医学
，涉及埃可病毒30型的核酸检测方法，具体 为埃可病毒30型RT-PCR快速检测技术。
技术介绍
埃可病毒(Echovirus)属于肠道病毒(Enteroviruses, EVs)，微小核糖核 酸病毒科。微小核糖核酸病毒是正链RNA病毒，包括脊髓灰质炎病毒、柯萨奇 病毒A组和B组、埃可病毒、肠病毒68-71型。临床上，病毒的分型主要基于 它们的基因特征，埃可病毒属于人肠道病毒HEV B种。肠道病毒共包括67种 独特的血清型，在64种可引起人类感染的血清型中，己知埃可病毒有28个血 清型，而埃可病毒30型是最常见的型别之一。埃可病毒颗粒体积极小，呈球形， 由简单的衣壳和单正股RNA组成，裸露无膜，直径小于30nm。病毒的衣壳含 4种蛋白质，分别为VP1、 VP2、 VP3和VP4。病毒的RNA为单一分子，长约 7.44kb，是病毒翻译和复制的模板。与其它肠道病毒一样，埃可病毒的最适生 长温度为35-37'C，能在猴肾细胞、人羊膜细胞、人喉癌细胞、横纹肌肉瘤、人 胚肺等细胞进行培养。对于疑似感染的病人，根据不同的临床症状和可能的病 变部位而采集不同的标本，如本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种埃可病毒３０型ＰＣＲ检测方法，其特征在于，按照以下步骤进行埃可病毒３０型的ＰＣＲ检测：　（１）特异性引物的设计：　上游引物：５’＞ｃｃｃａａｇｇｇｔｔａｔｇａａｇａｃ＜３’　下游引物：５’＞ｃｇｇｇｃｇａｃａｃｔａｔｔ ｔａｃｔ＜３’；　（２）总ＲＮＡ的抽提；　（３）逆转录反应：将步骤（２）抽提得到的总ＲＮＡ通过逆转录反应得到互补ＤＮＡ，即ｃＤＮＡ；　（４）聚合酶链式反应，即ＰＣＲ反应：以步骤（３）逆转录得到的互补ＤＮＡ作为模板，采用步骤 （１）设计的特异性引物对，进行聚合酶链式扩增；　（５）电泳分析：将步骤（４）扩增得到...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：朱坚胜，阮仙利，颜卫华，
申请(专利权)人：浙江省台州医院，
类型：发明
国别省市：33[中国|浙江]