一种检测血清中甘胆酸的荧光偏振免疫分析方法及其应用技术

本发明专利技术属于免疫分析技术检测领域，公开了一种检测血清中甘胆酸的荧光偏振免疫分析方法。该方法包括：将荧光示踪物与已知不同浓度的甘胆酸标准品溶液混合，再加入甘胆酸多克隆抗体溶液混合孵育进行竞争反应，测得该体系的荧光偏振值；将测得的荧光偏振值与空白组的荧光偏振值的比值即为抑制率，以抑制率为纵坐标，已知甘胆酸标准品的浓度为横坐标，绘制标准曲线；以待测样品代替已知浓度的甘胆酸标准品，在相同条件下，测得孵育后体系的荧光偏振值，再根据标准曲线，计算得到该待测样品中甘胆酸的浓度。该方法与ELISA甘胆酸试剂盒进行对比，结果表明这两种方法有较好的相似性。交叉反应结果表明该多克隆抗体对甘胆酸具有很高的特异性。

A fluorescence polarization immunoassay for detecting cholic acid in serum and its application

The present invention belongs to the field of immunoassay technology detection, and discloses a fluorescence polarization immunoassay method for detecting cholic acid in serum. The method includes: the fluorescent tracer with known concentrations of glycocholic acid standard solution, adding cholylglycine polyclonal antibody solution was incubated for competitive reaction, the measured fluorescence polarization of the system; the fluorescence polarization value measured by the ratio of the fluorescence polarization and the blank group value is the inhibition rate and to inhibition rate as ordinate, cholylglycine standard of known concentration as abscissa, draw standard curve; product standards for cholylglycine test sample instead of known concentration, under the same conditions, the fluorescence polarization was measured after incubation system, according to the standard curve to calculate the concentration of glycocholic acid samples in the test. This method was compared with ELISA kits, and the results showed that the two methods had better similarity. The cross reaction results showed that the polyclonal antibody was highly specific to cholic acid.

【技术实现步骤摘要】
一种检测血清中甘胆酸的荧光偏振免疫分析方法及其应用
本专利技术属于免疫分析技术检测领域，具体涉及一种检测血清中甘胆酸的荧光偏振免疫分析方法及其应用。
技术介绍
甘胆酸是由胆酸和甘氨酸结合而成的结合型胆酸，是胆汁酸的主要成分之一。在肝细胞内，胆固醇经过极其复杂的酶促反应，转变成初级胆汁酸，包含胆酸(CA)和鹅去氧胆酸(CDCA)，胆酸的类固醇核上有三个羟基(C3、C7、C12)，侧链末端的羟基以肽键与甘氨酸结合成为甘胆酸，分子量为466.3。甘胆酸由肝细胞合成后，经毛细胆管、胆管排入胆囊，随同胆汁进入十二指肠，帮助食物中脂肪的消化吸收。大部分胆汁酸在回肠和结肠被重吸收，经门静脉再回肝脏，由肝细胞摄取再利用，重吸收的甘胆酸又进入肝-肠循环，通过这种机制，机体能充分利用甘胆酸。在正常情况下，外周血中甘胆酸含量甚微，正常人无论空腹或餐后，其甘胆酸浓度都稳定在低水平。当人体肝细胞受损或胆汁淤滞时，就会引起甘胆酸代谢和循环紊乱，使肝细胞摄取甘胆酸的能力下降，导致血液中甘胆酸含量升高，且甘胆酸含量的高低与肝细胞损害及胆汁酸代谢障碍的严重程度相关。有实验数据显示急性肝炎、原发性肝癌、肝硬化等患者血清本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测血清中甘胆酸的荧光偏振免疫分析方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将荧光示踪物与一系列已知浓度的甘胆酸标准品溶液混合，再加入甘胆酸多克隆抗体溶液混合孵育进行竞争反应，测得该体系的荧光偏振值；将测得的荧光偏振值mP与空白组的荧光偏振值mP0的比值即为抑制率，以抑制率mP/mP0为纵坐标，已知甘胆酸标准品的浓度为横坐标，绘制标准曲线；y＝0.80675/[(1+(x/682.21468)

【技术特征摘要】
2017.04.27 CN 20171028977251.一种检测血清中甘胆酸的荧光偏振免疫分析方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将荧光示踪物与一系列已知浓度的甘胆酸标准品溶液混合，再加入甘胆酸多克隆抗体溶液混合孵育进行竞争反应，测得该体系的荧光偏振值；将测得的荧光偏振值mP与空白组的荧光偏振值mP0的比值即为抑制率，以抑制率mP/mP0为纵坐标，已知甘胆酸标准品的浓度为横坐标，绘制标准曲线；y＝0.80675/[(1+(x/682.21468)0.96872]+0.1536；(2)将荧光示踪物与待测样品混合，再加入甘胆酸多克隆抗体溶液混合孵育进行竞争反应，测得该体系的荧光偏振值，再根据标准曲线，计算得到该待测样品中甘胆酸的浓度。2.根据权利要求1所述的一种检测血清中甘胆酸的荧光偏振免疫分析方法，其特征在于：步骤(1)所述荧光示踪物为甘胆酸半抗原与荧光素的偶联物：所述甘胆酸半抗原是由胆酸与4-氨基丁酸反应生成的N-(3,7,12-三羟基-24-羰基胆烷-24-基)-丁氨酸作为甘胆酸半抗原；所述荧光素为异硫氰酸荧光素乙二胺。3.根据权利要求1所述的一种检测血清中甘胆酸的荧光偏振免疫分析方法，其特征在于：步骤(1)所述甘胆酸多克隆抗体的具体制备过程是按照申请号为201610727381.2的中国专利申请中所记载的步骤进行制备的。4.根据权利要求1所述的一种检测血清中甘胆酸的荧光偏振免疫分析方法，其特征在于：步骤(1)所述一系列已知浓度的甘胆酸标准品溶液的溶质为甘胆酸标准品，溶剂为磷酸盐缓冲溶液；所述磷酸盐缓冲溶液中，NaH2PO4·2H2O的摩尔质量为1-8mmol/L，Na2HPO4·12H2O的摩尔质量为8...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵肃清，沈定，崔锡平，陈莹珊，何绮怡，吕瑞，
申请(专利权)人：广东工业大学，
类型：发明
国别省市：广东,44