一种L‑天冬酰胺酶突变体及其构建方法技术

本发明专利技术公开了一种L‑天冬酰胺酶突变体及其构建方法，属于基因工程、酶工程领域。本发明专利技术的突变体是在SEQ ID N0.2所示的核苷酸的基础上，将其编码的第298位赖氨酸突变成亮氨酸。本发明专利技术得到的突变体在枯草芽孢杆菌中表达，通过镍柱亲和层析纯化目的蛋白，得到的突变体最适温度从95℃降低到85℃，最适pH从8降低到7，Km值从6.5降低到4.9，比酶活突变前后无变化。本发明专利技术表明298位赖氨酸残基对酶底物亲和性有较大影响，对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础，并提高了该酶的工业应用潜力。

A L asparaginase mutants and its construction method

【技术实现步骤摘要】
一种L-天冬酰胺酶突变体及其构建方法
本专利技术涉及一种L-天冬酰胺酶突变体及其构建方法，尤其是一种最适温度、最适pH和km降低的L-天冬酰胺酶突变体及其构建方法，属于基因工程领域、酶工程领域。
技术介绍
L-天冬酰胺酶(E.C.3.5.1.1)能催化L-天冬酰胺脱氨生成L-天冬氨酸和氨。L-天冬酰胺酶广泛存在微生物、动物及植物中。E.coli，Erwiniachrysanthemi及E.carotovora中分离纯化的L-天冬酰胺酶已经被用作化疗药中的成分，被广泛应用于治疗急性淋巴细胞白血病，淋巴肉瘤及网状细胞肉瘤等疾病中。由于L-天冬酰胺酶能降解油炸、烘焙等高温处理食品中致癌物质丙烯酰胺的前体物质L-天冬酰胺的含量，从源头上降低了致癌物质丙烯酰胺的含量，也被应用与食品行业中。食品行业中，利用L-天冬酰胺酶处理食品，常使用“热烫法”，即将食品置于较高温度(如85℃)的水中，并加入L-天冬酰胺酶来降低丙烯酰胺的前体物质L-天冬酰胺，进而降低高温处理食品中的丙烯酰胺含量(LWT-FoodScienceandTechnology,2011,44(6):1473-1476；Molecula本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种L‑天冬酰胺酶突变体，其特征在于，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种L-天冬酰胺酶突变体，其特征在于，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.编码权利要求1所述突变体的基因。3.一种含有权利要求2所述基因的载体或细胞。4.一种表达权利要求1所述L-天冬酰胺酶突变体的基因工程菌，其特征在于，以枯草芽孢杆菌为宿主。5.一种制备权利要求4所述基因工程菌的方法，其特征在于，是在SEQIDNO.2所示序列的基础上，将其编码的第298位酪氨酸突变成亮氨酸，得到重组基因，将重组基因连到表达载体得到重组质粒，重组质粒转化到枯草芽孢杆菌宿主菌中即得到枯草芽孢杆菌基因工程菌。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法具体是:(1)以SEQIDNO.2所示核酸序列为模板，以序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4、SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：张显，饶志明，李谞，杨套伟，徐美娟，张恒维，赵浩东，刘鹏，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32