完整呈现恶性肿瘤细胞位置的细胞块石蜡切片制作方法技术

本发明专利技术公开了一种完整呈现恶性肿瘤细胞位置的细胞块石蜡切片制作方法，该方法首先获取初级细胞样本并将初级细胞样本离心沉淀得到二级细胞样本，二级细胞样本固定后垂直等分放置在组织脱水盒内依次进行脱水、透明和浸蜡处理得到细胞固定样本，细胞固定样本以切面为底面垂直放入组织包埋盒内进行包埋并最终形成切片。本发明专利技术制作的每张切片均能呈现相同的细胞层次结构，使得恶性肿瘤细胞在每张切片的相同位置出现，避免了在连续的切片中存在恶性肿瘤细胞定位不可靠，甚至消失的现象，便于免疫细胞化学多项抗体标记时的比较分析，有效地协助细胞病理医生判断恶性肿瘤的来源及类型，提高细胞病理诊断的准确率，经临床应用效果好，实用价值高。

A method of making paraffin section for making the cell location of malignant tumor cells

The invention discloses a complete cell block of paraffin section showing the position of malignant tumor cell production method, this method first gets the primary cell samples and primary cell samples obtained two centrifugation cell samples, two cell samples were fixed after vertical placed in aliquots followed by dehydration, dehydration of tissue box and transparent wax dipping treatment the cell sample is fixed to the fixed sample cell section is vertical to the bottom surface of the box into the tissue embedding and eventually formed sections. Each section is made by the invention are cells of the same hierarchy, the malignant cells in each section of the same position, to avoid the continuous sections in malignant tumor cell positioning is not reliable, even disappearance, comparative analysis of immunocytochemistry for antibody labeling, effectively assist cell pathology the doctor to determine the source and type of malignant tumor cells, improve the accuracy of pathological diagnosis, the clinical effect is good, high practical value.

【技术实现步骤摘要】
完整呈现恶性肿瘤细胞位置的细胞块石蜡切片制作方法
本专利技术属于细胞病理学
，具体涉及一种完整呈现恶性肿瘤细胞位置的细胞块石蜡切片制作方法。
技术介绍
细胞病理学是以观察细胞的结构和形态变化来诊断和研究临床疾病的一门学科。在临床病理诊断中，常见的细胞学样本包括浆膜腔积液、痰液、尿液、各种灌洗液、宫颈细胞及细针穿刺标本等，由于取材方便、诊断快速、应用范围广泛、阳性结果的准确率高而使细胞病理学检查成为进行疾病筛查和肿瘤诊断的一种重要手段。在临床诊断过程中，细胞病理学普通涂片的制备方法是将细胞直接涂抹于载玻片上或离心后涂片，经固定、巴氏染色或苏木素-伊红染色后置于显微镜下观察。普通涂片有时会存在细胞较少、涂片质量不高或因细胞形态不典型、肿瘤细胞分化较好等情况，导致仅凭涂片上的细胞形态做出诊断具有一定的困难，而且细胞学样本不能长期保存，在一定程度上限制了其发展，细胞块石蜡切片的应用弥补了普通涂片的不足。