顺铂胶束的制备以及使用方法技术

本发明专利技术涉及在脂质体中包胶顺铂和其他带正电荷的药物的方法，所述脂质体在其内和外膜层之间具有不同的脂质组成。脂质体在静脉注射于动物及人后到达原位瘤及其转移瘤。经包胶的顺铂在消除各种人实体瘤方面具有高的治疗效力，所述实体瘤包括但不限于乳腺癌和前列腺癌。经包胶的顺铂与包胶的阿霉素或者与其他抗癌药物的组合是有治疗价值的。在消除癌症方面，经包胶的顺铂与多种抗癌基因的组合、经包胶的顺铂与包胶在脂质体中的多种抗癌基因的组合以及经包胶的顺铂与ＨＳＶ－ｔｋ加上经包胶的更昔洛韦的组合，也是具有治疗价值的，所述抗癌基因包括但不限于ｐ５３、ＩＬ－２、ＩＬ－１２制管张素和制癌蛋白。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用脂质体包胶的药物及给药系统，特别是脂质体包胶的顺铂。该药物可在静脉内注射后用于杀死各种人恶性肿瘤中的癌细胞。顺-二胺二氯合铂(II)，cis-2+，简称为顺铂或者cis-DDP，是最广泛使用的抗肿瘤药物之一，用于治疗睾丸癌、卵巢癌以及对抗头和颈部的癌症。超过90％的睾丸癌是用顺铂治疗。最严重的副作用是肾毒性、骨髓毒性和胃肠道刺激作用(Oliver和Mead，1993)。在用160mg/m2顺铂和640mg/m2卡铂治疗的卵巢癌患者中观察到双侧视神经病(Caraceni等人，1997)。口服六甲基蜜胺治疗一组61名对顺铂或卡铂产生耐受性(在治疗结束后6个月内复发)的上皮卵巢癌患者时，表明具有14％的客观反应率(Vergote等人，1992)。阳离子性胆固醇衍生物已被用于给药治疗剂。例如，它们与磷脂酰乙醇胺混合，然后进行超声处理，形成小的单层囊泡，该囊泡可与NDA复合并介导由内体腔进入细胞溶胶。其中一种脂质体制剂是DC-Chol脂质体，其已被用于对抗黑素瘤的基因治疗临床试验中。人免疫缺损病毒-1反式激活蛋白基因与报道基因在控制HIV-1的情况下共同给药，顺铂治疗失败的患者对于阳离子性脂质体是高度转染的。这些结果提示出用顺铂和基因疗法来治疗恶性肿瘤的一系列治疗方案(Farhood等人，1994)。由2-氨基-甲基吡咯烷衍生物作为载体配位体制备的各种铂复合物已在小鼠中测试了它们在皮下和/或腹膜内注射时对结肠26癌和P388白血病的抗肿瘤活性。证明2-氨基甲基吡咯烷在其胺衍生物中是最有效的载体配位体(Morikawa等人，1990)。通过正交试验确定了用乳液加热稳定法制备顺铂白蛋白微球(Cis-DDP-AMS)(平均大小为148微米)的最佳方法。在相对于顺铂用Cis-DDP-AMS进行肝动脉化学栓塞形成(chemoembolization)后，铂的分布和消除分别延长了3.36倍和1.23倍(Zhang等人，1995)。对具有更高治疗性质的铂(II)基化合物进行研究，促进设计并合成了一类新的水溶性、连接在尿嘧啶和尿苷上的第三代顺-二胺二氯合铂(II)复合物。但是，所合成的化合物中没有一个对所治疗的三种细胞系显示出任何显著的细胞毒性作用(Kim等人，1998)。发现最近研制的生物还原剂4--7-氯喹啉盐酸盐(NLCQ-1)可增强化学治疗剂美法伦(L-PAM)、顺铂(cisDDP)和环磷酰胺(CPM)的抗肿瘤作用，但没有同时增强骨髓毒性。该增强作用是严格的程序依赖性的，而且在cisDDP之前45分钟给药NLCQ-1可观察到最佳的作用(1.5-2个log超过可加性的杀死作用(killing beyond additivity))。这些结果支持基于临床研究将NLCQ-1化分为化学致敏剂(Papadopoulou等人，1998)。在患有非小细胞肺癌(NSCLC)并已用顺铂进行首次治疗的患者中，紫杉醇与顺铂组合作为二线药物，在14名患者中产生了部分反应(40％)(Stathopoulos等人，1999)。Abra等人(1999年8月31日授权的第5,945,122号美国专利)描述了一种脂质体组合物，其包含包封在大多数为中性的脂质中的非电荷性顺铂。但是，在本专利申请中是用于包封顺铂。因此，虽然现有报道表明脂质体调节顺铂和其他治疗剂的给药是有可能的，但是治疗效力受限于顺铂的低水溶解度和低稳定性。治疗效力还受限于该药物的高毒性。因此，仍需要减少处理含顺铂的药物时所涉及的困难以及降低在治疗使用时顺铂的高毒性。