一种人纤维蛋白溶解酶的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种人纤维蛋白溶解酶的制备方法。本发明专利技术在常温条件下用纤维蛋白溶解酶原激活剂(Plasminogen Activator，PA)激活人纤维蛋白溶解酶原(Plasminogen,Plg)生成纤维蛋白溶解酶，激活后加入终止剂终止反应，同时该终止剂可抑制纤维蛋白溶解酶降解，然后进行分离纯化即可。

A preparation method of human fibrinolytic enzyme

The present invention relates to a preparation method of human fibrinolytic enzyme. The present invention at room temperature with plasminogen activator (Plasminogen Activator, PA) activation of human plasminogen (Plasminogen, Plg) generation of plasmin, adding terminator termination reaction after activation, while the termination agent can inhibit plasmin degradation, then purified to.

【技术实现步骤摘要】
一种人纤维蛋白溶解酶的制备方法
本专利技术涉及医药生物领域，具体而言，涉及一种人纤维蛋白溶解酶的制备方法。
技术介绍
人纤维蛋白溶解酶(Plasmin,Plm)，是人纤维蛋白溶解酶原(Plasminogen,Plg)的活化形式。Plg由791个氨基酸组成的单链丝氨酸蛋白酶，分子量约84～92kDa，在血浆中含量约为180mg/L。Plg在组织型纤维蛋白溶解酶原激活剂(Tissueplasminogenactivator,t-PA)、尿激酶型纤维蛋白溶解酶原激活剂(Urokinaseplasminogenactivator,u-PA)、链激酶(Streptokinase,SK)、葡激酶(Staphylokinase,SAK)等作用下断裂Arg561-Val562肽键，转化成有活性的Plm。Plm由一条重链(PlasminHeavyChain,PlmHC)和一条轻链(PlasminLightChain,PlmLC)组成，两者由两个二硫键链接。重链含561个氨基酸，分子量约57～63kDa，包括5个环状结构域(Kringledomains,K1～5)。轻链含230个氨基酸，分子量约23～2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种纤维蛋白溶解酶的制备方法，其步骤为：(1)取人血浆提取的纤维蛋白溶解酶原，过滤器过滤；(2)稀释：缓冲液稀释步骤(1)中所得的溶液至纤维蛋白溶解酶原至特定蛋白浓度为1.0～6.0mg/ml，调节pH值；(3)激活：将尿激酶与步骤(2)中溶液混匀，然后置于23～28℃循环水孵育5～120min；(4)终止：在步骤(3)反应混合物中添加终止剂混匀；(5)纯化分离。

【技术特征摘要】
1.一种纤维蛋白溶解酶的制备方法，其步骤为：(1)取人血浆提取的纤维蛋白溶解酶原，过滤器过滤；(2)稀释：缓冲液稀释步骤(1)中所得的溶液至纤维蛋白溶解酶原至特定蛋白浓度为1.0～6.0mg/ml，调节pH值；(3)激活：将尿激酶与步骤(2)中溶液混匀，然后置于23～28℃循环水孵育5～120min；(4)终止：在步骤(3)反应混合物中添加终止剂混匀；(5)纯化分离。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的人纤维蛋白溶解酶原为新鲜制备的人纤维蛋白溶解酶原，或融化的冻存的人纤维蛋白溶解酶原；所述的融化为：使用25～35℃循环水融化所述纤维蛋白溶解酶原；所述的过滤器孔径包括但不限于1.0μm、0.2μm、0.45μm。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述缓冲液为：注射用水或Tris-HCl缓冲液；优选的，所述缓冲液为：浓度为20mmol/L的Tris-HCl缓冲液，不含NaCl；最优选的，所述缓冲液为：pH值为7.5的浓度为20mmol/L的Tris-HCl缓冲液，不含NaCl；所述的特定蛋白浓度为2.0～3.0mg/ml；所述调节pH值的方法为，使用0.5mol/L的Tris溶液调节稀释液...

【专利技术属性】
技术研发人员：岳胜兰，李策生，周志军，胡勇，汪菲菲，彭焱，林连珍，周雁翔，李陶敬，邢延涛，詹骞，邓志军，陈克金，李娟，谭敏，
申请(专利权)人：国药集团武汉血液制品有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42