DNA,RNA和蛋白的检测制造技术

本发明专利技术公开了检测样品中的测试物质存在的方法和装置。将被测样品加入到至少有两种网的测试柱中。其中的一种网有用于检测对照物存在的对照捕捉物质。其它的每一种网有特异于待检测物质的捕捉物质。捕捉物质将与相应的测试物质结合形成结合物质，然后冲洗测试柱，除去没有结合到捕捉物质上的物质。最终，在每一个网上检测结合物质的存在。本方法用于检测样品中的病原体指示物，特别是适用于ＤＮＡ和ＲＮＡ的检测。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
,rna和蛋白的检测的制作方法
本专利技术涉及一种用于检测低浓度测试物质，尤其是病原体指示物检测的设备和方法，特别是涉及血清中DNA,RNA和蛋白的检测。传统上，疾病的诊断依赖于临床表现。然而随着核酸和单克隆抗体检测方法的出现，已经开发了新的检测疾病技术。核酸的检测已经被用于异常基因产物相关的疾病，例如贫血症，杭廷顿氏舞蹈病以及某些地中海贫血突变型。另外，核酸的检测已被用于细菌和病毒病的检测，例如人类免疫缺陷病毒(HIV)。而且，单克隆抗体检测方法在一些疾病例如癌症上的确诊和分类已经获得认可。正如本领域的技术人员所期望的，病原体指示物的检测已经被应用于检测一些与异常基因相关的疾病、与确定的核酸序列的存在有关的疾病和与免疫系统有关的疾病。此处所述的病原体指示物包括DNA、RNA、抗体、抗原和其它的蛋白质。现有的研究和临床实验室中人工病原体指示物的检测方法一般准确性、灵敏性较低，且在操作方法和解释结果方面都有人为的误差。其它技术，例如培养的方法也不适于很多疾病。例如，肺结核杆菌生长速度很慢使得检测很难甚至无法进行。Smith等人的专利US5,753,439描述了一种方法，检测特征性二核苷酸和三核苷酸序列来测定目的基因序列，以筛选与序列有关的遗传缺陷或疾病。测试在固体表面进行，可以进行多次。然而，该方法不能提供一种检验步骤，确保测试结果准确且灵敏，并判断方法是否存在误差。Muller的专利US5,824,478描述了一种方法，一种样品与一种检测探针和一种捕捉探针接触，形成一种检测探针一被分析物一捕捉探针复合物，其被用于检测样品中的一种目的分析物。该目的分析物、捕捉探针和检测探针可以是核酸和多肽。然而，该方法也不提供一种检验步骤，确保测试结果准确且灵敏，并判断方法是否存在误差。在一个标准酶ELISA免疫测定方法中，用一个有许多含有抗体的小凹坑，比如96个凹坑的盘。在ELISA方法中消除误差的一种方法是使用对照物。其中一个凹坑带有阳性抗体，用作一种阳性对照，其余的凹坑用于检测病人的血清。加入血清样品后，冲洗该凹坑，然后加入带有一种酶的第二抗体。再冲洗，加入一种酶作用物与酶进行显色反应，反应产生的颜色与一种抗原的存在有关。这种方法发生误差的概率很高，人为误差可能导致某些凹坑被冲洗两次或未冲洗，试剂加入两次或未加入。或者凹不小心被外来的物质污染。例如，过度冲洗会冲掉所有的万分得到一种假阴性结果，而不完全的冲洗会检测未结合的物质，产生假阳性结果。对照坑不能保证任何其它凹坑存在病原体批示物。此外，坑与坑之间色度的差异对结果的解释带来额外的不确定性。以前的测试方法大多数需要时间、技术和样品有一定的浓度，且一个技术员操作的数量也有限。因工作量大，此种检测费用高。由于所有上述的原因，以及其它更多的原因，一种新的方法、设备和一个检测病原体指示物的试剂盒是所期望的，其应当准确、可重复，并且能够灵敏地判断方法中的错误。本专利技术提供了一种在一个试验样品中检测测试物质存在的方法。本方法包括如下步骤(A)将一定测试样品和一种对照物质装于一个测试柱子，其中该柱子至少有两个网，所述的一个网有一个对照捕捉物；至少一个上述的网有一个目的捕捉物质特异于相应的检测样品中待检测的物质，因此对照捕捉物将与对照物质结合形成一种结合对照物质；并且目的捕捉物将与相应的检测物质结合形成一种结合物质；(B)冲洗检测柱除去任何与捕捉物未结合的物质；以及(C)检测在每一种网上的结合物质的存在。本方法可以进一步包括加入一个标记物到每一种网上的结合物上以形成标记的结合物质，然后检测到标记结合物质的存在。在另一个实施方案中，本方法提供了在一个样品中检测一段DNA序列存在的方法。