本专利技术满足该需求并提供相关的优点。图2显示了在3-4次注射包胶顺铂后在SCID小鼠中MCF-7肿瘤的缩小。图3显示了在经或未经顺铂处理的SCID小鼠中肿瘤的组织学。图3A显示了SCID小鼠中发育的未经处理的MCF-7肿瘤，放大40倍。注意肿瘤组织的结构特征的同源性。图3B显示了经顺铂处理的小鼠(4次注射)。细胞是凋亡性的，有许多组细胞进入结构中，而且核染色更大、更暗，这是凋亡细胞的特征。图3C显示了未经处理的动物中的肿瘤，表明侵入到肌肉中，放大20倍。图3D显示经顺铂处理的小鼠。未发现侵入。放大20倍。图4显示了在用包胶顺铂处理的动物(A)和未经处理的动物(B)之间肿瘤尺寸的宏观(可视)差异。实施本专利技术的方式除非另有说明，本专利技术的实施将使用免疫学、分子生物学、微生物学、细胞生物学和重组DNA中的常规技术。这些方法描述在以下出版物中。例如参考分子克隆实验室指南(MOLECULAR CLONINGA LABORATORY MANUAL)，第2版，(1989)；分子生物学中流行方案(CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY)(F.M.Ausubel等人编辑(1987))；酶学中的方法(METHODS INENZYMOLOGY)(Academic Press，Inc.)；PCR实用方法(PCRAPRACTICAL APPROACH)(M.MacPherson等人，IRL Press at OxfordUniversity Press(1991))；PCR 2实用方法(PCR 2A PRACTICALAPPROACH)(M.J.MacPherson，B.D.Hammes和G.R.Taylors编辑(1995))；抗体，实验室指南(ANTIBODIES，A LABORATORYMANUAL)(Harlow和Lane编辑(1988))；以及动物细胞培养(ANIMALCEL CULTURE)(R.I.Freshney编辑(1987))。在说明书及权利要求书中，“一种”、“该”以及“所述”等单数形式，除非另有说明，包括表示复数。例如“一种细胞”包括多个细胞，包括它们的混合物。术语“包括”或“包含”是指组合物和方法包括所述的组成部分，但不排除其他部分。当用于限定组合物及方法时，“基本上由……组成”表示除对于组合而言显著必须的部分外不包括其他部分。因此，组合物基本上由方法中的部分以及药物学上可接受的载体如磷酸盐缓冲盐水、防腐剂等组成。“由……组成”是指不包括其他成分或者给药本专利技术组合物的实质步骤的其他部分。术语“多核苷酸”和“核酸分子”可相互交换地使用，并指任何长度的聚合物形式的核苷酸。多核苷酸可包含脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸和/或它们的类似物。核苷酸可具有三维结构，并可具有任何已知或未知的功能。术语“多核苷酸”包括例如单链、双链和三螺旋分子、基因或基因片段、外显子、内显子、mRNA、tRNA、rRNA、核酶、cDNA、重组多核苷酸、分枝多核苷酸、质粒、载体、任何序列的分离DNA、任何序列的分离RNA、核酸探针、和引物。核酸分子还可包括经修饰的核酸分子。“基因”是指包含至少一个开放阅读框的多核苷酸，其在转录和翻译后能够编码特定的多肽或蛋白。“组合物”是指活性物质与惰性(例如可检测的物质或标记或药物学上可接受的载体)或活性(如辅剂)的其他化合物或组分的组合。“药物组合物”是指活性物质与惰性或活性载体的组合，使组合物适合于体外、体内、或活体外诊断或治疗用。在此所用术语“药物学上可接受的载体”包括任何标准的药物学载体，如磷酸盐缓冲盐水溶液、水、和乳液，如油/水或水/油乳液，以及各种类型本文档来自技高网...

【技术保护点】
制备顺铂胶束的方法，其包括：（ａ）以１∶１－１∶２的比例混合顺铂和磷脂酰甘油脂质衍生物，形成顺铂混合物；以及（ｂ）使步骤（ａ）中的混合物与有效量的至少３０％的乙醇溶液混合，形成顺铂胶束。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：泰尼布利卡斯，
申请(专利权)人：雷古隆公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]