治疗和测定制造技术

描述了一种预测肿瘤细胞对铂基化疗剂体内治疗的应答的方法，该方法基于测定编码ＢＣＲＰ蛋白的一种或多种基因的表达，其中所述基因增强的表达与对该化疗剂的增强的耐药性相关。还描述了使癌细胞特别是结肠直肠癌细胞对治疗敏感的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及癌症治疗。特别是，涉及测定对抗癌药如铂类抗肿瘤药耐药性的敏感性的测定和方法，以及用于治疗癌症的方法和组合物。
技术介绍
结肠直肠癌(CRC)是西方国家癌症相关死亡的排在第二位的原因。世界上新的CRC病例数不断增长，并且约有一半的CRC患者发展为转移性疾病。对这种恶性肿瘤最有效的药物是抗代谢物5-FU，它是在50多年以前开发的。对于手术切除后III期CRC患者，已经证明基于5-FU的辅助化学治疗使无瘤生存率和总生存率分别提高35％和22％(1)。但是，对于晚期CRC，单一的5-FU治疗仅有10-15％的响应率(2)。提高响应率的努力已导致将5-FU与更新的细胞毒性药物CPT-11和奥沙利铂联用。这能够显著改善响应率(40-50％)和延长无进展生存期(3，4)。尽管具有这样的改善，但是超过一半的患者经过晚期CRC化学治疗而没有任何可测量的肿瘤缩小。随着治疗选择的增多，预测性标记检测(在辅助和转移情况中)能够允许根据肿瘤的分子表型和患者选择化疗方案。这将改善响应率和生存率，并且防止患者不必要地受到他们不大可能从中受益的药物的毒性作用。由于基于5-FU的化学治疗在结肠直肠癌治疗中的广泛应用，已经报道了该药物的大多数预测性的数据。已经显示胸苷酸合酶(TS)的表达预测对5-FU的较差的应答(5-7)。另外，高表达水平的二氢嘧啶脱氢酶(DPD)和TP与转移性疾病对5-FU的耐药性有关(8，9)。然而，当前可以使用几种分子标记，它们允许预测性地确定最可能对奥沙利铂或CPT-11应答的患者。已经显示ERCC1和TS基因的高mRNA表达预测奥沙利铂联合5-FU治疗的患者的较差应答(10)，提示ERCC1可能是奥沙利铂敏感性的决定因子。在CPT-11耐药细胞系中已经证明TOPOI表达降低。但是，还没有描述治疗前TOPOI表达与肿瘤对CPT-11的应答之间的一致相关性。尽管能够获得一些关于化疗剂耐药性决定因子的数据，但是仍然需要用于进一步研究这种耐药性的有效模式系统。专利技术概述本专利技术开发和表征了一组来源于HCT116结肠直肠癌细胞的5-FU、CPT-11和奥沙利铂耐药的p53野生型和裸细胞系。这些细胞系分别地和共同地构成本专利技术的独立方面。这些模式系统已经应用，并且能够用来检测大量可能重要的对这些化学治疗应答的介质的mRNA表达水平，以鉴定可用于临床情况的耐药性或敏感性的关键调节剂。这些细胞系可以在多种筛选方法中分别或一起使用。例如，本专利技术的细胞系可以在筛选方法中用来鉴定耐药性的一个或多个决定因子。如实施例所述，本专利技术人表征了本专利技术的细胞系，鉴定了对特定化疗剂的大量耐药性标记。对于奥沙利铂耐药细胞系，本专利技术人已经确定了ABC半转运蛋白BCRP/ABCG2的过量表达与对铂基化疗剂(platinum-basedchemotherapeutic)奥沙利铂的耐药性之间的相关性。证明了癌细胞中高水平的BCRP表达抑制了奥沙利铂诱导的这些细胞的凋亡，这使得能够早期确定用基于铂的药物方案治疗对特定患者是否可能有效。因此，本专利技术在测定中可以用来确定用铂基化疗剂治疗对特定患者是否可能有效。因此，在本专利技术的第一方面，提供了一种预测肿瘤细胞对铂基化疗剂体内治疗的应答的方法，该方法包括以下步骤(a)提供来自患者的包含肿瘤细胞的体外样品；(b)测定编码BCRP蛋白的一种或多种基因的基础表达，其中所述基因增强的表达与对该化疗剂的增强的耐药性相关。可以将肿瘤细胞中的基础表达与一个或多个对照样品中的基础表达进行比较。对照样品可以是患者的正常(即非肿瘤)细胞，优选与包含肿瘤细胞的样品来自同一患者。在一个替代实施方案中，对照样品可以是奥沙利铂敏感的癌细胞系。例如，对照样品可以是HCT116奥沙利铂敏感的癌细胞系。