该方法包括如下步骤(A)变性一个测试样品失活来形成一个待检测的单链目的DNA序列；(B)将测试样品和第一对照单链DNA序列装于一个其至少有两个网的检测柱，所述的一个网有第一对照单链捕捉DNA序列，至少一个上述的网有一个目的单链捕捉DNA序列特异于相应的检测样品中的目的DNA序列；并且其中的目的单链捕捉DNA序列与测试样品中的相应的目的DNA序列相结合形成一个双链DNA序列，并且第一个对照单链捕捉DNA序列将与第一个对照DNA序列相结合形成一个双链对照DNA序列；(C)加入一个流动相溶剂到柱子中除去未结合的DNA；(D)加入一种酶来破坏单链DNA；(E)加入变性溶液来分离已形成的双链DNA序列，然后加入一种冲洗溶剂除去变性的非捕捉单链序列，因此单链捕捉DNA序列在每一种网上重新形成；(F)加入DNA探针提供在步骤(E)中形成的单链捕捉DNA序列可检测的标记；(G)加入冲洗溶液除去非结合的DNA探针；(H)检测来自每个网的任何信号。在步骤(B)中，在将样品加入测试柱前，先在样品中加入第一个单链对照DNA序列，或者第一个单链对照DNA序列与样品分别加入检测柱。而且，该方法可进一步包括加入可与标记物反应的底物来产生可检测的信号。此外，该方法进一步包括加入第二种对照单链DNA序列到检测柱中，其中检测柱有一个对照网其含有第二个对照单链的捕捉DNA序列。另一个实施方案中，每个网上有多于一个的单链捕捉DNA序列，并且标记物随着单独网上的单链捕捉DNA序列的不同而不同，因此不同的DNA序列可以在一个单个网上被检测。在又一个实施方案中，检测一个测试样品一段DNA序列的方法包括如下步骤(A)提供一个阳性对照单链DNA序列；(B)使一个测试样品变性从而形成一个待检测的单链目的DNA序列；(C)加入测试样品和一个阳性对照DNA序列到一个检测柱，其中该柱子有至少两个网，其中所述的一个网有一个第一个对照单链捕捉DNA序列可以和阳性单链，捕捉DNA序列的一部分结合；至少一个上述的网有一个目的单链捕捉DNA序列与相应的检测样品中的目的DNA序列有特异性，因此阳性对照DNA序列与第一对照单链捕捉DNA序列相结合，其中结合的阳性DNA序列有一个双链区和一个单链区；并且存在于检测样品中的目的DNA序列与目的单链捕捉DNA序列相结合，其中结合的DNA序列有一个双链区和一个单链区；(D)加入一种冲洗溶液到柱中除去未结合DNA；(E)加入DNA探针来提供可检测的标记物来连接步骤(C)中形成的结合阳性对照DNA序列的单链部分和结合目的DNA序列的单链部分；(F)加入一种冲洗溶液到柱中除去未结合的DNA探针；以及(G)检测每个网的任何信号。另外，该方法可进一步包括加入与探针反应的底物来产生可检测的信号。阳性对照单链DNA序列用一个待检测的目的DNA序列制备，制备方法选自如下任一方法(1)在一个预定的切割位点插入一个对照DNA片段到一个待检测的目的DNA序列中到；以及(2)从目的DNA序列的预定的切割位点除去一个小片段DNA。进一步的，本方法中步骤(C)进一步包括加入一个阴性对照DNA序列到检测柱；其中检测柱也有一个其上含有第二对照单链捕捉DNA序列的对照网。用于结合阴性对照DNA序列，因此阴性对照DNA序列与第二对照单链捕捉序列结合形成一个结合的阴性对照DNA序列。阴性对照单链DNA序列不同于目的DNA序列也不同于阳性对照DNA序列。在其它方面，本专利技术提供了一种方法用于检测测试样品中的一个RNA序列的存在。检测测试样品中一段RNA序本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测测试样品中测试物质存在的方法，包括步骤： （ａ）在一个测试柱中加入一种测试样品和一种对照物质，该柱至少有两个网，所述的一个网上有一种对照捕捉物质；至少所述的一个网有一种目的捕捉物质其特异于测试样品中的待检测的相关测试物质，以使对照捕捉物质与对照物质结合，形成一种结合的对照物质；并且目的捕捉物质与相关的测试物质结合形成结合物质； （ｂ）冲洗测试柱，除去没有被结合到捕捉物质上的物质；以及 （ｃ）检测每一个网上结合物质的存在。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：陈海星，
申请(专利权)人：ACGT医药公司，
类型：发明
国别省市：CA[加拿大]