针对人免疫缺陷病毒的遗传疫苗制造技术

提供了用以激发宿主对人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）作出免疫应答的重组体腺病毒以及将其给予宿主的方法。所述的重组体腺病毒能够表达多种野生型或者突变型ＨＩＶ抗原，如没有切割位点或者胞质结构域的ＨＩＶ包膜蛋白，天然、分泌或膜结合形式的结构蛋白如Ｇａｇ及其蛋白水解片段，ＨＩＶ酶如逆转录酶、蛋白酶和整合酶，以及调控蛋白如Ｔａｔ、Ｒｅｖ和Ｎｅｆ。所述的重组体腺病毒还可以表达免疫刺激因子如细胞因子以进一步提高ＨＩＶ抗原的免疫原性。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

技术介绍
专利
本专利技术涉及用于刺激人或者其它宿主的免疫应答的疫苗，特别是涉及在宿主中表达人免疫缺陷病毒(HIV)的异源抗原并激发针对HIV感染的免疫应答的重组病毒。
技术介绍
用于开发疫苗的现有技术在很大程度上基于这样的理念使用变性的病毒或者使用由细菌制得的纯化的病毒蛋白。这些类型的疫苗只对有限数目的感染剂有效，而且其保护率也是有限的。对于包括埃博拉病毒和HIV病毒在内的、含有膜(包膜)糖蛋白(GPs)的病毒，使用变性的病毒或者纯化的病毒蛋白通常达不到满意的效果。这可能是由于以下几个原因。首先，这些病毒的GPs对变性过程敏感，因而蛋白的表位会被变性过程改变。其次，GPs的糖部分是中和抗体的重要的抗原决定簇。比较而言，由细菌制得的蛋白不能被适当的糖基化而且可折叠成具有不同于那些天然病毒蛋白的抗原性的稍微不同的结构。而且，许多基于消弱或者变性病毒的疫苗只能提供对少量免疫抗原的弱免疫应答。此外，这些疫苗制剂常常只能提供有限的保护，而不是我们所期望的终生免疫。其它疫苗途径通过将质粒直接注射到体内来表达抗原，即所谓的裸DNA或者DNA疫苗技术。这些方法包括在体内通过用质粒转染细胞而将携带抗原编码基因的DNA质粒特意导入。这些质粒表达能够引起免疫应答的抗原。由DNA疫苗所激发的免疫应答可能效率很低，其原因可能是由于摄取质粒的水平低或者抗原在细胞的表达水平低所致。DNA疫苗还存在因载体降解所致的抗原表达时期极短的特征。另外，大量生产DNA疫苗不但困难而且昂贵。人们已经对可复制型活疫苗进行了修饰，用以表达乙型肝炎病毒(HBV)，人免疫缺陷病毒(HIV)，流感和疟疾抗原的基因。可是在一些情况下，对重组疫苗的免疫应答常常在性质和量度上受限。因此，例如，尽管使用牛痘流感重组体进行的外周免疫能够提供针对下呼吸道感染的良好保护作用，但是却无法在上呼吸道中诱导免疫。另一方面，当需要局部免疫而不是全身免疫的时候，例如在胃肠道中，用重组疫苗进行的外周免疫被证明是低效的。用表达埃博拉病毒GP的重组体痘苗病毒所进行的免疫已经被用来尝试在豚鼠中进行局部保护。Gilligan，K.J.，等.，Vaccines，9787-92(1997)。用表达GP或者核壳蛋白(NP)的DNA构建体接种保护受到埃博拉病毒致命威胁的小鼠。Vanderzanden，L.，等.，Virology，246(1)134-44(1998)。然而，这些方法每种均有其局限性，从而使得它们不能成为用于人类的埃博拉病毒疫苗的理想选择。例如，痘苗病毒会很快杀死被载体感染的细胞。因此，疫苗抗原只能表达很短的时间。然而，该方法的主要局限性在于痘苗病毒的复制引起免疫系统主要反应于牛痘蛋白，而只有少部分免疫应答指向致病病毒的抗原。这种现象已被定义为“抗原稀释”。先前试图弥补这些缺陷的方法，包括通过具有较强启动子如痘病毒来表达疫苗抗原，尚未获得显著的成功。迄今为止，还没有疫苗能够给予针对HIV感染的有效保护。因此，研制疫苗的尝试因此到现在为止还很不成功。某些与HIV反应的抗体，特别是抗GP160/120抗体，在HIV感染的无症状期和症状期都呈现出高水平，这暗示与其说这些抗体起到了保护作用，还不如说它们实际上促进了病毒黏附并进入宿主细胞。更重要的是，目前的疫苗尚不能诱导针对感染细胞-新释放的病毒粒子的来源的有效的细胞反应。专利技术概述本专利技术提供了遗传病毒疫苗。设计这些疫苗以模拟致病病毒的天然感染，而不会在将被免疫的宿主如人、家畜及其它哺乳动物体内引起与这些致病病毒天然相关的疾病。