大规模液体深层发酵生产桦褐孔菌水提取物及多糖工艺。本发明专利技术以大规模液体深层发酵生产桦褐孔菌水提取物及多糖为目标，以山东金乡真菌研究所的桦褐孔菌真菌为出发菌株，采用斜面菌种进行液体摇瓶培养、液体摇瓶扩大培养、一级种子培养和发酵培养，最终发酵罐体积达１０００－５０００Ｌ。发酵结束后，将终了发酵液温度加热到６０－１００℃，搅拌速度为１５０－２５０ｒｐｍ／ｍｉｎ，维持２－４小时，用泵将发酵液输送到贮罐中，经板框压滤，清液浓缩，喷雾干燥得到桦褐孔菌水提取物，如将清液浓缩后用适量乙醇沉淀，取沉淀物加适量水溶解，喷雾干燥可得桦褐孔菌多糖。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种大规模液体深层发酵生产桦褐孔菌水提取物及多糖工艺。
技术介绍
桦褐孔菌(Fuscoporia obliqua)又名白桦茸，在俄罗斯和东欧民间叫Chaga，属担子菌亚门、层菌纲、非褐菌目、多孔菌科、褐卧孔菌属，生于白桦树、银桦、榆树、赤杨等的树皮下或活立木的树皮下或砍伐后树木的枯干上。16-17世纪以来，俄罗斯、波兰、芬兰等民间就广泛利用其野生子实体来防治各种疑难杂症，如各种癌症(胃癌、肝癌、肠癌等各种消化器官癌症)以及心脏病和糖尿病等。波兰自1961年以来就广泛使用桦褐孔菌来治疗癌症。日本的研究人员高度评价俄国这种民间的药物，并认为这是上帝赐给苦难人类的一种奇特的礼物，可用来防治肝癌、爱滋病和O-157大肠杆菌中毒。据报道，俄罗斯的堪索莫乐斯基(Komsomlski)制药公司生产的桦褐孔菌精粉对糖尿病的治愈率达93％。桦褐孔菌的水煎煮物具有显著的抗肿瘤活性。桦褐孔菌的糖浆剂早已用于治疗癌症。由于来源稀少，其野生子实体的价格是桑黄(Phellinus igniarius)的7-8倍。
技术实现思路
本专利技术的目的是以生产桦褐孔菌水提取物及多糖为目标，专利技术一种廉价高效的桦褐孔菌水提取物及多糖的大规模液体深层发酵工艺，为今后的产业化应用打下基础。实现本专利技术的技术方案以桦褐孔菌真菌为出发菌株，采用斜面菌种进行液体摇瓶培养、液体摇瓶扩大培养、一级种子培养和发酵培养。在发酵结束后，将终了发酵液继续加热到一定温度，搅拌维持一定时间，搅拌停止后，将发酵液喷雾干燥得发酵菌粉。如将发酵液经板框压滤，清液浓缩，喷雾干燥得到桦褐孔菌水提取物，如将清液浓缩后用适量乙醇沉淀，取沉淀物加适量水溶解，喷雾干燥可得桦褐孔菌多糖。本菌株购自山东金乡真菌研究所。实现本专利技术的具体步骤如下(1)取出斜面菌种接入配制的新鲜斜面培养基中，培养温度25-33℃，培养150-250小时。(2)将步骤1中的斜面菌种转接入装有摇瓶培养基的摇瓶中，25-33℃培养，转速120-180rpm/min，培养70-120小时后进行摇瓶的扩大培养。(3)将步骤2中的摇瓶菌种转接入装有摇瓶扩大培养基的摇瓶再进行扩大培养，25-33℃培养，转速120-180rpm/min，培养35-60小时后接入一级种子罐进行培养。(4)将步骤3中的摇瓶菌种转接入一个装有种子培养基的一级种子罐中，接种量为4-10％，保持罐温25-33℃，罐压0.5-0.9kPa，搅拌速率80-150rpm/min，通气量1∶0.3-0.5v/v.m，发酵35-60小时，然后转接入发酵罐发酵。(5)将一级种子罐中的菌种转接入一个装有发酵培养基的发酵罐中，接种量为4-10％，保持罐温25-33℃，罐压0.5-0.9kPa，搅拌速率80-150rpm/min，通气量1∶0.3-0.5v/v.m，发酵90-150小时。发酵液还原糖含量降低到1.0-2.0％左右时为发酵终了，放罐。本专利技术中斜面培养基的配方是(g/100m1)马铃薯15-25，葡萄糖1-3，琼脂1.5-2.5，加水定容至所需体积，pH值自然。本专利技术中摇瓶培养基的配方是(g/100ml)葡萄糖2-4，蛋白胨0.05-0.5，麸皮汁1.0-2.5，KH2PO40.1-0.5，MgSO40.01-0.2，加水定容至所需体积，pH值为4.5-5.5。本专利技术中摇瓶扩大培养基的配方是(g/100ml)葡萄糖2-4，蛋白胨0.05-0.7，玉米粉0.5-2，麸皮汁1.0-2.5，KH2PO40.1-0.5，MgSO40.01-0.2，加水定容至所需体积，pH值为4.5-5.5。本专利技术中一级种子培养和发酵培养的培养基配方是(g/100ml)葡萄糖2-4，蛋白胨0.05-0.7，玉米粉0.5-2，黄豆粉0.5-2，麸皮汁1-3，KH2PO40.1-0.5，MgSO40.01-0.2，加水定容至所需体积，pH值为4.5-5.5。