一种检测空肠弯曲菌的方法技术

本发明专利技术涉及空肠弯曲菌的荧光ＰＣＲ检测，提供一种空肠弯曲菌的实时荧光ＰＣＲ检测方法，应用抗血清和磁性微珠制备空肠弯曲菌免疫磁珠，利用免疫磁珠直接捕获检样中的空肠弯曲菌，煮沸法提取空肠弯曲菌的ＤＮＡ，设计合成用于扩增空肠弯曲菌鞭毛蛋白Ａ（ｆｌａＡ）基因的引物与探针和／或空肠弯曲菌的马尿酸酶（ｈｉｐＯ）基因的引物与探针，通过荧光ＰＣＲ技术检测得到扩增产物的荧光信号；其中ｆｌａＡ基因的引物序列为ｆｌａＡ１：５’－ｃｔｇａａｔｔｔｇａｔａｃｃｔｔａａｇｔｇｃａｇｃ－３’／ｆｌａＡ２：５’－ａｇｇｃａｃｇｃｃｔａａａｃｃｔａｔａｇｃｔ－３’，探针序列为５’－ｔｇｔｇａａａｇａａｔｔｔａｔｃｃｔａａａｇａｔｇａｇｃａａｇｇａｇａ－３’ｈｉｐＯ基因引物序列为ｈｉｐＯ１：５’－ｔｇｃｔｔｃｔｔｔａｃｔｔｇｔｔｇｔｇｇｃｔｔｔ－３’／ｈｉｐＯ２：５’－ｇｃｔｃｃｔａｔｇｃｔｔａｃａａｃｔｇｃｔｇａａｔｔ－３’，探针序列为５’－ｃａａａｇｃａｔａｇｔａｔｃｔｃｇｃａａｔｇｔｔｇａｔｃｃｃｃ－３’，本发明专利技术为畜禽等食品中的空肠弯曲菌的检测提供快捷方法。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细菌的基因检测，特别涉及空肠弯曲菌的荧光PCR检测。
技术介绍
空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是近十几年来被认识的世界范围广泛流行的人兽共患病原菌。鸟、禽、狗、牛、猪等动物是该菌的贮存宿主，其中猪带菌率为30％，奶牛带菌率为10.7％，鸡带菌率高达60％～95％。该菌可引起牛和绵羊流产，火鸡肝炎和蓝冠病，童子鸡和雏鸡坏死性肝炎，以及雏鸡、犊牛和仔猪腹泻等多种疾病。空肠弯曲菌可以通过动物、鸟和患病者的粪便进入环境中，由于该菌对环境较敏感，所以不可能在宿主外存活时间太长，但在水中可以进入一种称为“非可培养状态”(Viable butnon-culturerable，VNC)的休眠期。在条件适宜时，VNC状态的空肠弯曲菌可增殖生长，通过环境及食物链进入人体。接触畜禽类，或食入受到污染的禽制品、水源和牛奶是该菌感染人体的主要媒介。空肠弯曲菌可引起人体急性肠炎和食物中毒，并引发格林-巴利综合症、反应性关节炎、瑞特氏病和肝炎等严重的并发症。世界卫生组织已将该病列为最常见的食源性传染病之一，并指出必须加强监测各地区空肠弯曲菌在动物和人体中的分布，减少或切断本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测空肠弯曲菌的方法，利用抗血清免疫磁珠直接捕获检样中的空肠弯曲菌，磁珠捕获的细菌进行ＤＮＡ抽提，其特征在于：设计合成用于扩增空肠弯曲菌鞭毛蛋白Ａ（ｆｌａＡ）基因的引物与探针和／或空肠弯曲菌马尿酸酶（ｈｉｐＯ）基因的引物与探针，通过荧光ＰＣＲ技术检测得到扩增产物相应的荧光信号；其中ｆｌａＡ基因的引物序列为ｆｌａＡ１：５’－ｃｔｇａａｔｔｔｇａｔａｃｃｔｔａａｇｔｇｃａｇｃ－３’／ｆｌａＡ２：５’－ａｇｇｃａｃｇｃｃｔａａａｃｃｔａｔａｇｃｔ－３’，探针序列为５’－ｔｇｔｇａａａｇａａｔｔｔａｔｃｃｔａａａｇａｔｇａｇｃａａｇｇａｇａ－３’；ｈｉｐＯ基因引物序列为ｈｉｐＯ１：５’－ｔｇｃｔｔ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘光明，韩雅莉，章跃陵，
申请(专利权)人：汕头大学，
类型：发明
国别省市：44[中国|广东]