一种尿酸测定酶试剂盒的制备方法技术

技术编号:1764227 阅读:279 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
一种尿酸测定酶试剂盒的制备方法,包括产朊假丝酵母菌微生物酶的培养、提取,2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸色原的合成和冻干准备液的配制,分装,低温冷冻干燥密封等,制成的酶盒敏感度高,稳定性好,抗干扰性能好等优点,可广泛用于血清、尿液的尿酸测定,可为痛风、肾脏疾病、慢性白血病等的诊断提供准确的实验资料。(*该技术在2010年保护过期,可自由使用*)

【技术实现步骤摘要】

本专利技术是涉及,该试剂盒可用于血清,尿液的尿酸测定,为痛风、肾脏疾病、慢性白血病等疾病的诊断提供准确实验资料,还可用于其它临床或非临床样品的尿酸定量分析。目前,国内外通常应用的尿酸测定试剂盒是用3,5-二氯-2-羟苯磺酸作色原。此色原较2,4-二氯酚敏感,且溶解性好,但其稳定性较差,敏感性亦尚嫌不足,合成比较困难。为此,近年来国外有人研究应用一种新的色原-2.4.6-三溴-3-羟苯甲酸,测定尿酸其敏感度高,稳定性强,合成容易,方法准确、精密。如Sanderson在“临床化学”(1983;291285)和Dubois在“临床化学临床生化”杂志(1989;27151)分别报道了应用该色原测定尿酸,具有上述优点,但他们未涉及利用该色原制作尿酸酶试剂盒的情况。本专利技术的目的,是提供一种用2.4.6-三溴-3-羟苯甲酸新色原制造尿酸测定酶试制盒的工艺。包括微生物酶的制备和冻干粉试剂盒的制造方法。该试剂盒的制备工艺包括微生物的制备和冻干粉试剂盒制造1、将产朊假丝酵母菌微生物酶摇床或在发酵罐中培养,将收获的菌体用PH8.311的缓冲液渗透攻击提取,2-4天后收获菌提取液;2、用硫酸铵盐析后,收取酶蛋白,过葡聚糖凝胶5-25柱后备用;3、以间硝基酚、氰溴酸和溴酸盐合成2.4.6-三溴-3-羟基苯甲酸,干燥后备用。冻干粉试剂盒的制造4、按下列比例制备冻干准备液尿酸酶150-10000U/L,辣根过氧化物酶5000-30000U/L,4-氨基安替比林5-60mmol/L,亚铁氰化钾100-1000μmol/L,其它非反应成份适量;5、按用途和使用方法不同,将准备液分装成0.5-2.0ml瓶;6、经低温冷冻,真空干燥后封盖,贮存备用。用本专利技术的方法制备的2.4.6-三溴-3-羟苯甲酸色原酶的试剂盒与现有色原2.4-三氯酚和3.5-二氯-2-羟苯磺酸试剂盒比较,其优点是敏感度分别增加15%和100%,色原溶液稳定期延长200%,合成容易并相应提高了酶盒的抗干扰性能。实施例将产朊假丝酵母菌种接种于3L液体培养基中培养诱导后,得湿菌160-200克,用PH9缓冲液渗透攻击提取,用硫酸铵盐析,离子交换纤维素色谱,可得酶130-160U;取辣根过氧化物酶5000-7000U,4-氨基安替比林1-4mmol,2.4.6-三溴-3-羟苯甲酸9mmol,亚铁氰化钾120μmol,其它非反应成份适量,混合均匀,分装入瓶内,进行低温冷冻,干燥后得尿酸测定酶试剂盒300-400支。权利要求1.本专利技术涉及,其特征在于所述的方法包括甲微生物酶的制备流程是a、将产朊假丝酵母菌微生物摇床或在培养罐中培养;收取的菌体用PH8.5-11缓冲液渗透攻击提取,2-4天后,收获菌提取液;b、用硫酸铵盐析后,收取酶蛋白,过葡聚糖凝胶G-25柱后备用;c、以间硝基酚,氰溴酸和溴酸盐合成2.4.6-三溴-3-羟基苯甲酸,干燥后备用;乙冻干试剂盒的制造d、按下列比例制备冻干准备液尿酸5000-30000UL,辣根过氧化物酶5000-30000UL,4-氨基安替比体5-60mmoL/L,亚铁氰化钾100-100μmoUL,其它非反应成份适量;e、按盒的用途和方法不同,将准备液分装成0.5-2.0ml瓶;f、经低温冷冻,真空干燥后封盖,贮存备用。全文摘要,包括产朊假丝酵母菌微生物酶的培养、提取,2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸色原的合成和冻干准备液的配制,分装,低温冷冻干燥密封等,制成的酶盒敏感度高,稳定性好,抗干扰性能好等优点,可广泛用于血清、尿液的尿酸测定,可为痛风、肾脏疾病、慢性白血病等的诊断提供准确的实验资料。文档编号C12Q1/62GK1057484SQ9010515公开日1992年1月1日 申请日期1990年6月20日 优先权日1990年6月20日专利技术者刘学成, 苏跃新, 汤瑾瑜, 张淑贤, 王竹, 董洪杰 申请人:中国人民解放军沈阳军区总医院本文档来自技高网...

【技术保护点】
本专利技术涉及一种尿酸测定酶试剂盒的制备方法,其特征在于所述的方法包括:甲微生物酶的制备流程是:a、将产朊假丝酵母菌微生物摇床或在培养罐中培养;收取的菌体用PH8.5—11缓冲液渗透攻击提取,2—4天后,收获菌提取液;b、用硫酸铵盐 析后,收取酶蛋白,过葡聚粮凝胶G—25柱后备用;c、以间硝基酚,氰溴酸和溴酸盐合成2.4.6—三溴—3—羟基苯甲酸,干燥后备用;乙冻干试剂盒的制造;d、按下列比例制备冻干准备液:尿酸5000—30000UL,辣根过氧化物酶500 0—30000UL,4—氨基安替比体5—***,亚铁氰化钾100—100μmoUL,其它非反应成份适量;e、按盒的用途和方法不同,将准备液分装成0.5—2.0ml瓶;f、经低温冷冻,真空干燥后封盖,贮存备用。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:刘学成苏跃新汤瑾瑜张淑贤王竹董洪杰
申请(专利权)人:中国人民解放军沈阳军区总医院
类型:发明
国别省市:89[中国|沈阳]

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