一种同时检测食用油中3‑氯丙醇酯和缩水甘油酯的方法技术

本发明专利技术提供一种同时检测食用油中3‑氯丙醇酯和缩水甘油酯的方法，包括：1）称量及添加内标物：称取适量的油脂，加入内标溶液；2）初步酸水解：用酸化溴化钠水溶液对样品中所含的缩水甘油酯进行水解，将缩水甘油酯转化为3‑溴丙醇酯，3）二次酸水解：用硫酸/甲醇溶液对试样进一步酸水解，将样品中所含的3‑氯丙醇酯和3‑溴丙醇酯转化成3‑氯丙醇和3‑溴丙醇；4）衍生反应：所得水解产物用苯硼酸溶液进行衍生；5）检测分析：用GC‑MS进行定量检测分析。本发明专利技术使用酸水解法，解决了碱水解法不稳定，容易破坏水解产物的弊端，用苯硼酸衍生效果稳定且成本低，实现了3‑氯丙醇酯和缩水甘油酯的同时检测，不需要重复检测，缩短检测时间。

A method for simultaneously detecting 3 chloropropanols ester and glycidyl esters in edible oil

The present invention provides a method for the determination of 3, chloropropanols ester and glycidyl esters in edible oil include: 1) weighing and adding internal standard: take an appropriate amount of grease, adding internal standard solution; 2) preliminary acid hydrolysis acidification with sodium bromide aqueous solution of samples contained shrink glycerol ester hydrolysis, the glycidyl ester into 3 bromide alcohol ester, 3) two times: acid hydrolysis with sulfuric acid / methanol solution of sample further acid hydrolysis, 3 chloropropanols esters contained in the sample and 3 bromine alcohol ester into 3 chloropropanols and 3 bromine propyl alcohol 4); derivative reaction: the hydrolysis product of benzene boric acid solution was derived; 5) Analysis: quantitative analysis by GC MS. The invention solves the use of acid hydrolysis, alkaline hydrolysis is not stable, easy to destroy the drawbacks of hydrolysates, derivatization with phenylboronic acid stable effect and low cost, can detect 3 chloropropanols and glycidyl ester, do not need to repeat the test, shorten the detection time.