在本专利技术优选的实施方案中，如果暴露于所述化疗剂的样品中BCRP的表达是对照样品中BCRP的表达的至少2倍，优选至少3倍，更优选至少4倍，甚至更优选至少5倍，再更优选至少10倍，最优选至少12倍，则认为该表达增强。化疗剂可以是任何适于肿瘤治疗的铂基化疗剂。例如，这种化疗剂可以是奥沙利铂、顺铂、卡铂。在本专利技术优选的实施方案中，该化疗剂是奥沙利铂。本专利技术的方法可以用来预测任何肿瘤细胞对铂基化疗剂体内治疗的应答。但是，在本专利技术特别优选的实施方案中，肿瘤细胞是结肠直肠癌细胞。证明了肿瘤细胞中BCRP的过量表达与对铂基化疗剂的增强的耐药性相关，这提供了使肿瘤细胞对铂基化疗剂治疗敏感的可能性。因此，在第二方面，本专利技术提供了一种使癌细胞对铂基化疗剂敏感的方法，该方法包括向所述细胞施用BCRP抑制剂的步骤。进而，在本专利技术的第三方面，提供了一种治疗癌症的方法，包括给予治疗有效量的BCRP抑制剂和铂基化疗剂。BCRP抑制剂和铂基化疗剂可以分开、相继或同时给药。在本专利技术的第四方面，提供了BCRP抑制剂和铂基化疗剂在制备治疗癌症的药物中的应用。根据第五方面，提供了一种用于治疗癌症的药物组合物，其中该组合物包含BCRP抑制剂、铂基化疗剂和药物可接受的赋形剂、稀释剂或载体。在第六方面，提供了一种产品，其包含a)BCRP抑制剂，和b)铂基化疗剂作为组合制剂，用于同时、分开或相继用于治疗癌症。在第七方面，提供了一种治疗癌症的药盒，该药盒包括a)BCRP抑制剂b)铂基化疗剂，和c)用于分开、相继或同时给予(a)和(b)的说明。在本专利技术的优选实施方案中，BCRP抑制剂在化疗剂之前给药。本专利技术的方法可以使用任何合适的BCRP抑制剂。该抑制剂可以是肽或非肽。例如，合适的BCRP抑制剂可以是GF120918(de BruinM.，Miyake K.，Litman K.，Robey R.，Bates S.E.Cancer Lett.，146117-126，1999；Kruijtzer CM J Clin Oncol.2002 Jul 1；20(13)2943-50)。在一优选实施方案中，所述BCRP抑制剂是调节BCRP编码基因表达的反义分子。在一更优选的实施方案中，所述BCRP抑制剂是RNAi剂，其调节BCRP基因的表达。该试剂可以是siRNA、shRNA、ddRNAi构建体或其转录模板，例如编码shRNA的DNA。在优选实施方案中，该RNAi剂是与BCRP编码基因的mRNA序列的一部分同源的siRNA。本专利技术的及用于本专利技术的优选RNAi剂的长度为15-25个核苷酸，优选19-22个核苷酸，最优选21个核苷酸。此外，本专利技术也可以用于鉴定在本专利技术中可以应用以及在化疗治疗和方案中可以应用的新的BCRP抑制剂。这些试剂可以直接或间接地减少或抑制BCRP的作用。因此，在本专利技术的第八方面，提供了一种鉴定用于治疗癌症，优选结肠直肠癌的化疗剂的测定方法，该方法包括以下步骤 (a)提供肿瘤细胞样品；(b)使该样品的一部分暴露于候选化疗剂；(c)测定所述样品中BCRP的表达，其中BCRP表达比对照样品中的表达降低表示有化疗活性。在对照样品中的表达可以根据未暴露于所述候选剂的所述肿瘤细胞的不同样品或者根据在应用候选化疗剂之前在同一样品中的表达来测定。本专利技术每一方面的优选的特征对于其他每一方面要作必要的修正，除非本文另外说明。专利技术详述如上所述，本专利技术提供了新的细胞系，该细胞系可用作研究对各本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种预测癌细胞对铂基化疗剂体内治疗的应答的方法，该方法包括以下步骤：（ａ）提供来自患者的包含肿瘤细胞的体外样品；（ｂ）测定编码ＢＣＲＰ蛋白的一种或多种基因的基础表达，其中所述基因增强的表达与对所述化疗剂的增强的耐药性相关。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：帕特里克杰勒德约翰斯顿，丹尼尔朗利，
申请(专利权)人：英国贝尔法斯特女王大学，
类型：发明
国别省市：GB[英国]