这些疫苗是复制缺陷或者不能复制的重组体良性病毒。可以对这些良性病毒进行设计以使其表达来自广谱病原体如病毒、细菌和寄生虫的抗原。这样就可以用它们来治疗天然表达这些抗原的广谱病毒、细菌和寄生虫。被感染了这些良性病毒后，宿主细胞会表达这些致病病毒的抗原并且将这些抗原以其天然构象和途径提呈，就好像细胞被致病病毒感染了一样，而且还会在宿主体内诱导出强烈且持久的免疫应答。在一个实施方案中，提供了一种用于在病毒感染的宿主中激发免疫应答的重组体良性病毒。该重组体病毒包括异源于所述良性病毒的、编码来自致病病毒的病毒抗原的抗原序列，当宿主被该重组体病毒感染的时候，该病毒抗原在宿主中的表达激发针对所述致病病毒和表达所述病毒抗原的细胞的免疫应答；和，编码免疫刺激因子的、异源于所述良性病毒的免疫刺激因子序列，其在宿主中的表达提高所述病毒抗原的免疫原性。该重组体病毒是不能复制的而且不会在宿主中引起与致病病毒相关的疾病。在该实施方案的一个变体中，所述的重组体良性病毒可以是不能复制的病毒如腺病毒、腺相关病毒，SV40病毒，逆转录病毒，单纯疱疹病毒或者痘苗病毒。优选地，所述的良性病毒不具有良性病毒天然祖先的致病区域但是却保留了其传染性。在一个优选的实施方案中，所述的良性病毒是不能复制的腺病毒，更优选为5型腺病毒。所述的异源抗原序列可以被放置在所述腺病毒的E1，E3或者E4区域中。所述的免疫刺激因子序列可以被放置在所述腺病毒的E4，E3或者E1区域中。在所述优选实施方案的一个变体中，所述的异源抗原序列和免疫刺激因子序列被放置在腺病毒的E1，E3或者E4区域中，在此区域中，所述的异源抗原序列和免疫刺激因子序列通过内部核糖体进入位点或者通过剪接供体-受体机制从启动子处被双顺反子地表达。所述病毒抗原或者免疫刺激因子的表达可以由与所述重组体病毒的天然祖先同源的启动子调控。或者，所述病毒抗原的表达可以由与所述重组体病毒的天然祖先异源的启动子调控。例如，与所述重组体病毒的天然祖先异源的启动子可以是真核启动子如胰岛素启动子，人巨细胞病毒(CMV)启动子及其早期启动子，猿猴病毒SV40启动子，劳斯肉瘤病毒LTR启动子/增强子，鸡胞质β-肌动蛋白启动子，和可诱导的启动子如可四环素诱导的启动子。所述的致病病毒可以是任何在人或其它动物中引起致病效果或者疾病的致病病毒。因此，所述的重组体良性病毒可以被用作使宿主免于致病病毒感染的疫苗。在一个变体中，所述的致病病毒可以是人免疫缺陷病毒(HIV)的各种菌株，如HIV-1和HIV-2。病毒抗原可以是HIV糖蛋白(或者表面抗原)如HIV GP120和GP41，或者衣壳蛋白(或者结构蛋白)如HIV P24蛋白。在另一个变体中，所述的致病病毒可以是埃博拉病毒。病毒抗原可以是埃博拉病毒的糖蛋白或表面抗原如埃博拉病毒的GP1或者GP2蛋白。在另一个变体中，所述的致病病毒可以是肝炎病毒如A，B，C，D或者E型肝炎病毒。例如，所述的病毒抗原可以是B型肝炎病毒的表面抗原或者核心蛋白例如小乙肝病毒表面抗原(SHBsAg)(也称澳大利亚抗原)，中乙肝病毒表面抗原(MHBsAg)和大乙肝病毒表面抗原(LHBsAg)。所述的病毒抗原可以是C型肝炎病毒的表面抗原或者核心蛋白例如NS3，NS4和NS5抗原。在另一个变体中，所述的致病病毒可以是呼吸道合胞病毒(RSV)。例如，RSV病毒抗原可以是RSV的糖蛋白(G-蛋白)或融合蛋白(F-蛋白)，其序列可以从基因库中得到。在另一个变体中，所述的致病病毒可以是单纯疱疹病毒(HSV)如HSV-1和HSV-2。例如，所述的HSV病毒抗原可以是来自HSV-2的糖蛋白D。在另一个变体中，所述的病毒抗原可以是肿瘤抗原如本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组体腺病毒，其包含：编码ＨＩＶ抗原的ＨＩＶ序列，当宿主被所述的重组体腺病毒感染的时候，由所述重组体腺病毒表达的ＨＩＶ抗原在宿主体内激发针对所述ＨＩＶ抗原的免疫应答。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：王丹鹤，
申请(专利权)人：健方公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]