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测食用油中3-氯丙醇酯和缩水甘油酯的方法
本专利技术属于食品安全检测
，具体涉及一种同时检测食用油中3-氯丙醇酯和缩水甘油酯的方法。
技术介绍
氯丙醇酯是氯丙醇类化合物与脂肪酸的酯化产物，近些年来的研究发现，在谷物、咖啡、鱼、肉制品、马铃薯、坚果和以植物油为原料的热加工油脂食品中都有3-氯丙醇酯检出。尤其精炼植物油等食品中检出3-氯丙醇酯的报道逐渐增加。缩水甘油酯是脂肪酸与缩水甘油的酯化产物，与氯丙醇酯形成机理相似。在油脂精炼过程中，缩水甘油酯通常会伴随3-氯丙醇酯一起形成，3-氯丙醇酯含量高，缩水甘油酯含量也高。国家食品药品监督管理局于2017.03.24发布：关于“氯丙醇酯和缩水甘油酯”的风险解析，建议加强分析研究，为这两种物质是否需要制定限量标准提供科学依据；2017.04月国家粮食局发起“中国好粮油行动计划”，而作为中国好粮油系列标准之一的《中国好粮油植物油》行业标准其要求3-氯丙醇含量≤5.0mg/kg。目前文献中常见的3-氯丙醇酯和缩水甘油酯检测多为碱水解法，虽然水碱时间短效率高，但是存在比较严重的技术缺陷，即碱水解法稳定性较差，须严格控制水解时间（精确到分钟），稍有偏差会造成过度水解，导致结果偏差较大。另外在检测和结果计算时也比较麻烦，同一样品需要检测两次，采用差量法分别计算3-氯丙醇酯和缩水甘油酯含量。
技术实现思路
本专利技术克服了以上相关缺点，提供了一种同时检测3-氯丙醇酯和缩水甘油酯的方法，该方法稳定、高效，缩短了仪器检测时间。本专利技术的目的是这样实现的，一种同时检测食用油中3-氯丙醇酯和缩水甘油酯的方法，其特点在于具体包括如下步骤：1)称量并添加内标物：称取适量的油脂至具塞玻璃管中，加入内标溶液后用四氢呋喃充分混合至完全溶解，得到油脂溶液；2）初步酸水解：向步骤1）所得油脂溶液中加入酸化溴化钠水溶液进行水解反应，之后加入碳酸氢钠水溶液终止反应，用正己烷萃取，转移上层到一个空的玻璃管中，氮气流下吹干后用四氢呋喃溶解残渣，得到残渣溶液；3）二次酸水解：向步骤2）所得残渣溶液中加入硫酸/甲醇溶液进一步水解，之后加入碳酸氢钠饱和溶液终止反应，氮气流下去除有机层，加入硫酸钠溶液溶解，用正己烷净化脱脂，得到水解产物溶液；4）衍生反应：向步骤3）所得水解产物溶液中加入苯硼酸溶液进行衍生反应，用正己烷萃取衍生产物，将正己烷层在氮气流下浓缩至干，用正己烷溶解残渣并转移清液至进样瓶中，得到待检样液；5）检测分析：将步骤4）所得待检样液用GC-MS分析检测。进一步地，步骤1）中所述称取样品的重量区间为100-110mg之间，若油脂在室温下是固体，称量之前应先将样品融化；进一步地，，步骤2）使用酸化溴化钠将缩水甘油酯转化为3-溴丙醇酯。进一步地，步骤3-4）使酸化甲醇将3-氯丙醇酯及3-溴丙醇酯水解为对应的醇类，并用苯硼酸衍生，生成3-氯丙醇苯硼酸衍生物和3-溴丙醇苯硼酸衍生物，同时检测。进一步地，使用离心方式加速步骤2-4）中有机相与水相的分离。本专利技术与已有技术相比具有以下显著特点和积极效果：本专利技术检测方法是先将缩水甘油酯用酸化的溴化钠水解为3-溴丙醇酯，然后将3-溴丙醇酯与样品中原有的3-氯丙醇酯进一步酸水解为对应的3-溴丙醇和3-氯丙醇，再用苯硼酸进行衍生反应，实现一针进样同时检测缩水甘油酯和3-氯丙醇酯，本专利技术核心步骤为两次酸水解步骤，避免了碱水解条件苛刻不稳定的弊端。步骤1）中称量样品重量控制在100-110mg之间，避免称量过多导致第二次酸水解时硫酸/甲醇溶液无法完全溶解油脂、导致水解不充分的问题；步骤2）初步水解时间为10~20min，更优选为15min；终止反应后将有机相转移至另一玻璃管中的操作，一定要完全转移，防止损失；步骤3）二次水解后去除有机溶剂，一定要脱出干净，使剩余溶液量在0.5ml左右；步骤4）所述衍生反应，苯硼酸溶液添加量为200~300μl，优选为250μl，加入量过少会导致苯硼酸析出，造成衍生效果变差，加入量过多会导致丙酮不完全溶解，造成试剂浪费；衍生温度：室温~80℃，优选40℃，温度过高会导致衍生副产物增多干扰检测。本专利技术一种优选方案，气相色谱-质谱联用仪的检测条件包括：色谱条件：柱选用HP-5ms毛细管柱，进样口温度：250℃；升温程序：初始温度60℃，保持2min，以10℃/min升温至170℃，再以5℃/min升温至200℃，再以20℃/min升温至300℃，保持12min；进样方式：不分流；载气：He气；流速：0.8ml/min；进样体积：1μl。质谱条件：离子源温度：230℃；扫描方式：选择离子监测（SIM）模式；溶剂延迟时间：6min；SIM参数：D5-3-MCPD-pba：150*、201、203、93；3-MCPD-pba：147*、196、198、91；D5-3-MBPD-pba：150*、245；3-MBPD-pba：147*、240、91、105.1，*离子为定量离子。