一种在聚电解质离子的协同作用下对青霉素酰化酶的固定方法技术

本发明专利技术公开了一种在聚电解质离子的协同作用下对青霉素酰化酶进行固定的方法，其特征在于：包括如下步骤：（１）将浓度为１００～３０００Ｕ／ｍｌ的青霉素酰化酶的溶液与聚阴离子溶液进行预混合，然后将预混合液与聚阳离子溶液混合，生成带有絮状沉淀的悬浊液；（２）将带有絮状沉淀的悬浊液进行搅拌，搅拌下加入硅烷类物质并均匀混合，加入交联剂，再经过陈化，真空干燥，研磨，得到颗粒状的青霉素酰化酶固定化产物。通过本发明专利技术方法固定的青霉素酰化酶，提高了的酶活性和使用稳定性，可以改善β－内酰胺抗生素工业化生产条件，降低生产成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及将青霉素酰化酶(PGA)在聚电解质离子的协同作用下固定在高聚物形成的固体网格之中的方法，并应用于β-内酰胺类抗生素及其母核的工业制备和合成过程。
技术介绍
二十世纪60年代早期β-内酰胺抗生素半合成工业渐渐兴起，这使得β-内酰胺的母核6-氨基青霉素烷酸(6-APA)成为重要的药物合成中间体。因此，人们首先开始通过青霉素酰化酶(PGA)裂解青霉素G来合成6-APA。随后，由于PGA独特的选择性，人们又研究利用PGA的选择催化作用，以6-APA或7-氨基去乙酸基头孢烷酸(7-ADCA)为β-内酰胺的母核，再加上适当的侧链来半合成β-内酰胺抗生素。 四十余年来，经过不断的筛选和基因重组的PGA变得越来越稳定，酶的生产能力也不断的得到提高，再加上有效的固定化方法使得酶的回收变成可能，该方法的成本也被大大的降低。 现在，通过酶的这一催化作用，全世界一年可以生产20000吨的6-APA，而相应的β-内酰胺类抗生素，如头孢氨苄，阿莫西林和头孢羟氨苄等，也已经逐渐实现了工业化。 但值得注意的是，有效的PGA固定化方法是酶促裂解青霉素G和β-内酰胺抗生素半合成的关键。所以现在对本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在聚电解质离子的协同作用下对青霉素酰化酶的固定方法，包括如下步骤：（１）将浓度为１００～３０００Ｕ／ｍｌ的青霉素酰化酶的溶液与聚阴离子溶液进行预混合，得到预混合液，然后将预混合液与聚阳离子溶液混合，生成带有絮状沉淀的悬浊液； （２）将带有絮状沉淀的悬浊液进行搅拌，搅拌下加入硅烷类物质并均匀混合，加入交联剂，再经过陈化，真空干燥，研磨，得到颗粒状的青霉素酰化酶固定化产物。

【技术特征摘要】
1.一种在聚电解质离子的协同作用下对青霉素酰化酶的固定方法，包括如下步骤(1)将浓度为100～3000U/ml的青霉素酰化酶的溶液与聚阴离子溶液进行预混合，得到预混合液，然后将预混合液与聚阳离子溶液混合，生成带有絮状沉淀的悬浊液；(2)将带有絮状沉淀的悬浊液进行搅拌，搅拌下加入硅烷类物质并均匀混合，加入交联剂，再经过陈化，真空干燥，研磨，得到颗粒状的青霉素酰化酶固定化产物。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的聚阴离子溶液是将聚阴离子溶于pH值5.0～9.0的磷酸缓冲溶液或8.0～11.5的甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液中，所述的聚阴离子为聚对苯乙烯磺酸钠、硫酸酯化多糖、多糖硫酸酯、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸或海藻酸钠中的一种或几种。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的聚阳离子溶液是将聚阳离子溶于pH值3.5～6.0的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液或5.0～9.0的磷酸缓冲溶液中，所述的聚阳离子为壳聚糖、聚乙烯亚胺、聚三甲基烯丙基氯化铵、聚二甲基二烯丙基氯化铵或聚烯丙基氯化铵中...

【专利技术属性】
技术研发人员：林贤福，吴起，金鑫，吕德水，陈志春，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]