一种2,4‑二甲基苯硫酚有关物质的检测方法技术

本发明专利技术提供一种2,4‑二甲基苯硫酚有关物质的高效液相色谱检测方法。所用液相色谱测定条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相为含有阳离子对的磷酸盐缓冲液‑甲醇。该方法具有方法简单便捷，专属性好，灵敏度高，重复性好等优点，适合于2,4‑二甲基苯硫酚中有关物质的定性和定量检测。

A detection method of 2,4 two methyl thiophenol related substances

The invention provides a high performance liquid 2,4 two methyl thiophenol related substances chromatography detection method. The liquid chromatography condition: chromatographic column with eighteen alkyl silane bonded silica as filler, the mobile phase containing phosphate buffer methanol cation on the. This method has a simple and convenient method, good specificity, high sensitivity, good repeatability, suitable for 2,4 two methyl thiophenol related substances in the qualitative and quantitative detection.

【技术实现步骤摘要】
一种2,4-二甲基苯硫酚有关物质的检测方法
本专利技术涉及检测方法，具体涉及一种用高效液相色谱分离分析2,4-二甲基苯硫酚有关物质的方法。
技术介绍
2，4-二甲基苯硫酚，又名2，4-二甲基苯硫醇，为一种常用的医药中间体，其结构式如下：分子式：C8H10S，分子量：138.23。2,4-二甲基苯硫酚最常用于合成抗抑郁药物—沃替西汀，根据2,4-二甲基苯硫酚的工艺路线，可能存在的杂质有3-甲基苯硫酚、4-甲基苯硫酚、2,5-二甲基苯硫酚、3,4-二甲基苯硫酚、3,5-二甲基苯硫酚、2,6-二甲基苯硫酚。这些杂质的存在将产生一系列的副反应，最终大大影响产物的纯度，后续将需要繁复的工艺进行分离纯化。如文献1：Stability-indicatingreversed-phaseHPLCmethoddevelopmentandcharacterizationofimpuritiesinvortioxetineutilizingLC-MS,IRandNMR(LeiLiuetal.，JournalofPharmaceuticalandBiomedicalAnalysis,117:325-332,2015)公开了合成沃替西汀的4种路线中涉及的杂质及副产物，合成路线如下：从上述路线可以看出，路线1-3均采用2,4-二甲基苯硫酚为中间体合成沃替西汀，其中路线3的2，4二甲基苯硫酚(SMB)由于可能存在杂质2，6二甲基苯硫酚(SMB-1)使得产物中杂质Imp-E产生。因此文献1通过高效液相色谱法来测定产物沃替西汀中的各杂质(A-H)，以此推测原料中可能存在的杂质及产生的副反应。然而，文献1仅能反映原料中可能含有的杂质，并没有提供一种直接对原料中的杂质加以控制的方法，而现有技术也没有公开适合于分析检测2,4-二甲基苯硫酚有关物质的方法。为了减少副反应的发生，提高产物收率和纯度，避免后续繁复的分离纯化过程，有必要对2,4-二甲基苯硫酚原料进行质量控制。色谱法由于方法简便、快速，灵敏度高，可以同时反映化学组成及含量情况等特点，已经成为应用范围最广，最主要的方法之一。常用的色谱法有高效液相色谱法(HPLC)和气相色谱法(GC)等。考虑到2,4-二甲基苯硫酚分子量较小，且具有一定的挥发性，本申请的专利技术人也尝试采用气相色谱法，以OP-WAX和DB-FFAP为色谱柱对2,4-二甲基苯硫酚有关物质进行检测，然而分离效果并不理想。因此，本专利技术将提供一种适合于分离检测2,4-二甲基苯硫酚有关物质的高效液相色谱分析方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种分离分析2,4-二甲基苯硫酚有关物质的高效液相色谱法，从而实现对2,4-二甲基苯硫酚的质量控制。专利技术人通过多次试验，最终确定采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，有机相与水相的混合溶液作为流动相，其中，有机相选自甲醇，水相选自磷酸盐缓冲液，水相中含有阳离子对试剂，以对2,4二甲基苯硫酚及其有关物质进行效分离。专利技术人曾尝试以乙腈作为有机相，然而实验发现乙腈-缓冲液体系不能完全检测出每一个峰。专利技术人也尝试以甲醇-水作为流动相，采用等度洗脱或梯度洗脱的方式进行分离分析，然而采用梯度洗脱时，由于2,4-二甲基苯硫酚与其有关物质性质非常相似，使得2,4-二甲基苯硫酚色谱法与其相邻杂质峰并不能有效分离。而采用等度洗脱，在60min内仅能分离检测出2个色谱峰，保留时间过长，不利于检测。因此本专利技术最终确定以磷酸盐缓冲液作为水相，并在水相中加入阳离子对试剂以改善2,4二甲基苯硫酚及其有关物质分离效果。其中，磷酸盐选自磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵中的一种或几种的混合物，优选磷酸二氢钾。