用于构建多倍体植物突变体库的接头序列及鉴定方法技术

本发明专利技术提供一种用于构建多倍体植物突变体库的接头序列及鉴定方法。该接头序列包括如SEQ ID NO.1所示的序列，更优选包括含有所述多倍体植物基因内含子的接头序列如SEQ ID NO.2所示的序列。本发明专利技术使用特定的接头序列构建可以涵盖多倍体植物全基因组的ihpRNAi文库，可以精确、迅速地找到与植物发育过程、抗逆反应或代谢途径等生物学过程相关的基因，为多倍体作物的功能基因组学研究增添新的途径，为农作物的遗传改良奠定基础。

The joint sequence and identification method for the construction of a polyploid plant mutant library

【技术实现步骤摘要】
用于构建多倍体植物突变体库的接头序列及鉴定方法
本专利技术涉及油菜全基因组范围筛选及鉴定基因功能
，更具体地，涉及一种用于构建多倍体植物突变体库的接头序列及基因功能鉴定方法。
技术介绍
拟南芥、水稻、西红柿、白菜、甘蓝等多种植物全基因组序列测定工作已相继完成，但大部分的基因功能尚未得到破译。拟南芥尽管是第一个完成基因组测序的开花植物，但50％以上基因的具体功能仍然未知，其中31％基因的功能完全未知。水稻基因组同样有80％以上的基因功能未知。伴随着日益增多的植物基因组序列测定工作的相继完成，功能基因组学的研究成为生命科学发展新的里程碑，基因组学的研究也由以大规模测序为代表的结构基因组学研究向以功能鉴定为主的功能基因组学研究转移。植物功能基因组学研究的关键任务是基因功能的鉴定，利用突变体是开展这一工作的重要方法。突变体是某个性状发生可遗传变异或某个基因发生突变的生物体材料。早期的遗传学家和育种家们主要在小范围内筛选感兴趣的突变体，多种生物全基因组序列的测定完成后,大量基因等待着人们去诠释其功能。同时，对于基因功能的诠释已经不再是单个基因单独地研究，而是通过己知的基因组序列信息，借助本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于构建多倍体植物突变体库的接头序列，其特征在于，包括：如SEQ ID NO.1所示的序列：AGGTCGCACGAGAGAGTCCGGGTGAGCTCTCTTTAGGGATCCCGGACTCTCTCGTGCG。

【技术特征摘要】
1.一种用于构建多倍体植物突变体库的接头序列，其特征在于，包括：如SEQIDNO.1所示的序列：AGGTCGCACGAGAGAGTCCGGGTGAGCTCTCTTTAGGGATCCCGGACTCTCTCGTGCG。2.根据权利要求1所述接头序列，其特征在于，还包括含有所述多倍体植物基因内含子的接头序列；优选包括：如SEQIDNO.2所示的序列：GGGAGGCCTTCAAAGGAGGCGGACTTGCGTATAATAACTCTTTGATGAATATGACAAATGTATAATAAGAATGTGTTTTCATTTCGCCATGTTTTGCTTCGCAGGCAAGTCCGCCTCCTTTGAAGGCC。3.使用权利要求1或2所述的接头序列构建多倍体植物突变体库的方法，包括：1)提取多倍体植物总的RNA，合成第一链cDNA；2)将所述cDNA进行扩增，得到双链DNA；使用限制性内切酶对所述双链DNA片段化；3)将所述片段化双链DNA克隆至中间载体中，构建cDNA中间文库；4)将步骤3)得到的cDNA中间文库的片段与所述接头序列连接，得到含有接头的文库片段；5)将步骤4)得到的含有接头的文库片段进行变性，双向滚环复制，使其转换为ihpRNAi文库；6)提取步骤5)中ihpRNAi文库的质粒，构建所述多倍体植物突变体库。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤1)具体为：提取所述多倍体植物的根、茎、叶、花序及角果的RNA，等量混合，采用SMARTerTMPCRcDNASynthesisKit合成第一链...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫晓红，吴刚，曾新华，李均，罗军玲，刘芳，
申请(专利权)人：中国农业科学院油料作物研究所，
类型：发明
国别省市：湖北,42