高效表达乙肝表面S（主蛋白）和前S1（大蛋白）融合抗原的转基因哺乳动物细胞系制造技术

在乙肝表面抗原ＰｒｅＳ１（２１－４７）基因片段与Ｓ基因的第２２３位相连的基础上在其下游引入ＲＮＡ加聚Ａ信号ＡＡＴＡＡ、乙肝病毒增强子１（Ｅｎ１）和增强子２（Ｅｎ２），及突变的ｘ基因（ｍＸ）构成ｐＣＨＢＳＳ１Ｇ质粒。将ｐＣＨＢＳＳ１Ｇ质粒与ｐＳＶ２ｄｈｆｒ质粒转化到ＣＨＯ－ｄｈｆｒ↑［－］细胞，经克隆加ＭＳＸ及ＭＴＸ筛选扩增，获得了高效表达乙肝表面抗原Ｓ和前Ｓ１融合蛋白的一系列基因工程细胞系（ＧｄＳＳ１－Ｘ），ＳＳ１融合蛋白在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中显出２７ＫＤ，３０ＫＤ的蛋白条带，小鼠免疫可产生针对Ｓ和Ｓ１的特异性抗体。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种含有乙肝病毒ａｄｒ亚型表面抗原Ｓ＋Ｓ１融合基因的重组质粒ｐＣＨＢＳＳ１Ｇ，此质粒的结构特点是：复制方向从左至右，其排列顺序是ＰＢＲ３２２的复制起点→ＣＭＶ－１Ｅ的０．７５ｋｂ的启动子→乙肝表面抗原Ｓ＋Ｓ１融合基因ＳＳ１→增强子ＥＮ１，Ｅｎ２及使用缺失突变使Ｘ基因自ＡＴＧ后第８位ｂｐ起缺失１６个ｂｐ，从而失去表达Ｘ基因的可能，降低致癌性→ＳＶ４０的复制起点，早期启动子→ＧＳ基因，此基因是从ＣＨＯ－ｄｈｆｒ↑［－］细胞中经ＰＣＲ获得的→ＳＶ４０的多聚Ａ位点；质粒结构中的乙肝表面抗原Ｓ＋Ｓ１融合基因ＳＳ１在前，谷氨酰胺合成酶扩增基因ＧＳ在后，它们是分别在ＣＭＶ立即早期启动子及ＳＶ４０早期启动子的...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：田淑芳，阮力，刘文军，杨芙蓉，宗芳，李军，陈红，王文，阮薇琴，王秀平，
申请(专利权)人：中国预防医学科学院病毒学研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]