一种利用纳米微球时间分辨荧光探针检测喹诺酮类抗生素的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用纳米微球时间分辨荧光探针检测喹诺酮类抗生素的方法，其包括以下的步骤：制备羧基化聚苯乙烯纳米微球、制备纳米荧光微球；其中，稀土元素离子、β‑二酮体类螯合物和荧光增强协同剂的摩尔比为1∶4∶3；所述稀土元素离子为铽离子和镝离子、制备纳米微球时间分辨荧光‑喹诺酮类抗生素探针、制备层析试纸条、利用上述探针和层析试纸条检测喹诺酮类抗生素。该检测方法检测灵敏度高，检测范围广，稳定可靠，拥有良好的商业化应用前景。

A method for the detection of quinolone antibiotics by using nanospheres time resolved fluorescence probe

The invention discloses a method for using nano microsphere time-resolved fluorescence probe detection of quinolone antibiotics, which comprises the following steps: preparation of carboxyl polystyrene microspheres, preparation of nanometer fluorescent microsphere; wherein, rare earth ions, beta two ketone chelate agent and synergistic fluorescence enhancement ratio was 1: 4: 3; the rare earth ions as Terbium and dysprosium ions and preparation of nanoparticles by time-resolved fluorescence probe, quinolone antibiotic preparation chromatography test strip, using the probe and chromatographic test strip for detecting quinolone antibiotics. The detection method has high detection sensitivity, wide detection range, stable and reliable, and has a good commercial application prospect.

【技术实现步骤摘要】
一种利用纳米微球时间分辨荧光探针检测喹诺酮类抗生素的方法
本专利技术属于检测
，具体涉及一种利用纳米微球时间分辨荧光探针检测喹诺酮类抗生素的方法。
技术介绍
时间分辨荧光分析法(Timeresolvedfluoroisnmunoassay,TRFIA)是上世纪80年代提出的一种较为新型的检测手段，TRFIA是用稀土离子作为示踪物标记蛋白质、多肽、激素、抗体、核酸探针或生物活性细胞,与其螯合剂、增强液(有一部分不需要)在待反应体系(如:抗原抗体免疫反应、生物素亲和素反应、核酸探针杂交反应、靶细胞与效应细胞的杀伤反应等)发生反应后,用时间分辨荧光仪测定最后产物中的荧光强度,根据荧光强度和相对荧光强度比值,推测反应体系中分析物的浓度,达到定量分析的目的。TRFIA与化学发光、电化学发光免疫检测技术并称为三大超灵敏检测技术，在食品检测、医学临床检测、生物学科研检测以及环境检测等方面有较为广泛的应用。由于稀土元素络合物的荧光强度都较低，因此需要采用荧光增强技术来提高检测灵敏度。目前，根据信号增强技术的不同，TRFIA可分为三种类型，解离再增强技术(DELFIA)、CyberFluor系统本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用纳米微球时间分辨荧光探针检测喹诺酮类抗生素的方法，其特征在于，其包括以下的步骤：(1)制备羧基化聚苯乙烯纳米微球；(2)利用步骤(1)制备的羧基化聚苯乙烯纳米微球，制备纳米荧光微球；所述纳米荧光微球中，稀土元素离子、β‑二酮体类螯合物和荧光增强协同剂的摩尔比为1∶4∶3；所述稀土元素离子为铽离子和镝离子；(3)利用步骤(2)制备的纳米荧光微球和喹诺酮类抗生素单克隆抗体，制备纳米微球时间分辨荧光‑喹诺酮类抗生素探针；利用步骤(2)制备的纳米荧光微球和兔IgG单克隆抗体制备纳米微球时间分辨荧光‑兔IgG探针；(4)冻干步骤(3)制备的纳米微球时间分辨荧光‑喹诺酮类抗生素探针和纳米微球时间分...

【技术特征摘要】
1.一种利用纳米微球时间分辨荧光探针检测喹诺酮类抗生素的方法，其特征在于，其包括以下的步骤：(1)制备羧基化聚苯乙烯纳米微球；(2)利用步骤(1)制备的羧基化聚苯乙烯纳米微球，制备纳米荧光微球；所述纳米荧光微球中，稀土元素离子、β-二酮体类螯合物和荧光增强协同剂的摩尔比为1∶4∶3；所述稀土元素离子为铽离子和镝离子；(3)利用步骤(2)制备的纳米荧光微球和喹诺酮类抗生素单克隆抗体，制备纳米微球时间分辨荧光-喹诺酮类抗生素探针；利用步骤(2)制备的纳米荧光微球和兔IgG单克隆抗体制备纳米微球时间分辨荧光-兔IgG探针；(4)冻干步骤(3)制备的纳米微球时间分辨荧光-喹诺酮类抗生素探针和纳米微球时间分辨荧光-兔IgG探针，得到冻干的纳米荧光微球标记的喹诺酮类抗生素单克隆抗体和和冻干的纳米荧光微球标记的兔IgG单克隆抗体；(5)利用喹诺酮类抗生素制备检测线T线，利用羊抗兔二抗制备质控线C线，喷涂、组装获得层析试纸条；(6)将步骤(4)制备的冻干的纳米荧光微球标记的喹诺酮类抗生素单克隆抗体和和冻干的纳米荧光微球标记的兔IgG单克隆抗体加入到酶标板的孔中；(7)取待测样品加入步骤(6)的酶标板的孔中；(8)向步骤(7)的孔中插入步骤(5)制备的层析试纸条，样品垫一端浸入到所述孔中的液体，浸入后插入荧光读数仪中读数，得到检测结果。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述羧基化聚苯乙烯纳米微球，由包括以下步骤的方法制得：将10mM苯乙烯单体和0.95mM丙烯酸单体溶解于10mL含0.45mM十二烷基磺酸钠的去离子水中，再加入圆底烧瓶，用磁力搅拌子搅拌均匀；用高纯氮气将圆底烧瓶中的空气除尽，密封加热至70℃，加入0.15mM过硫酸钾0.5mL，密封隔氧搅拌反应8小时后，降至室温；将反应液用whatman2v滤纸过滤，用截留分子量25,000Da的透析袋对去离子水透析5天，收集透析袋内液体，加入0.05％叠氮钠后4℃保存，所述百分比为质量百分比。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述β-二酮体类螯合物为β-萘甲酰三氟丙酮；和/或，所述荧光增强协同剂为三辛基氧化膦和/或菲罗啉。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述纳米荧光微球由包括以下步骤的方法制得：取步骤(1)制备的羧基化聚苯乙烯纳米微球，加入10mL去离子水和丙酮混合液，所述去离子水和所述丙酮的体积比为1:1，得反应液A；使反应液A中羧基化的聚苯乙烯微球的密度为1×1014个/mL，搅拌均匀，依次加入0.1M三氯化镝50μL、0.1M三氯化铽50μL、0.1Mβ-萘甲酰三氟丙酮400μL、0.1M三辛基氧化膦150μL和0.1M菲罗啉150μL，加热至60℃恒温搅拌避光反应10小时，然后降至...

【专利技术属性】
技术研发人员：庄捷，张玲，杨小如，梁俊，张琪，
申请(专利权)人：上海溯源生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31