一种三七总皂苷的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种三七总皂苷的制备方法，它的制备步骤为：三七用水浸泡，加入纤维素酶进行酶解，提取后残渣再加水或者加１０％～９０％乙醇提取，提取液适量浓缩，顺序上阴离子交换树脂柱和大孔树脂柱，洗脱液减压浓缩成浸膏，干燥，即得三七总皂苷，其总皂苷含量在８０％以上。本发明专利技术方法能除去糖类、色素等绝大部分水溶性杂质及脂溶性杂质，杂质少，纯度高，质量稳定，可单独或者与其他活性成分制成疗效好、质量高的药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及三七总皂苷的制备方法。
技术介绍
三七具有滋补强壮、止血、活血化瘀和消肿止痛的功效，临床上被广泛应用。三七含有皂苷、黄酮、氨基酸、多糖、脂肪酸、肽类化合物等成分，其中，达玛烷型四环三萜类皂苷被认为是三七的主要生理活性成分。对三七中皂苷成分的提取有多种方法，例如冷浸法，渗漉法，水煎醇沉法等。传统上多用正丁醇萃取的方法，该方法所用正丁醇等有机溶剂，毒性大、操作繁琐、得率较低、成本高。现今人们多应用大孔树脂法提取三七总皂苷，认为用大孔树脂法所提取的三七总皂苷与三七中所含皂苷差别较小，且提取率高，同时能除去糖类等水溶性杂质及大部分脂溶性杂质，降低了提取物的吸潮性等。虽然大孔树脂法提取三七总皂苷有诸多优点，但仍需进行改进，进一步减少杂质，提高纯度。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了提供杂质少、纯度高的三七总皂苷的制备方法。本专利技术通过下述技术方案予以实施。三七总皂苷的制备步骤为(1)提取取粉碎的三七，加水浸泡，用酸调pH3～5.5，以每克生药加入5～15U的量加入纤维素酶，充分搅拌，置30～60℃水浴2～4h，提取液备用；提取后残渣再加水或者加10％～90％乙醇加热回流提取或超声提取1～3次，合并前后提取液；提取液减压浓缩至药材1～3倍量体积，离心或滤过，取澄清液或滤液；(2)上阴离子交换树脂柱澄清液或滤液上阴离子交换树脂柱，用40％～70％乙醇洗脱，收集洗脱液；(3)上大孔树脂柱洗脱液上大孔树脂柱，先用水冲洗，再用40～70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；洗脱液减压浓缩成浸膏，干燥，得三七总皂苷。上述三七总皂苷中三七皂苷R1含量为2％～10％，人参皂苷Re含量为2％～6％，人参皂苷Rg1含量为15％～40％，人参皂苷Rb1含量为15％～40％，人参皂苷Rd含量为5％～12％，其总皂苷含量在80％以上。上述三七总皂苷的制备步骤中的上柱顺序可以调换，即三七总皂苷也可用下述方法获得(1)提取取粉碎的三七，加水浸泡，用酸调pH3～5.5，以每克生药加入5～15U的量加入纤维素酶，充分搅拌，置30～60℃水浴2～4h，提取液备用；提取后残渣再加水或者加10％～90％乙醇加热回流提取或超声提取1～3次，合并前后提取液；提取液减压浓缩至药材1～3倍量体积，离心或滤过，取澄清液或滤液；(2)上大孔树脂柱澄清液或滤液上大孔树脂柱，先用水冲洗，再用40～70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；(3)上阴离子交换树脂柱乙醇洗脱液上阴离子交换树脂柱，用40％～70％乙醇洗脱，收集洗脱液；洗脱液减压浓缩成浸膏，干燥，得三七总皂苷。上述制备步骤(1)中，提取温度最佳在90℃下，提取液最佳在80℃以下和真空度0.06Mpa-0.07Mpa条件下减压浓缩。上述制备步骤(2)、(3)中，阴离子交换树脂最佳为D-941离子交换树脂；上述大孔树脂为D101、AB-8或ZTC型大孔树脂，最佳为AB-8型大孔树脂。上述制备步骤(2)、(3)中，上柱速度为上样量每小时0.5～1倍柱体积，洗脱液乙醇的浓度最佳为45％～60％，离子交换树脂柱的洗脱液用量为药材2～4倍量体积，洗脱流速为每小时1.5～2.5倍柱体积；大孔树脂柱的水冲洗液用量为药材3～5倍量体积，洗脱流速为每小时1.5～2.5倍柱体积；大孔树脂柱的乙醇洗脱用量为药材3～5倍量体积，洗脱流速为每小时0.5～1.5倍柱体积；最后的洗脱液在80℃以下和真空度0.06Mpa-0.07Mpa条件下减压浓缩至比重为1.13～1.16的浸膏，干燥即得。由上述方法制得的三七总皂苷可以单独或者与其他活性成分一起，与任何一种或一种以上药剂学上辅料如淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、硬脂酸镁、微粉硅胶、木糖醇、乳糖醇、葡萄糖、甘氨酸、甘露醇、甘氨酸等混合制成的各种剂型，例如，可制成水针剂、片剂、缓释片、滴丸、颗粒剂、粉针剂、胶囊剂、微粒剂。优选剂型为片剂、胶囊、注射剂、滴丸等。上述三七总皂苷含量(以人参皂苷Re计)测定方法如下1.