用于纯化人纤维蛋白溶酶原的树脂填料组合及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种用于纯化人纤维蛋白溶酶原的树脂填料组合及其应用，所述的树脂包括：(1)阴离子交换树脂填料：其基架为聚丙烯酸酯，功能集团为CH2N

【技术实现步骤摘要】
用于纯化人纤维蛋白溶酶原的树脂填料组合及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体的，涉及一种用于纯化人纤维蛋白溶酶原的树脂填料组合及其应用。

技术介绍

[0002]人纤维蛋白溶解酶原(Plasminogen,Pg)由肝脏合成，在血液中循环，血浆中含量约为0.18g/L，其活化形式纤维蛋白溶解酶(Plasmin,Pm)是纤溶系统的重要组成成分，也参与伤口愈合、细胞转移，组织修复，血管生产、胚胎发育等过程
[1]。基因突变或天冬酰胺酶等影响会引起Pg缺乏症。Ⅰ型Pg缺乏症(低纤溶酶原血症)比较罕见，由常染色体异常引起，属于隐性遗传，可导致严重的临床症状，主要造成全身黏膜纤维蛋白沉积
[2]，最常见的表现为眼部木质化结膜炎。这种症状早在1847年就被Bouisson发现，1933年，Borel将其命名为木质化结膜炎(Ligneous Conjunctivitis)。
[0003]Pg缺乏症患者体内Pg抗原含量约<0.1～0.9g/L，Pg活性<1％～50％[3]。大多数患者体内仍残留Pg活性，所以Pg替代疗法或许能有效治疗Pg缺乏症。Pg属于内源性蛋白，理论上不会产生免疫原性。所以，为了给治疗此类罕见病患者，需要研发高纯度、高浓度的Pg产品。Prometic Bioproduction Inc.研发的Pg注射液(商品名RYPLAZIM)于2021年6月获得FDA批准
[4]。在获得批准之前，它在美国只能以同情用药的方式使用。
[0004]从血浆中制备Pg，通常采用亲和层析捕获，然后通过离子交换层析精纯。早前本产品需要采用进口的树脂原料，通过层析纯化制备Pg，随着国内企业树脂产品开发技术的提升，逐渐推出了可进行进口替代的国产树脂。需要对相应的树脂填料进行系统性考察，以建立全新的纯化方法。
[0005]基于此，提出本专利技术。
[0006]参考文献
[0007][1]Castellino,Francis J.,and Victoria A.Ploplis."Structure and function of the plasminogen/plasmin system."Thrombosis andhaemostasis 93.04(2005):647
‑
654.
[0008][2]Schott,Dorothee,et al."Therapy with a purified plasminogen concentrate in an infant with ligneous conjunctivitis and homozygous plasminogen deficiency."New England Journal of Medicine 339.23(1998):1679
‑
1686.
[0009][3]Schuster,V.,B.H
ü
gle,and K.Tefs."Plasminogen deficiency."Journal ofThrombosis and Haemostasis5.12(2007):2315
‑
2322.
[0010][4]U.S.FOOD&DRUG Administration.Approval Letter
‑
RYPLAZIM[EB/OL].https://www.fda.gov/media/149887/download,2021
‑
06
‑
04.

