高效表达乙肝表面S（主蛋白）和前S1（大蛋白）融合抗原的转基因哺乳动物细胞系制造技术

在乙肝表面抗原ＰｒｅＳ１（２１－４７）基因片段与Ｓ基因的第２２３位相连的基础上，在其下游引入ＲＮＡ加聚Ａ信号ＡＡＴＡＡ、乙肝病毒增强子１（Ｅｎ１）和增强子２（Ｅｎ２），及突变的ｘ基因（ｍＸ）构成ｐＣＨＢＳＳ１Ｇ质粒。将ｐＣＨＢＳＳ１Ｇ质粒与ｐＳＶ２ｄｈｆｒ质粒转化到ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞，经克隆加ＭＳＸ及ＭＴＸ筛选扩增，获得了高效表达乙肝表面抗原Ｓ和前Ｓ１融合蛋白的一系列基因工程细胞系（ＧｄＳＳ１－Ｘ），ＳＳ１融合蛋白在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中显出２７ＫＤ蛋白条带，同时可出现３０ＫＤ蛋白条带，小鼠免疫可产生针对Ｓ和Ｓ１的特异性抗体。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

高科技生物工程技术
技术介绍
我国是乙型肝炎高发区，有50-70％的人群感染过HBV，10％的人群(约1亿多人)为带毒者。目前还没有治疗乙肝的有效方法，接种乙肝疫苗是预防肝炎的有效措施。 血源疫苗国内外已投入生产使用，由于血源疫苗存在着一些问题，如血源有限，带有肯定的潜在性危险(如丙肝、艾滋病毒等)，为此需要急切研制乙肝基因工程疫苗。国内外对乙肝基因工程疫苗的研究已得到较快的发展，美国的MSD公司应用酵母系统生产乙肝基因工程疫苗已获生产许可证。我国预防医学科学院病毒研究所用哺乳动物细胞生产的乙肝基因工程疫苗也获正式生产文号。 目前使用的基因工程疫苗和血源疫苗一样，都是由乙肝表面抗原主蛋白(S)组成，该疫苗免疫原性低，用量大，约有10％左右人群对其无免疫反应或反应低下，另外已发现对主蛋白的免疫逃逸突变株，因此研究含有PreS1和PreS2的新型乙肝疫苗已受到各国科学家的重视。以色列[5]使用天然结构研制的CHO细胞表达的含PreS1和PreS2的疫苗也显示出很好的免疫效果。其使用量降低到2.5ug，与常规10ug量的疫苗相比，同样产生较高的抗体滴度。史克公司[6]也构建了改造的大本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含有乙肝病毒ａｄｒ亚型表面抗原Ｓ＋Ｓ１融合基因的重组质粒ｐＣＨＢＳＳ１Ｇ，此质粒的结构特点是：复制方向从左至右，其排列顺序是ＰＢＲ３２２的复制起点→ＣＭＶ－１Ｅ的０．７５ｋｂ的启动子→乙肝表面抗原Ｓ＋Ｓ１融合基因ＳＳ１→增强子ＥＮ１，Ｅｎ２及使用缺失突变使Ｘ基因自ＡＴＧ后第８位ｂｐ起缺失１６个ｂｐ，从而失去表达Ｘ基因的可能，降低致癌性→ＳＶ４０的复制起点，早期启动子→ＧＳ基因，此基因是从ＣＨＯ－ｄｈｆｒ↑［－］细胞中经ＰＣＲ获得的→ＳＶ４０的多聚Ａ位点；质粒结构中的乙肝表面抗原Ｓ＋Ｓ１融合基因ＳＳ１在前，谷氨酰胺合成酶扩增基因ＧＳ在后，它们是分别在ＣＭＶ立即早期启动子及ＳＶ４０早期启动子的...

【技术特征摘要】
1.一种含有乙肝病毒adr亚型表面抗原S+S1融合基因的重组质粒pCHBSS1G，此质粒的结构特点是复制方向从左至右，其排列顺序是PBR322的复制起点→CMV-1E的0.75kb的启动子→乙肝表面抗原S+S1融合基因SS1→增强子EN1，En2及使用缺失突变使X基因自ATG后第8位bp起缺失16个bp，从而失去表达X基因的可能，降低致癌性→SV40的复制起点，早期启动子→GS基因，此基因是从CHO-dhfr-细胞中经PCR获得的→SV40的多聚A...

【专利技术属性】
技术研发人员：田淑芳，阮力，刘文军，杨芙蓉，宗芳，李军，陈红，王文，阮薇琴，王秀平，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]