仪器与试剂1.1仪器紫外可见分光光度计。层析柱。1.2标准品、供试品及试剂标准品人参皂苷Re中国药品生物制品检定所供试品三七总皂苷提取物试剂AB-8大孔树脂或G..D.X-101大孔树脂(60～80目，天津化学试剂二厂)乙醇 分析纯香草醛溶液 称取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100ml。高氯酸 分析纯冰乙酸 分析纯人参皂苷Re标准溶液精密称取人参皂苷Re标准品0.0100g，用甲醇溶解并定容至10ml，即每毫升含人参皂苷Re1.0mg。2.实验2.1样品处理取2mg三七总皂苷，用一定量水稀释(稀释至50ml左右)。2.2柱层析用10mL注射器作层析管，内装4cm AB-8大孔树脂，先用20mL95％乙醇洗柱，弃去洗脱液，再用25mL水洗柱，弃去洗脱液。精密加入已处理好的样品溶液(见2.1)，流速控制在1mL/min左右。先用15mL水洗柱，弃去洗脱液，再用20mL95％乙醇洗脱三七皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，置于75℃水浴挥干。以此作显色用。2.3空白样品的制备在洁净蒸发皿中准确加入0.2mL5％香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使残渣都溶解，再加0.8mL高氯酸，混匀后移入10mL带塞刻度离心管中；蒸发皿中再加入0.2mL冰乙酸，转动蒸发皿，使残液溶解，再移入上述离心管中，60℃水浴上加热10min，取出，冰浴冷却后，准确加入冰乙酸5.0mL，摇匀后，即得空白样品。2.4显色在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2mL5％香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使残渣都溶解，再加0.8mL高氯酸，混匀后移入10mL带塞刻度离心管中；蒸发皿中再加入0.2mL冰乙酸，转动蒸发皿，使残液溶解，再移入上述离心管中，60℃水浴上加热10min，取出，冰浴冷却后，准确加入冰乙酸5.0mL，摇匀后，以1cm比色池于560nm波长处与标准管一起进行比色测定(以空白样品对紫外可见分光光度计进行回零后，再进行测定)。2.5标准管吸取人参皂苷Re标准溶液(1.0mg/mL)0.1mL，用一定量水稀释(10ml左右)，以下操作从“A2.2柱层析…”起，与样品相同，测定吸光度值。3计算C样＝(A1×C标×100)/(A2×6)式中C样提取物中三七总苷的量(以人参皂苷Re计)，mg/100mL A1被测液的吸光度值，A2标准液的吸光度值，C标标准液的浓度，mg/mL。上述三七总皂苷中人参皂苷Re、人参皂苷Rd、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量测定方法见中国专利CN1600318A。本专利技术采用阴离子交换树脂和大孔树脂进行去杂、纯化，能除去糖类、色素等绝大部分水溶性杂质及脂溶性杂质，与现有技术相比，杂质更少，纯度更高，质量更加稳定。具体实施例方式下面结合实施例对本专利技术做进一步说明，下述各实施例仅用于说明本专利技术而并非对本专利技术的限制。实施例一取三七饮片，粉碎，加生药重量3倍量的水浸泡，用酸调pH4.0，以每克生药加入10U的量加入纤维素酶，充分搅拌，置40℃水浴3h，提取液备用；提取后残渣再加水在90℃下回流提取两次，第一次为生药重量7倍量水，第二次为6倍量生药重量水，每次2小时，合并前后提取液，弃去残渣；提取液在70℃和真空度0.06Mpa-0.07Mpa条件下减压浓缩至药材本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种三七总皂苷的制备方法，主要由下列步骤组成：（１）提取：取粉碎的三七，加水浸泡，用酸调ｐＨ３～５．５，以每克生药加入５～１５Ｕ的量加入纤维素酶，充分搅拌，置３０～６０℃水浴２～４ｈ，提取液备用；提取后残渣再加水或者加１０％～９０％乙醇加热回流提取或超声提取１～３次，合并前后提取液；提取液减压浓缩至药材１～３倍量体积，离心或滤过，取澄清液或滤液；（２）上阴离子交换树脂柱：澄清液或滤液上阴离子交换树脂柱，用４０％～７０％乙醇洗脱，收集洗脱液；（３）上大孔树脂柱：洗脱液上大孔树脂柱，先用水冲洗，再用４０～７０％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液；洗脱液减压浓缩成浸膏，干燥，得三七总皂苷。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：魏峰，李德坤，
申请(专利权)人：天津天士力制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]