一种基于去核骨髓间充质干细胞构建人工红细胞的方法及应用技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及一种基于去核骨髓间充质干细胞构建新型人工红细胞的方法。本发明专利技术拟建立一种新型的人工红细胞构建方法，将血红蛋白α和β亚基融合表达，以骨髓间充质干细胞为载体，通过慢病毒感染的方式构建稳定表达血红蛋白四聚体的稳转细胞株，具有载氧和释氧功能。然后采用离心去核的方法，去除稳转细胞株细胞核，获得与成熟红细胞大小类似且具有运输氧功能的人工红细胞。该方法构建的人工红细胞，在目前血液储量不足，或大出血等紧急情况下，可以作为血液替代品，短时间内替代血液中的红细胞承担输送氧气的作用，使患者缺血症状及并发症得到缓解，为患者争取宝贵的抢救时间和额外等待血源的时间。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，具体涉及一种基于去核骨髓间充质干细胞构建新型人工红细胞的方法及应用。

技术介绍

1、大出血患者的病情危重且病程发展较快，由于急性大量失血导致血容量急剧下降，有效循环血量减少，循环系统功能衰竭，无法维持正常的血压、血流和血液灌注，使氧合受到影响，导致肾脏、心脏和大脑等重要脏器缺氧，引起代谢性酸中毒和炎症因子释放。因此出血休克的早期干预极为重要。

2、对于失血休克的干预治疗，首先要进行止血，再进行复苏。以大量血液进行静脉输液补充血液成分如红细胞、血浆等至关重要，是出血性休克救治中的核心措施之一，也是临床救治的第一选择。通常伴随使用晶体液(如生理盐水、林格液)或胶体液(如白蛋白、羟乙基淀粉)进行复苏，维持液体容量，恢复循环血流。

3、然而，现有输血的治疗策略存在许多限制。首先是，需要交叉配型，导致紧急情况下输血不及时。其次，血浆长期处于供应紧张状态，全球血液供应难以满足需求，同时人口老龄化使得血液短缺的情况在未来会更加严重。此外，输送血浆携带的人体免疫缺陷病毒(hiv)、肝炎、克雅氏病或西尼罗河病毒等等血源性病原体也是本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种双亚基融合表达系统，其特征在于，包括第一表达组和第二组，所述第一表达组与第二表达组通过自剪切短肽片段连接；所述第一表达组包括第一亚基片段和第一标签蛋白片段；所述第二表达组包括第二亚基片段和第二标签蛋白片段。

2.如权利要求1所述双亚基融合表达系统，其特征在于，所述第一表达组中，所述第一亚基片段通过N端融合所述第一标签蛋白片段；所述第二表达组中，所述第二亚基片段通过N端融合所述第二标签蛋白片段。

3.如权利要求1所述双亚基融合表达系统，其特征在于，所述双亚基融合表达系统通过与骨架质粒重组形成重组表达质粒进行表达；所述骨架质粒包括启动子、荧光蛋白表达序列、抗性...

【技术特征摘要】

1.一种双亚基融合表达系统，其特征在于，包括第一表达组和第二组，所述第一表达组与第二表达组通过自剪切短肽片段连接；所述第一表达组包括第一亚基片段和第一标签蛋白片段；所述第二表达组包括第二亚基片段和第二标签蛋白片段。

2.如权利要求1所述双亚基融合表达系统，其特征在于，所述第一表达组中，所述第一亚基片段通过n端融合所述第一标签蛋白片段；所述第二表达组中，所述第二亚基片段通过n端融合所述第二标签蛋白片段。

3.如权利要求1所述双亚基融合表达系统，其特征在于，所述双亚基融合表达系统通过与骨架质粒重组形成重组表达质粒进行表达；所述骨架质粒包括启动子、荧光蛋白表达序列、抗性基因；所述荧光蛋白表达序列通过所述自剪切短肽片段连接所述第一表达组。

4.如权利要求3所述双亚基融合表达系统，其特征在于，所述自剪切短肽片段包括短肽p2a片段；所述第一亚基片段包括血红蛋白α亚基片段；所述第一标签蛋白片段...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛爱华，陈心怡，胡忠，魏炽炬，陈淑鑫，周子慧，
申请(专利权)人：汕头大学，
类型：发明
国别省市：