附图说明图1是D5-3-MCPB-pba、3-MCPB-pba、D5-3-MBPB-pba、3-MBPB-pba总离子流图，浓度为250μg/L。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步详细说明。本专利技术所用溶液配制如下：溶液1：酸化溴化钠溶液（3mg/ml，5%硫酸）：取1g溴化钠用水定容10ml，取180μl该溶液加入0.3ml硫酸，再加入5.5ml水，摇匀。溶液2：取0.6g碳酸氢钠用水定容至100ml，摇匀。溶液3：取1.8ml硫酸用甲醇定容至10ml，摇匀。溶液4：取9.6g碳酸氢钠用水定容至100ml，摇匀。溶液5：取20g硫酸钠用水定容至100ml，摇匀。溶液6：取3g苯硼酸用12ml（丙酮:水=19:1）溶液定容，摇匀。所需标准品：标准储备液1：称取适量3-MCPD棕榈酸酯标准物质（精确到0.01mg）用乙酸乙酯溶解并定容至刻度，配制成浓度为200mg/L（以3-MCPD计）的储备液，置于0~4℃冰箱中，有效期12个月。标准储备液2：称取适量棕榈酸缩水甘油酯标准物质（精确到0.01mg）用乙酸乙酯溶解并定容至刻度，配制成浓度为200mg/L（以3-MCPD计）的储备液，置于0~4℃冰箱中，有效期12个月。混合标准溶液：吸取适量标准储备液1和标准储备液2用乙酸乙酯定容至刻度，配制成5mg/L（以3-MCPD）的混合标准溶液，置于0~4℃冰箱中，有效期12个月。内标溶液1：称取适量D5-3-MCPD棕榈酸酯标准物质（精确到0.01mg）用乙酸乙酯溶解并定容至刻度，配制成浓度为5mg/L（以D5-3-MCPD计）的储备液，置于0~4℃冰箱中，有效期12个月。内标溶液2：称取适量D5-棕榈酸缩水甘油酯标准物质（精确到0.01mg）用乙酸乙酯溶解并定容至刻度，配制成浓度为5mg/L（以D5-3-MCPD计）的储备液，置于0~4℃冰箱中，有效期12个月。实施例1，一种同时检测食用油中3-氯丙醇酯和缩水甘油酯的方法，本实施例食用油为棕榈油，包括如下步骤：1）配制标准曲线：标准取适量混合标准溶液于具塞玻璃管中，分别配制成浓度为：0.00、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00mg/L浓度的标准样品，最终定容体积为0.50ml，均各加入50μl内标溶液1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时检测食用油中3‑氯丙醇酯和缩水甘油酯的方法，其特征在于，该方法具体包括如下步骤：1) 称量并添加内标物：称取适量的油脂至具塞玻璃管中，加入内标溶液后用四氢呋喃充分混合至完全溶解，得到油脂溶液；2）初步酸水解：向步骤1）所得油脂溶液中加入酸化溴化钠水溶液进行水解反应，之后加入碳酸氢钠水溶液终止反应，用正己烷萃取，转移上层到一个空的玻璃管中，氮气流下吹干后用四氢呋喃溶解残渣，得到残渣溶液；3）二次酸水解：向步骤2）所得残渣溶液中加入硫酸/甲醇溶液进一步水解，之后加入碳酸氢钠饱和溶液终止反应，氮气流下去除有机层，加入硫酸钠溶液溶解，用正己烷净化脱脂，得到水解产物溶液；4）衍生反应：向步骤3）所得水解产物溶液中加入苯硼酸溶液进行衍生反应，用正己烷萃取衍生产物，将正己烷层在氮气流下浓缩至干，用正己烷溶解残渣并转移清液至进样瓶中，得到待检样液；5）检测分析：将步骤4）所得待检样液用GC‑MS分析检测。

【技术特征摘要】
1.一种同时检测食用油中3-氯丙醇酯和缩水甘油酯的方法，其特征在于，该方法具体包括如下步骤：1)称量并添加内标物：称取适量的油脂至具塞玻璃管中，加入内标溶液后用四氢呋喃充分混合至完全溶解，得到油脂溶液；2）初步酸水解：向步骤1）所得油脂溶液中加入酸化溴化钠水溶液进行水解反应，之后加入碳酸氢钠水溶液终止反应，用正己烷萃取，转移上层到一个空的玻璃管中，氮气流下吹干后用四氢呋喃溶解残渣，得到残渣溶液；3）二次酸水解：向步骤2）所得残渣溶液中加入硫酸/甲醇溶液进一步水解，之后加入碳酸氢钠饱和溶液终止反应，氮气流下去除有机层，加入硫酸钠溶液溶解，用正己烷净化脱脂，得到水解产物溶液；4）衍生反应：向步骤3）所得水解产物溶液中加入苯硼酸溶液进行衍生反应，用正己烷萃取衍生产物，将正己烷层在氮气流...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈军，高洪良，王锐，林俊伶，时红，
申请(专利权)人：山东龙大粮油有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37