提高低温冻存烟草花粉生活力的方法技术

提高低温冻存烟草花粉生活力的方法，包括采集花粉；液体培养法测定花粉活力；在花粉中添加低温保护剂可溶性淀粉和纳米微粒；花粉冻存：液氮速冻后分别保存在‑20℃、‑80℃和‑196℃；花粉复融：冻存花粉取出后立即用流水冲5min。同时使用纳米微粒和可溶性淀粉作为低温冷冻保护剂，可以有效提高烟草花粉的低温冻存花粉活力。可溶性淀粉在低温冻存花粉时能保持花粉的干燥状态。羟基磷灰石纳米微粒对生物细胞膜就有较好的生物相容性，在增加冷却速率、提高细胞黏附程度和保护细胞遗传物质方面有重要的作用。在花粉复融时采用流水冲的方式，避免了在化冻过程中产生花粉细胞内的次生结冰对细胞膜体系的破坏，提高了花粉在低温长期冻存后的活力。

Methods to improve the viability of cryopreserved tobacco pollen

【技术实现步骤摘要】
提高低温冻存烟草花粉生活力的方法
本专利技术属于农作物花粉储藏
，涉及一种提高低温冻存烟草花粉生活力的方法。
技术介绍
烟草花粉中含有烟草的全部遗传信息，在花粉育种的工作中，需对花粉进行长期保存，直到母本花开时，再将保存的花粉直接授粉给母本，解决烟草传统育种中存在的父母本花期不遇的问题。随着花粉保存时间的延长，花粉活力会降低，会影响育种出来的种子质量不高。温度和湿度是影响花粉生活力的两个重要因素，低温和低湿有助于花粉维持较长时间的生活力。低温保存花粉可分为慢速冻存和快速冻存两种保存方法，慢速冻存花粉的过程中会出现“溶质损伤”和“冰晶形成”的问题，损伤花粉细胞，影响花粉产业化的保存；快速冻存可避免花粉细胞内、外冰晶的形成，花粉的细胞结构稳定，生活力高，该保存方法已经成功运用于人类血液、精子、卵母细胞、胚胎、胰岛、角膜、皮肤及血管的保存。相关研究发现，在快速冻存生物组织的过程中，使用低温保护剂可以较好的保护生物组织。传统的低温保护剂甘油、二甲基亚砜等大多是液体，仅适用于保存含水量较高或者放置在培养基中的动物细胞；而烟草花粉的保存需要低温干燥的条件，使用的低温保护剂必须是对冷冻有缓冲本文档来自技高网...

【技术保护点】
提高低温冻存烟草花粉生活力的方法，其特征在于，包括以下步骤：A、采集花粉：采集大蕾期的烟草花药放置在干燥盒中，将花药放置在恒温箱中干燥48 h，温度控制在23 ℃，干燥结束后，用真空泵收集花药中的花粉，收集的花粉分装在离心管中，每管装0.01 g，备用；B、新鲜花粉活力的测定：采用液体培养法，将干净的载玻片放在培养盒中，取1 mL培养基放置在载玻片上，然后将步骤A中收集的花粉0.001 g悬浮于培养基上，放入恒温箱中暗培养3 h，温度控制在28 ℃，暗培养结束后，用显微镜观察花粉萌发率和花粉管生长长度，花粉萌发率达到85%，花粉管平均能长到300μm；所述的培养基组成为：10 %蔗糖+0.01...

【技术特征摘要】
1.提高低温冻存烟草花粉生活力的方法，其特征在于，包括以下步骤：A、采集花粉：采集大蕾期的烟草花药放置在干燥盒中，将花药放置在恒温箱中干燥48h，温度控制在23℃，干燥结束后，用真空泵收集花药中的花粉，收集的花粉分装在离心管中，每管装0.01g，备用；B、新鲜花粉活力的测定：采用液体培养法，将干净的载玻片放在培养盒中，取1mL培养基放置在载玻片上，然后将步骤A中收集的花粉0.001g悬浮于培养基上，放入恒温箱中暗培养3h，温度控制在28℃，暗培养结束后，用显微镜观察花粉萌发率和花粉管生长长度，花粉萌发率达到85%，花粉管平均能长到300μm；所述的培养基组成为：10%蔗糖+0.01%硼酸+0.002%CaCl2+10mmol/Lγ-氨基丁酸，...

【专利技术属性】
技术研发人员：马文广，陈志芸，索文龙，郑昀晔，牛永志，陈穗云，
申请(专利权)人：玉溪中烟种子有限责任公司，云南大学，云南省烟草农业科学研究院，
类型：发明
国别省市：云南,53