5＇-核苷酸酶活性测定方法及5＇-核苷酸酶诊断试剂盒技术

本发明专利技术涉及一种测定５′－核苷酸酶活性的方法，同时本发明专利技术还涉及５′－核苷酸酶诊断试剂盒，属于医学检验测定技术领域。该试剂盒包括缓冲液、肌苷单磷酸、腺苷三磷酸、磷酸烯醇式丙酮酸、还原型辅酶、肌苷激酶、丙酮酸激酶、乳酸脱氢酶、稳定剂，通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生酶偶联反应，再将最终反应物置于生化分析仪下，检测主波长吸光度变化的情况（速度），从而测算出５′－核苷酸酶的活性大小。采用本发明专利技术完全可以通过生化分析仪器得出所需的测定结果，并且灵敏度高、精确度好，不受内外源物质的污染，便于推广应用。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种测定5′-核苷酸酶活性的方法，同时本专利技术还涉及用于实现该方法的5′-核苷酸酶诊断试剂盒，属于医学检验测定

技术介绍
医学研究表明，5′-核苷酸酶(5NT)增高主要见于阻塞性黄胆，也可见于肝癌和肝炎。在胆汁淤积并发胆管炎、原发性和继发性胆汁性肝硬化和慢性肝炎时，5NT升高率高于碱性磷酸酶；肝肿瘤和肝肉芽肿时5NT升高的敏感性高于碱性磷酸酶。因为5′-核苷酸酶活性无生理性升高，对于诊断婴幼儿肝病和妊娠性肝功胆汁淤积较碱性磷酸酶不但敏感，而且有特异性。因此测定5′-核苷酸酶的活性对于疾病的诊断具有重要意义。5′-核苷酸酶的活性测定方法很多，主要有同位素底物法、化学强酸测磷法(1925年)。据申请人了解，目前国际上普遍采用同位素底物测试法，方法为5′-核苷酸酶作用于H3-dUMP，终止反应后，通过离子交换层析柱分析结果，求得5′-核苷酸酶活性。或者利用5′-核苷酸酶作用于单磷酸腺苷后产生无机磷，再用化学强酸法分析无机磷含量得以计算出5′-核苷酸酶的活性。同位素底物法方法复杂还有同位素污染，而且需要同位素测定仪，因此难以切实推广应用。无机磷测定法是1925年本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种５′－核苷酸酶活性测定方法，步骤如下：１）、将样品与主要由腺苷三磷酸、磷酸烯醇式丙酮酸、还原型辅酶、肌苷激酶、丙酮酸激酶、乳酸脱氢酶组成的试剂混合，使之发生如下原理的反应：肌苷单磷酸＋水＊肌苷＋单磷酸腺苷三磷酸＋ 肌苷＊腺苷二磷酸＋肌苷单磷酸腺苷二磷酸＋磷酸烯醇式丙酮酸＊腺苷三磷酸＋丙酮酸丙酮酸＋还原型辅酶＊乳酸＋氧化型辅酶２）、检测最终反应物在主波长３４０ｎｍ吸光度下降的速度，测算出５′－核苷酸酶的活性大小。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王尔中，
申请(专利权)人：苏州艾杰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]