手足口病混合感染中柯萨奇A组10型病毒的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种手足口病感染或混合感染中柯萨奇A组10型病毒(CV‑A10)的检测方法，该方法通过提取病毒RNA，用肠道病毒通用引物224和222进行RT‑PCR扩增，然后用引物AN89和AN88进行巢式PCR扩增，若经比对为非CV‑A10血清型，再根据CV‑A10序列设计特异CV‑A10上游引物CVA10TF和下游引物CVA10TR，以RT‑PCR产物为模板进行巢式PCR扩增，再取PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，即可鉴定。本发明专利技术所述方法具有操作简单、检测速度快、高准确率和低成本等优点，特别适用于大规模分子流行病学调查。

Detection of Coxsackie type 10 virus type 10 virus in mixed infection of hand foot and mouth disease

The invention discloses a HFMD infection or mixed infection of Coxsackie A virus type 10 in the odd (CV A10) detection method, the method by extracting virus RNA with enterovirus universal primers 224 and 222 RT PCR amplification, and then amplified by nested PCR using primers AN89 and AN88, by comparison for non CV serotype A10, according to the specific sequence of CV A10 CV design A10 upstream primer CVA10TF and primer CVA10TR, RT PCR products as template amplified by nested PCR, then PCR products were 1% agarose gel electrophoresis, can be identified. The method described in the present invention has the advantages of simple operation, fast detection speed, high accuracy rate and low cost, and is especially suitable for large-scale molecular epidemiological investigation.

【技术实现步骤摘要】
手足口病混合感染中柯萨奇A组10型病毒的检测方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种手足口病临床样品中柯萨奇A组10型病毒的检测方法。
技术介绍
自2008年以来，在中国，每年手足口病(Hand-foot-mouthdisease,HFMD)病例均在百万以上，并有死亡的报道。HFMD已经成为我国和东南亚国家的重大公共卫生问题之一。HFMD是由多种人类肠道病毒引起的常见传染病,引起HFMD的病原体主要为CV-A16、4、5、7、9、10,和B3、5、埃可病毒以及EV-A71，其中柯萨奇A组10型（coxsackievirusA10，CV-A10）已经成为除肠道病毒71型（enterovirus71，EV-A71）、CV-A16和CV-A6以外引起发病的主要病原体之一。在HFMD爆发期间，存在多种肠道病毒混合感染，混合感染有可能加重疾病和/或延长病程。因此，对混合感染监测有助于HFMD预防和治疗。在实际检验中，当HFMD已经被确定为某种肠道病毒感染后，想要确定是否还存在CV-A10的感染，通常还需要用CV-A10的特异引物进行RT-PCR，然后巢式PCR，通过琼脂糖电泳鉴定是否有C本文档来自技高网...

【技术保护点】
手足口病混合感染中柯萨奇A组10型病毒的检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：（1）提取病毒RNA，根据肠道病毒衣壳蛋白基因的特点设计肠道病毒通用引物进行半巢式PCR；首先用引物224(5’GCIATGYTIGGIACICAYRT 3’)和222（5’CICCIGGIGGIAYRWACAT 3’）进行第一次RT‑PCR扩增，然后再用引物AN89（5’CCAGCACTGACAGCAGYNGARAYNGG3’）和AN88（5’ACTGGACCACCTGGNGGNAYRWACAT 3’）根据CV‑A10序列设计特异CV‑A10上游引物CVA10TF（5’TACAAGCCGCGGAGACAGG3...

【技术特征摘要】
1.手足口病混合感染中柯萨奇A组10型病毒的检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：（1）提取病毒RNA，根据肠道病毒衣壳蛋白基因的特点设计肠道病毒通用引物进行半巢式PCR；首先用引物224(5’GCIATGYTIGGIACICAYRT3’)和222（5’CICCIGGIGGIAYRWACAT3’）进行第一次RT-PCR扩增，然后再用引物AN89（5’CCAGCACTGACAGCAGYNGARAYNGG3’）和AN88（5’ACTGGACCACCTGGNGGNAYRWACAT3’）根据CV-A10序列设计特异CV-A10上游引物CVA10TF（5’TACAAGCCGCGGAGACAGG3’）和下游引物C...

【专利技术属性】
技术研发人员：马绍辉，张捷，杨昭庆，刘红波，赵义林，张海浩，黄小琴，孙浩，
申请(专利权)人：中国医学科学院医学生物学研究所，
类型：发明
国别省市：云南,53