重组人B淋巴细胞刺激因子表达载体及构建方法技术

重组人Ｂ淋巴细胞刺激因子（ｒｈＢＬｙＳ）表达载体及其构建方法。本发明专利技术设计两对引物，运用ＰＣＲ及Ｎｅｓｔ－ＰＣＲ方法，将ｈｓＢＬｙＳ的ＤＮＡ片段从人胎盘ｃＤＮＡ文库中扩增出来，经纯化、测序鉴定后，采用酶切、连接等重组手段，将所得到的融合基因（ｈｓＢＬｙＳ）定向插入带有Ｈｉｓ－Ｔａｇ序列的原核表达载体ｐＥＴ－３０ａ（＋），构建成ｐＥＴ－３０ａ（＋）／ｈｓＢＬｙＳ融合表达载体；然后在大肠杆菌λＤＥ３中高效表达；得到基因产物重组融合靶蛋白（ｒｈｓＢＬｙＳ）。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术属基因工程
人B淋巴细胞刺激因子(hBLyS)是一九九九年新发现的一种属于TNF超家族并与人体免疫密切相关的细胞因子；为Ⅱ型三结式跨膜蛋白，在人体内主要由外周血单核细胞、脾脏、淋巴结、骨髓等组织细胞表达，它能刺激B淋巴细胞分化、增殖，诱导其分泌免疫球蛋白，从而提高免疫缺乏或低下病人的自身免疫能力。体外重组hBLyS(rhBLyS)胞膜外部分的功能片段(rhsBLyS)在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)及昆虫细胞sf9等真核细胞中的表达已见报道；而且获得的rhsBLyS在与anti-IgM或LPS等协同作用时，具有刺激人B淋巴细胞分化、增殖的功能。但至今国内外尚未见到有关原核表达载体的构建及其在原核系统中进行表达、表达产物生物学活性的研究报道。因此，若能在原核系统表达出同样有生物学活性的rhsBLyS，则其理论意义和实际意义都将是非常重大的。相关技术资料1、Paul A.Moore,Omella Belvedere,Amy Orr,David W LaFleur,Ping F,Yuling L,David M.Hilbert et al.BLyS:Member of 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组人Ｂ淋巴细胞刺激因子（ｈＢＬｙＳ）原核表达载体ｐＥＴ３０ａ（＋）／ｒｈｓＢＬｙＳ，其特征在于：本专利技术采用两对引物：包括ＰＣＲ引物序列以及Ｎｅｓｔ－ＰＣＲ引物的序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：张双全，刘平，
申请(专利权)人：南京师范大学，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]