一种精氨酸酯酶的制备方法技术

本发明专利技术涉及从江浙蝮蛇毒中提取肝活素的方法，这种肝活素的主要成分为精氨酸酯酶，其药理功能是降低血粘度，改善微循环，对肝炎病毒感染细胞的发展有抑制作用，能促进肝功能的恢复。由于江浙蝮蛇毒中含有神经毒素和出血毒素等有害成分，本发明专利技术的方法是利用经过三柱层板分离纯化，能将这些毒性物质除掉，精氨酸酯酶的含量达９０％以上。动物试验表明毒性很小，试验剂量为临床用量的数十倍，因而可保证临床用药安全。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种生物药品的制备方法，尤指一种从江浙蝮蛇毒中提取精氨酸酯酶作为肝病治疗药的方法，利用这种方法可得高纯度的精氨酸酯酶，使更加适合于应用在肝病治疗药中。本专利技术的方法包括如下步骤步骤a取江浙蝮蛇毒冻干粉溶于0.05M Tris-HCl，pH7.8缓冲液中，4℃下离心除去不溶物，取上清液；步骤b上清液先经DEAE纤维素DE-52柱层析，层析柱先用Tris-HCl缓冲液平衡后，用含NaCl的缓冲液从0至0.5M进行梯度洗脱，收集含精氨酸酯酶活性的组分，浓缩，去盐后，进行下一步分离；步骤c用CM-Sepharose柱层析分离，平衡液是0.05M醋酸钠pH5.0缓冲液，洗脱液含0至0.5M NaCl pH5.0的醋酸钠缓冲液梯度洗脱，收集含精氨酸酯酶活性组分，浓缩，去盐后再做下一步分离；步骤d用Sephadex-75柱层析凝胶过滤分离，洗脱液为0.05M NaHCO3含0.1M NaCl溶液，收集精氨酸酯酶组分，浓缩，去盐，冻干后得产品。所说的去盐是采用透析法，浓缩采用超滤浓缩法。利用上述方法所得到的产品经动物试验表明不含毒素及有害成分，纯度在90％以上(HPLC法检测)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肝活素制备方法，其特征是该方法包括如下步骤：步骤ａ：取江浙蝮蛇毒冻干粉溶于０．０５Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ，ｐＨ７．８缓冲液中，４℃下离心除去不溶物，取上清液；步骤ｂ：上清液先经ＤＥＡＥ纤维素ＤＥ－５２柱层析，层析柱先用Ｔｒｉｓ－Ｈ Ｃｌ缓冲液平衡后，用含ＮａＣｌ的缓冲液从０至０．５Ｍ进行梯度洗脱，收集含精氨酸酯酶活性的组分，浓缩，去盐后，进行下一步分离；步骤ｃ：用ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱层析分离，平衡液是０．０５Ｍ醋酸钠ｐＨ５．０缓冲液，洗脱液含０至０．５Ｍ Ｎ ａＣｌ ｐＨ５．０的醋酸钠缓冲液梯度洗脱，收集含精氨酸酯酶活性组分，浓缩，去盐后再做下一步分离；步骤ｄ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周肖林，陈远聪，
申请(专利权)人：周肖林，陈远聪，
类型：发明
国别省市：36[中国|江西]