细胞块石蜡切片的基本原理是将普通涂片制备完成后所有的残留物(细胞、微小组织块、凝血块及组织片段等)高度浓缩后固定，按照组织病理中组织块的处理方法，经过脱水、透明、浸蜡、包埋后制备成细胞蜡块，可实现连续切片和永久保存标本的目的。细胞块石蜡切片中常常包含有价值的诊断证据和不能被普通涂片所处理的组织碎片，细胞块石蜡切片作为普通涂片技术的补充，为细胞病理医师提供了全面评估样本的机会。对细胞蜡块做连续切片，拓宽了免疫细胞化学染色技术在细胞病理学中的应用。免疫细胞化学是利用已标记的特异性抗体与组织或细胞内的未知抗原发生抗原抗体反应的一种方法，该方法把结构与功能代谢相结合，有效地分析细胞的化学成分，细胞学用于对肿瘤原发及转移性的鉴别、原发部位的确定、未分化肿瘤特征的识别、功能分类及预后评估等，使细胞形态学诊断得到了更大的延伸和拓展。但是，采用传统的石蜡包埋切片制作方法中，将细胞蜡块水平放置在组织包埋盒内进行包埋，这种包埋方法制作的细胞块石蜡切片在连续切片后，有些切片中显示的细胞成分不同，当需要观察某种特定细胞时，在连续的切片中会存在该种特定细胞定位不可靠，甚至消失的现象。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于针对上述现有技术中的不足，提供了一种能够完整呈现恶性肿瘤细胞位置的细胞块石蜡切片制作方法，该方法将细胞固定样本垂直等分切开，将多个细胞蜡块均以切面为底面垂直放置在组织包埋盒内进行石蜡包埋，可以实现反复切片，每张切片均能呈现相同的细胞层次结构，使得肿瘤细胞在每张切片的相同位置出现，避免了现有连续的切片中存在肿瘤细胞定位不可靠，甚至消失的现象，便于免疫细胞化学多项抗体标记时的比较分析，协助细胞病理医生判断恶性肿瘤的来源及类型，提高细胞病理诊断的准确率，经临床应用效果好，实用价值高，便于推广使用。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：完整呈现恶性肿瘤细胞位置的细胞块石蜡切片制作方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、获取初级细胞样本：将收集的细胞液放入透明、平底的容器内，对所述细胞液进行前处理，得到初级细胞样本，将所述初级细胞样本放置在离心管中；步骤二、获取二级细胞样本：将步骤一中装有初级细胞样本的离心管放置在离心机中进行离心处理，采用吸管吸去离心管中的上层清液后得到沉淀物，所述沉淀物为二级细胞样本；步骤三、获取细胞固定样本：向步骤二中装有二级细胞样本的离心管中加入固定剂，对所述二级细胞样本固定6h～8h，当所述二级细胞样本的表面凝结成块时，得到细胞固定样本初样；当所述二级细胞样本的表面未凝结成块时，重复执行步骤二中的离心处理至步骤三中的固定，直至所述二级细胞样本的表面凝结成块，得到细胞固定样本初样；采用取样器将所述细胞固定样本初样从离心管中取出，采用一次性切片刀切去所述细胞固定样本初样的底部，得到圆饼状细胞固定样本；步骤四、细胞蜡块的形成：以步骤三中得到的圆饼状细胞固定样本的圆面为底面，将所述圆饼状细胞固定样本水平放置在吸水纸上，再采用一次性切片刀将所述圆饼状细胞固定样本从其圆面垂直等分切开，获得多个等分细胞固定样本，采用拭镜纸将多个等分细胞固定样本一并包裹后放入组织脱水盒中，将组织脱水盒放入组织处理机中依次进行脱水、透明和浸蜡处理,得到多个等分细胞蜡块；步骤五、石蜡包埋细胞块的形成：以步骤四中垂直等分切开的切面为底面，将多个等分细胞蜡块放置在组织包埋盒内进行石蜡包埋，形成石蜡包埋细胞块；步骤六、细胞块切片的形成：采用切片机对所述石蜡包埋细胞块进行切片，得到M张细胞块石蜡切片，采用烤片机对M张细胞块石蜡切片中的m张细胞块石蜡切片进行烘烤，然后对烘烤后的m张细胞块石蜡切片进行脱蜡至水处理，采用自动载玻片染色机对脱蜡至水处理后的细胞块石蜡切片进行HE染色，得到HE染色细胞块切片，对HE染色细胞块切片进行镜检，当HE染色细胞块切片中存在肿瘤细胞时，另外选取M张细胞块石蜡切片中的n张细胞块石蜡切片，采用烤片机对n张所述细胞块石蜡切片进行烘烤，然后对烘烤后的n张细胞块石蜡切片进行脱蜡至水处理，采用全自动免疫组化染色机对脱蜡至水处理后的细胞块石蜡切片进行免疫细胞化学染色，得到免疫组化染色细胞块切片，该免疫组化染色细胞块切片为能够完整呈现恶性肿瘤细胞位置的免疫组化细胞块染色切片，其中，M≥3，n≥m，m+n＝M。