一种检测人乳头状瘤病毒的PCR试剂盒及其制备方法技术

检测人乳头状瘤病毒的PCR试剂盒使用了含有TaqMan探针的多重实时荧光PCR技术。在PCR反应中，引入了一个5’末端连接荧光报告染料，3’末端连接荧光淬灭分子的DNA探针；当在PCR延伸扩增中，体系中的Taq酶切断探针分子，使得与淬灭分子分离后的报告染料分子发出荧光；本发明专利技术的有益效果在于：检测准确度高而且可以定量检测，重复性好。本发明专利技术是一种能在早期快速、简便、有效的检测临床最常见的13种属于高危以及高危亚型但中国人不常见的HPV病毒的多重实时荧光定量PCR检测方法。本发明专利技术为体外诊断试剂，不含任何有害成分，与受检者无直接接触，安全可靠。

【技术实现步骤摘要】
一种检测人乳头状瘤病毒的PCR试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及一种检测人乳头状瘤病毒的PCR试剂盒及其制备方法，属于人乳头状瘤病毒亚型的检测领域。本专利技术涉及应用多重实时荧光定量PCR技术在四个PCR反应管中同时快速地定型定量检测13种人乳头状瘤病毒的方法。
技术介绍
人乳头状瘤病毒(HumanPapillomaVirus,HPV)是一种双链DNA病毒，属于乳头瘤病毒属，是一种特异性感染皮肤或粘膜复层上皮的病毒。目前，HPV已被发现的亚型有接近两百种，其中大部分感染人类后并没有表现出明显的症状，少数部分有病理表现，有些可能会引起人类疣，如生长在生殖器附近皮肤和粘膜上的人类寻常疣、尖锐湿疣。一些高危亚型会引起人类的肿瘤，导致宫颈癌、阴道癌、肛门癌、阴茎癌等的发生。其中超过30种HPV亚型的传播是通过性接触而引起生殖区的病变。HPV感染是宫颈癌的直接病因，从感染到最终宫颈癌的发生对大多数患者而言有一个缓慢的潜伏期。因此，及时定期对宫颈脱落细胞进行HPV的检测在宫颈癌的早期筛查、辅助诊断和愈后评估等环节中显得尤为重要。宫颈癌早期症状不明显，筛查预警对早期发现宫颈癌，降低死亡率极为重要。本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测人乳头状瘤病毒的PCR试剂盒，包括以下各组分：特异性引物，特异性Taqman探针，Taq酶，PCR反应液,阳性参考品，阴性参考品，核酸萃取液，其特征在于：所述的PCR反应液分四管，每管采用了四重TaqMan探针实时荧光PCR技术，对宫颈脱落细胞中的13种人乳头状瘤病毒基因组DNA的特异性核酸序列扩增并分型检测，所述的四管PCR反应液分别为：101‑I用于4种中国人常见高危HPV‑16、18、58、2亚型的分型和定量测定，101‑II用于对中国人较常见的3种高危HPV‑39、31、35亚型的分型和定量测定，101‑III和101‑IV用于中国人不常见的6种HPV‑68、45、59、56、51...

【技术特征摘要】
1.检测人乳头状瘤病毒的PCR试剂盒，包括以下各组分：特异性引物，特异性Taqman探针，Taq酶，PCR反应液,阳性参考品，阴性参考品，核酸萃取液，其特征在于：所述的PCR反应液分四管，每管采用了四重TaqMan探针实时荧光PCR技术，对宫颈脱落细胞中的13种人乳头状瘤病毒基因组DNA的特异性核酸序列扩增并分型检测，所述的四管PCR反应液分别为：101-I用于4种中国人常见高危HPV-16、18、58、2亚型的分型和定量测定，101-II用于对中国人较常见的3种高危HPV-39、31、35亚型的分型和定量测定，101-III和101-IV用于中国人不常见的6种HPV-68、45、59、56、51、33高危HPV亚型的分型和定量测定以及作为内参的人类正常基因。2.根据权利要求1所述的检测人乳头状瘤病毒的PCR试剂盒，其特征在于：包含如下的特异性Taqman探针：HPV16探针-CTGACATATCTACTTGAGAAMCTAG；HPV18探针-TACTACACAGTYTCGTGTACCTGG；HPV31探针-TAGTACTAATATGTCTATKTGTGCTACAA；HPV33探针-TGACTTAATGCGCACAAGTAACTAGTGCCAG；HPV35探针-TCGGTGTGTCCTGCTGGGTCTWCTAGTGCC；HPV39探针-CCAACTTGACATGATCTTCCTCTATAGAGTGTTCC；HPV45探针-TTCTGTGGCTCTACACAACMTCCTGTCC；HPV51探针-TTCAACTATTAGTACTGCCACTGCTGC；HPV52探针-TCGCCATGACGAAGGTAGTCCTTA；HPV56探针-CAAGCCAAAACACCAATGTTGCAGACACAT；HPV58探针-TGCCATTATGCACGGAAGTAAMTAATGAAG；HPV59探针-TCAACATGTCTGGCATATACYTTAAGAGT；HPV68探针-TCCTCAACATGCCTAATATATTCCTTCAA。3.根据权利要求2所述的检测人乳头状瘤病毒的PCR试剂盒，其特征在于：所述的特异性Taqman探针其对应的特异性引物分别如下：HPV16上游引物5’-CATGACGTAGGTATTCCTTAGAGTT-3’；HPV16下游引物5’-CTGATGTTGATGCTACACGCAATAC-3’；HPV18上游引物5’-TATGTTAGTGTGATAGATTCTAC-3’；HPV18下游引物5’-GACAAATAGACTGTAAATCATAGTC-3’；HPV31上游引物5’-GAGCAATCAGTTAGTTGTTACCGT-3’；HPV31下游引物5’-AAATGCCAATCAAATTCGTCA-3’；HPV33上游引物5’-GAGCAATCAGTTATTCGTTACGGT-3’；HPV33下游引物5’-GAAATTTAAACTGTTTATCATATTCTCC-3’；HPV35上游引物5’-AGCTGATACACCGGTAGTAC-3’；HPV35下游引物5’-CACCATGGCTTAACTATTGCTT-3’；HPV39上游引物5’-ATTCAATTATTGCTTACTGTTGTGT-3’；HPV39上游引物5’-ATAGGTTGCAAATCAATCTCGTGC-3’；HPV45上游引物5’-GCGTAACCAGTTGTTTGTTACTGTAG-3’；HPV45下游引物5’-AAGTCATATTACTCCACATGACT-3’；HPV51上游引物5’-CATGTGTTGATATTACCAGAAGTCC-3’；HPV51下游引物5’-ATAAGTTGCATATCATACTCATGC-3’；HPV52上游引物5’-TATGTCACAGTTGTAGATACCAC-3’；HPV52下游引物5’-GAAATATAAATAGTAAATCATATTC-3’；HPV56上游引物5’-CTGCATACTTTAGTGCTGTTGG-3’；HPV56下游引物5’-ACACATACTGACAGTTACTTGAC-3’；HPV58上游引物5’-TATGTTAGCGTGGTTGATAGCAC-3’；HPV58下游引物5’-GAAATACAAACTGAAAGTCATATGC-3’；HPV59上游引物5’-AGACTAGTCGCAGCACCTATCT-...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈国成，
申请(专利权)人：苏州纳柏基因生化有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32