本专利技术步骤2和3中摇瓶培养基与摇瓶容积比为1∶5。本专利技术步骤4中一级种子罐的容积为100-300L，在该一级种子罐中装有的一级种子培养基相应为50-180L；步骤5中发酵罐的容积为1000-5000L，在该发酵罐中装有的发酵培养基相应为500-3500L。本专利技术的放罐标准是发酵液开始变得粘稠，还原糖含量降低到1.0-2.0％左右，镜检发现菌丝体开始衰老。如需获取其水提取物及多糖，则在本专利技术所述的发酵终止后，将发酵终了液温度加热到60-100℃，搅拌速度为150-250rpm/min，维持2-4小时，搅拌停止后，将发酵液喷雾干燥得发酵菌粉。如需获取桦褐孔菌水提取物，用泵将发酵液输送到贮罐中，经板框压滤，得清液。滤液经浓缩，使最后体积为原液的1/4-1/10，取浓缩液喷雾干燥得到桦褐孔菌水提取物。如加入适量乙醇使乙醇浓度达75％，醇析20-30小时，取沉淀用去离子水溶解，喷雾干燥即得到桦褐孔菌多糖。本专利技术的有益效果本专利技术适用于大规模液体深层发酵生产桦褐孔菌水提取物及多糖，对于今后的工业化生产和相关的应用产业的发展具有重要意义。本专利技术所得桦褐孔菌水提取物和多糖颜色为褐色。具体实施例方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的详细说明。实施例1在斜面培养基中接种购自山东金乡真菌研究所的桦褐孔菌菌丝体，培养温度28℃，培养时间180小时。将新鲜的斜面菌种接入装有100ml培养基的500ml三角瓶中，28℃摇床培养96小时，摇床转速150rpm/min。然后将所得摇瓶菌种转接入装有100ml培养基的500ml三角摇瓶中进行扩大培养，28℃摇床培养45小时，摇床转速150rpm/min。然后将三角瓶扩大的菌种2200ml转接入装有50L种子培养基的100L一级种子罐中，保持罐温28℃，罐压0.7kPa，搅拌速率100rpm/min，通气量1∶0.5v/v.m，发酵时间45小时。将一级种子罐菌种转接入装有800L发酵培养基的1500L发酵罐中，保持罐温28℃，罐压0.7kPa，搅拌速率100rpm/min，通气量1∶0.5v/v.m，发酵时间120小时，发酵菌粉以干重计为3.5％，多糖含量为22％。本实施例1中斜面培养基组成是(g/100ml)马铃薯20，葡萄糖2，琼脂2，加水定容至所需体积，pH值为自然。本实施例1中摇瓶培养基组成是(g/100ml)葡萄糖3，蛋白胨0.2，麸皮汁2，KH2PO40.2，MgSO40.1，加水定容至所需体积，pH值为5.0。本实施例1中摇瓶扩大培养基组成是(g/100ml)葡萄糖3，蛋白胨0.2，玉米粉1，麸皮汁2，KH2PO40.2，MgSO40.1，加水定容至所需体积，pH值为5.0。本实施例1中100L一级种子罐的培养基组成是(g/100ml)葡萄糖3，蛋白胨0.2，玉米粉1.5，黄豆粉1，麸皮汁2，KH2PO40.2，MgSO40.1，加水定容至50L，pH值为5.0。本实施例1中1500L发酵罐的培养基配方是(g/100ml)葡萄糖3，蛋白胨0.5，玉米粉1.5，黄豆粉1.0，麸皮汁2，KH2PO40.2，MgSO40.1，加水定容至800L，pH值为5.0。本实施例1中发酵结束标准是发酵液开始变得粘稠，还原糖含量降低到1.5％，镜检发现菌丝体开始衰老。获取桦褐孔菌发酵菌粉、水提取物及多糖的方本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种液体深层发酵生产桦褐孔菌水提取物及多糖的工艺，其特征是以桦褐孔菌真菌（Ｆｕｓｃｏｐｏｒｉａ ｏｂｌｉｑｕａ）为出发菌株，采用斜面菌种进行液体摇瓶培养、液体摇瓶扩大培养、一级种子培养和发酵培养得桦褐孔菌菌丝体发酵液，在发酵结束后，将发酵液喷雾干燥得发酵菌粉，或将终了发酵液继续加热到一定温度，搅拌维持一定时间，发酵液经板框压滤，清液浓缩，喷雾干燥得到桦褐孔菌水提取物，或将清液浓缩后用适量乙醇沉淀，取沉淀物加适量水溶解，喷雾干燥可得桦褐孔菌多糖。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：敖宗华，符慧子，邹锡良，
申请(专利权)人：敖宗华，符慧子，邹锡良，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]
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