上述的完整呈现恶性肿瘤细胞位置的细胞块石蜡切片制作方法，其特征在于：步骤一中所述细胞液为浆膜腔积液，所述浆膜腔积液的前处理的过程如下：将浆膜腔积液放入透明、平底的容器中，然后将装有浆膜腔积液的容器放置在4℃的冰箱中静置15h～24h后，采用吸管吸取所述容器底部的灰白色层沉淀物作为初级细胞样本。上述的完整呈现恶性肿瘤细胞位置的细胞块石蜡切片制作方法，其特征在于：步骤一中所述细胞液为血性液体，所述血性液体的前处理的过程如下：将血性液体放入透明、平底的容器中，然后将装有血性液体的容器放置在4℃的冰箱中静置15h～24h后，采用吸管从所述容器底部红细胞沉淀的表面灰白层沉淀物作为初级细胞样本。上述的完整呈现恶性肿瘤细胞位置的细胞块石蜡切片制作方法，其特征在于：步骤一中所述细胞液为采用液基细胞保存液保存的呼吸道样本，所述细胞液的前处理的过程如下：将液基制片完成后所剩余的采用液基细胞保存液保存的呼吸道样本作为初级细胞样本。上述的完整呈现恶性肿瘤细胞位置的细胞块石蜡切片制作方法，其特征在于：所述呼吸道样本为肺泡灌洗液、支气管粘膜刷取物和痰液中的一种。上述的完整呈现恶性肿瘤细胞位置的细胞块石蜡切片制作方法，其特征在于：步骤二中所述离心机的转速为1800r/min～2000r/min，离心时间为10min～15min。上述的完整呈现恶性肿瘤细胞位置的细胞块石蜡切片制作方法，其特征在于：所述离心管的容量为12ml或者50ml，当所述离心管的容量为12ml时，步骤四中将所述圆饼状细胞固定样本从其圆面垂直两等分切开；当所述离心管的容量为50ml时，步骤四中将所述圆饼状细胞固定样本从其圆面垂直三等分切开。上述的完整呈现恶性肿瘤细胞位置的细胞块石蜡切片制作方法，其特征在于：步骤三中所述固定剂为乙醇，乙醇的质量浓度为95％。上述的完整呈现恶性肿瘤细胞位置的细胞块石蜡切片制作方法，其特征在于：步骤六中所述切片机为轮转式切片机。上述的完整呈现本文档来自技高网...

【技术保护点】
完整呈现恶性肿瘤细胞位置的细胞块石蜡切片制作方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、获取初级细胞样本：将收集的细胞液放入透明、平底的容器内，对所述细胞液进行前处理，得到初级细胞样本，将所述初级细胞样本放置在离心管中；步骤二、获取二级细胞样本：将步骤一中装有初级细胞样本的离心管放置在离心机中进行离心处理，采用吸管吸去离心管中的上层清液后得到沉淀物，所述沉淀物为二级细胞样本；步骤三、获取细胞固定样本：向步骤二中装有二级细胞样本的离心管中加入固定剂，对所述二级细胞样本固定6h～8h，当所述二级细胞样本的表面凝结成块时，得到细胞固定样本初样；当所述二级细胞样本的表面未凝结成块时，重复执行步骤二中的离心处理至步骤三中的固定，直至所述二级细胞样本的表面凝结成块，得到细胞固定样本初样；采用取样器将所述细胞固定样本初样从离心管中取出，采用一次性切片刀切去所述细胞固定样本初样的底部，得到圆饼状细胞固定样本；步骤四、细胞蜡块的形成：以步骤三中得到的圆饼状细胞固定样本的圆面为底面，将所述圆饼状细胞固定样本水平放置在吸水纸上，再采用一次性切片刀将所述圆饼状细胞固定样本从其圆面垂直等分切开，获得多个等分细胞固定样本(1)，采用拭镜纸将多个等分细胞固定样本(1)一并包裹后放入组织脱水盒中，将组织脱水盒放入组织处理机中依次进行脱水、透明和浸蜡处理,得到多个等分细胞蜡块；步骤五、石蜡包埋细胞块的形成：以步骤四中垂直等分切开的切面为底面，将多个等分细胞蜡块放置在组织包埋盒内进行石蜡包埋，形成石蜡包埋细胞块(2)；步骤六、细胞块切片的形成：采用切片机对所述石蜡包埋细胞块(2)进行切片，得到M张细胞块石蜡切片，采用烤片机对M张细胞块石蜡切片中的m张细胞块石蜡切片进行烘烤，然后对烘烤后的m张细胞块石蜡切片进行脱蜡至水处理，采用自动载玻片染色机对脱蜡至水处理后的细胞块石蜡切片进行HE染色，得到HE染色细胞块切片，对HE染色细胞块切片进行镜检，当HE染色细胞块切片中存在肿瘤细胞时，另外选取M张细胞块石蜡切片中的n张细胞块石蜡切片，采用烤片机对n张所述细胞块石蜡切片进行烘烤，然后对烘烤后的n张细胞块石蜡切片进行脱蜡至水处理，采用全自动免疫组化染色机对脱蜡至水处理后的细胞块石蜡切片进行免疫细胞化学染色，得到免疫组化染色细胞块切片，该免疫组化染色细胞块切片为能够完整呈现恶性肿瘤细胞位置的免疫组化细胞块染色切片，其中，M≥3，n≥m，m+n＝M。...