技术实现思路

[0011]本专利技术涉及一种用于从血浆中纯化人纤维蛋白溶酶原(Pg)的树脂填料组合；所述的树脂填料组合为：
[0012](1)阴离子交换树脂填料：其基架为聚丙烯酸酯，功能基团为CH2N
+
(CH3)3，颗粒大小70～90μm，耐压5bar，工作pH范围2
‑
12，在甲醇、乙醇、异丙醇等溶液中化学结构稳定，耐受温度范围4
‑
30℃；优选的，所述的阴离子交换树脂为UniGel
‑
80Q；
[0013](2)亲和层析树脂填料，具体为：
[0014]1)基架为聚丙烯酸酯，功能基团为RNH(C7H
12
)COOH，颗粒大小约80μm，耐压5bar的亲和层析树脂填料；
[0015]或2)基架为多孔交联的6％琼脂糖，功能基团为RNHCHOOH(CH2)4NH2，颗粒大小约90μm，耐压3bar，工作pH范围2
‑
12的亲和层析树脂填料；
[0016]优选的，所述的亲和层析树脂为WHBP01或WHBP02；
[0017](3)阳离子交换树脂填料：其基架为聚丙烯酸酯，功能基团为(CH3)3SO3；优选的，所述的亲和层析树脂型号为UniGel
‑
80SP。
[0018]本专利技术还涉及使用所述树脂填料组合，进行人纤维蛋白溶解酶原(Pg)生产和/或纯化的方法，所述的方法包括如下步骤：
[0019](1)人血浆经过澄清后直接上样阴离子交换层析柱，收集目标蛋白Pg的流穿液，血浆经过层析柱吸附后，收集流穿液，流穿液含有10mmol/L柠檬酸、50mmol/L的氯化钠，流穿液pH6.0；
[0020](2)上样于亲和层析柱进行Pg蛋白的亲和层析捕获并洗脱，洗脱液含有20mmol/L的Tris
‑
HCl、150～600mmol/L EACA，洗脱液pH7.5；
[0021](3)经过亲和层析后的样品进行阳离子交换层析精纯，样品经过阳离子交换层析捕获后洗脱，洗脱液中含有25mmol/LNaOAc、0.5mol/LNaCl、10mmol/LEACA，洗脱液pH5.2。
[0022]本专利技术还涉及所述的树脂填料组合在制备人纤维蛋白溶酶原(Pg)中的应用。
[0023]本专利技术还涉及所述的树脂填料组合或人纤维蛋白溶解酶原(Pg)生产和纯化的方法在制备药物中的应用，所述的药物包含：治疗有效量的人纤维蛋白溶酶原(Pg)以及必要的药用辅料。
[0024]本专利技术的有益效果在于，
[0025]从载量、目的蛋白回收率、纯度方面对比了多个国内外厂家的树脂填料，优化了纯化人血浆来源Pg的工艺流程。
[0026](1)从目的蛋白层析回收率、分子大小分布、载量等方面进行研究对比，阐述了用新的树脂组合替代原工艺中使用的树脂进行人纤维蛋白溶酶原(Pg)的纯化的可行性。测试了新的树脂的上样载量等工艺参数，结合目标蛋白的性质筛选出合适的树脂类型及组合。新的树脂组合及配套工艺，均采用国产树脂填料，解决了Pg纯化工艺中，关键耗材的供应问题。
[0027](2)随着国际贸易环境的改变，工艺耗材国产化是目前的必要趋势，本申请公开的技术方案，也为其它生物制品的工艺耗材的国产化提供了启示。
附图说明本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于从血浆中纯化人纤维蛋白溶酶原(Pg)的树脂填料组合；所述的树脂填料组合为：(1)阴离子交换树脂填料：其基架为聚丙烯酸酯，功能基团为CH2N
+
(CH3)3，颗粒大小70～90μm，耐压5bar，工作pH范围2
‑
12，在甲醇、乙醇、异丙醇等溶液中化学结构稳定，耐受温度范围4
‑
30℃；优选的，所述的阴离子交换树脂为UniGel
‑
80Q；(2)亲和层析树脂填料，具体为：1)基架为聚丙烯酸酯，功能基团为RNH(C7H
12
)COOH，颗粒大小约80μm，耐压5bar的亲和层析树脂填料；或2)基架为多孔交联的6％琼脂糖，功能基团为RNHCHOOH(CH2)4NH2，颗粒大小约90μm，耐压3bar，工作pH范围2
‑
12的亲和层析树脂填料；优选的，所述的亲和层析树脂为WHBP01或WHBP02；(3)阳离子交换树脂填料：其基架为聚丙烯酸酯，功能基团为(CH3)3SO3；优选的，所述的亲和层析树脂型号为UniGel
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80SP。2.使用权利要求1所述树脂填料组合，进行人纤维蛋白溶解酶原(Pg)生产和/或纯化...

【专利技术属性】
技术研发人员：周雁翔，朱晨，王上，岳胜兰，李娟，林连珍，周志军，彭焱，詹骞，陈克金，邓志军，纪德铭，汪菲菲，冯璐，李策生，张金，胡勇，
申请(专利权)人：国药集团武汉血液制品有限公司，
类型：发明
国别省市：