专利技术人曾试验以醋酸盐或甲酸盐缓冲液作为流动相，但在本专利技术所选的低波长(230nm)测定条件下，色谱检测的基线噪音较大。本专利技术所述的阳离子对选自四丁基氢氧化铵、四丁基氯化铵、四丁基溴化铵、四丁基碘化铵、四甲基氢氧化铵、四甲基氯化铵、四甲基溴化铵、四甲基碘化铵、四乙基氢氧化铵、四乙基氯化铵、四乙基溴化铵、四乙基碘化铵等适用于偏酸性化合物的阳离子对中的一种或几种。本专利技术所述的甲醇与含阳离子对的磷酸盐缓冲液的体积比为70～55：30～45，优选60：40。专利技术人试验发现，当流动相中甲醇比例低于55％，2,4-二甲基苯硫酚保留时间过长，不利于检测。而当甲醇比例大于70％，4-甲基苯硫酚的分离度不符合要求，3-甲基苯硫酚和4-甲基苯硫酚不能有效分离。本专利技术的磷酸盐缓冲液的浓度为0.05～0.1mol/L，优选0.05mol/L。本专利技术的阳离子对的质量浓度为3～4.5％，优选为4％。本专利技术人通过试验发现，当水相中阳离子对的质量浓度小于3％或大于4.5％，2,4-二甲基苯硫酚与相邻杂质峰的分离度不符合要求，不适用于检测。本专利技术的液相色谱条件中，柱温为20～40℃，优选为30℃。本专利技术的液相色谱条件中，检测波长为230nm。本专利技术中各杂质与2,4-二甲基苯硫酚均有紫外吸收，结合吸收曲线，本专利技术选择检测波长为230nm。本专利技术的液相色谱条件中，流速为0.8～1.2ml/min，优选为1.0ml/min。本专利技术所述的检测方法，可以通过以下方法实现：1)取2,4-二甲基苯硫酚样品适量，加甲醇稀释制成每1ml中约含2,4-二甲基苯硫酚2mg的溶液；2)设置流动相的流速为0.8-1.2ml/min，检测波长为230nm，色谱柱的柱温为20-40℃；3)精密量取1)的样品溶液10-20μl，注入液相色谱仪，完成有关物质的测定。本专利技术所述的高效液相色谱分离测定2,4-二甲基苯硫酚原料药的有关物质的方法简单便捷，专属性好，灵敏度高，重复性好，适合于2,4-二甲基苯硫酚中有关物质的定性和定量检测，特别适合于分离检测3-甲基苯硫酚、4-甲基苯硫酚、2,5-二甲基苯硫酚、3,4-二甲基苯硫酚、3,5-二甲基苯硫酚、2,6-二甲基苯硫酚等有关物质的含量，为控制以其起始原料或中间体制备的最终药物如沃替西汀的质量提供有力保障。附图说明图1为对比实施例1中系统适用性溶液的HPLC色谱图；图2为对比实施例2中系统适用性溶液的HPLC色谱图；图3为对比实施例3中系统适用性溶液的HPLC色谱图；图4为对比实施例4中系统适用性溶液的HPLC色谱图；图5为对比实施例5中系统适用性溶液的HPLC色谱图；图6为实施例1中系统适用性溶液的HPLC色谱图；图7为实施例2中试验编号1的系统适用性溶液的HPLC色谱图；图8为实施例2中试验编号2的系统适用性溶液的HPLC色谱图；图9为实施例2中试验编号3的系统适用性溶液的HPLC色谱图；；图10为实施例2中试验编号4的系统适用性溶液的HPLC色谱图；图11为实施例2中试验编号5的系统适用性溶液的HPLC色谱图；图12为实施例2中试验编号6的系统适用性溶液的HPLC色谱图；图13为实施例2中试验编号7的系统适用性溶液的HPLC色谱图；图14为实施例2中试验编号8的系统适用性溶液的HPLC色谱图；图15为实施例2中试验编号9的系统适用性溶液的HPLC色谱图；图16为实施例2中试验编号10的系统适用性溶液的HPLC色谱图；图17为实施例2中试验编号11的系统适用性溶液的HPLC色谱图；图18为实施例2中试验编号12的系统适用性溶液的HPL本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种2,4‑二甲基苯硫酚有关物质的检测方法，其特征在于采用高效液相色谱法进行，其中所述液相色谱测定条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，以有机相与水相的混合溶剂作为流动相；其中所述流动相中的有机相为甲醇，水相为磷酸盐缓冲溶液，水相中含有阳离子对试剂。

【技术特征摘要】
1.一种2,4-二甲基苯硫酚有关物质的检测方法，其特征在于采用高效液相色谱法进行，其中所述液相色谱测定条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，以有机相与水相的混合溶剂作为流动相；其中所述流动相中的有机相为甲醇，水相为磷酸盐缓冲溶液，水相中含有阳离子对试剂。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于水相中的阳离子对试剂为四丁基氢氧化铵、四丁基氯化铵、四丁基溴化铵、四丁基碘化铵、四甲基氢氧化铵、四甲基氯化铵、四甲基溴化铵、四甲基碘化铵、四乙基氢氧化铵、四乙基氯化铵、四乙基溴化铵、四乙基碘化铵中的一种或几种。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于有机相与水相的体积比为70～55：30～45。4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于有机相与水相的体积比为60：40。5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述磷酸盐选自磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢铵中的一种或几种的混合物，优选磷酸二氢钾。6...

【专利技术属性】
技术研发人员：柯潇，郑强，张伟，
申请(专利权)人：成都弘达药业有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51