【技术特征摘要】
1.完整呈现恶性肿瘤细胞位置的细胞块石蜡切片制作方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、获取初级细胞样本：将收集的细胞液放入透明、平底的容器内，对所述细胞液进行前处理，得到初级细胞样本，将所述初级细胞样本放置在离心管中；步骤二、获取二级细胞样本：将步骤一中装有初级细胞样本的离心管放置在离心机中进行离心处理，采用吸管吸去离心管中的上层清液后得到沉淀物，所述沉淀物为二级细胞样本；步骤三、获取细胞固定样本：向步骤二中装有二级细胞样本的离心管中加入固定剂，对所述二级细胞样本固定6h～8h，当所述二级细胞样本的表面凝结成块时，得到细胞固定样本初样；当所述二级细胞样本的表面未凝结成块时，重复执行步骤二中的离心处理至步骤三中的固定，直至所述二级细胞样本的表面凝结成块，得到细胞固定样本初样；采用取样器将所述细胞固定样本初样从离心管中取出，采用一次性切片刀切去所述细胞固定样本初样的底部，得到圆饼状细胞固定样本；步骤四、细胞蜡块的形成：以步骤三中得到的圆饼状细胞固定样本的圆面为底面，将所述圆饼状细胞固定样本水平放置在吸水纸上，再采用一次性切片刀将所述圆饼状细胞固定样本从其圆面垂直等分切开，获得多个等分细胞固定样本(1)，采用拭镜纸将多个等分细胞固定样本(1)一并包裹后放入组织脱水盒中，将组织脱水盒放入组织处理机中依次进行脱水、透明和浸蜡处理,得到多个等分细胞蜡块；步骤五、石蜡包埋细胞块的形成：以步骤四中垂直等分切开的切面为底面，将多个等分细胞蜡块放置在组织包埋盒内进行石蜡包埋，形成石蜡包埋细胞块(2)；步骤六、细胞块切片的形成：采用切片机对所述石蜡包埋细胞块(2)进行切片，得到M张细胞块石蜡切片，采用烤片机对M张细胞块石蜡切片中的m张细胞块石蜡切片进行烘烤，然后对烘烤后的m张细胞块石蜡切片进行脱蜡至水处理，采用自动载玻片染色机对脱蜡至水处理后的细胞块石蜡切片进行HE染色，得到HE染色细胞块切片，对HE染色细胞块切片进行镜检，当HE染色细胞块切片中存在肿瘤细胞时，另外选取M张细胞块石蜡切片中的n张细胞块石蜡切片，采用烤片机对n张所述细胞块石蜡切片进行烘烤，然后对烘烤后的n张细胞块石蜡切片进行脱蜡至水处理，采用全自动免疫组化染色机对脱蜡至水处理后的细胞块石蜡切片进行免疫细胞化学染色，得到免疫组化染色细胞块切片，该免疫组化染色细胞块切片为能够完整呈现恶性肿瘤细胞位置的免疫组化细胞块染色切片，其中，M≥3，n≥m，m...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨莉，王映梅，付欣，杨巧，马娟，蔡梦霞，赵建业，
申请(专利权)人：杨莉，
类型：发明
国别省市：陕西,61