The invention discloses a use method of iTRAQ markers in osteoarthritis model, the sample preparation of high performance liquid chromatography (LC) removal of high abundance proteins the regulatory protein sample concentration and iTRAQ reagent labeled the strong cation exchange column (SCX) and nano LC separation target: SCX fractions collected after lyophilization, the reversed phase chromatographic separation and mass spectrometric detection and target acquisition: 900 ms 4000 m/z map, each target point cumulative acquisition of 1500 times; confirm the invention markers through the sample analysis, and evaluate its clinical correlation, these OA candidate markers for diagnosis of OA are put forward the feasibility of OA in the prevention, early diagnosis and clinical application, and its significance in bone and joint health warning in the crowd.
【技术实现步骤摘要】
一种iTRAQ标记在骨关节炎模型中的使用方法
本专利技术涉及基因转录组学和蛋白质组学领域,尤其是一种iTRAQ标记在骨关节炎模型中的使用方法。
技术介绍
骨关节炎(osteoarthritis,OA)又称退行性骨关节病,是最常见的关节疾患之一,主要表现为关节缓慢发展的疼痛、僵硬、肿大,伴关节功能障碍,甚至发生残疾[1-2]。OA的发病机制是关节受遗传学、生物学和机械力学事件(如遗传、代谢异常、劳损、创伤等)的共同作用,诱发细胞和基质在形态学、生物力学、分子学等方面发生改变,导致关节软骨细胞、细胞外基质及软骨下骨的降解和合成不平衡。其结局为软骨细胞的软化、纤维化、溃疡并丢失,在失去了软骨的保护作用后,软骨下骨发生硬化、象牙化,最终导致骨赘及软骨下骨囊肿的形成。OA可累及全身多个关节,其患病率随年龄增长而增长,尤其危害老年人健康,并给社会带来沉重负担。目前65岁以上人群中OA的患病率可达50%以上,而在75岁以上人群中,这一数值可达到80%左右。美国的调查数据显示,OA是导致50岁以上男性丧失工作能力的第2号杀手,仅次于心血管疾病[5]。随着世界及我国社会人口老龄化的加速,OA已越来越成为医患乃至社会关注的焦点话题。目前,对OA的诊断主要依靠临床症状、影像学资料和关节镜检查等,其中,后两者对于明确关节部位组织病理变化情况有很大价值。影像学中X线的改变是评价OA进展的常用方法,但它仍具有一定的局限性,其特异性和敏感性较差。通过病理标本研究发现,即使在X线表现正常时,关节软骨也可能已严重受累;一旦患者出现X线改变,疾病往往已经处于进展期[6-7],关节的正常功能和 ...
【技术保护点】
一种iTRAQ标记在骨关节炎模型中的使用方法,其特征在于:由以下步骤组成:①样本准备:STR/ort模型小鼠和对照小鼠各10只养至20周龄(成年),每只鼠经眼球取血0.9‑1.5 mL; 血样4℃静置1 h 后,5000 r/min离心5 min,取上清液,按50 μL/管装入0.2 mL EP管,做好标注,‑80℃保存备用;②高效液相(LC)去除高丰度蛋白:样品预处理,STR/ort模型小鼠和对照小鼠各10份血清分别等体积混匀成STR/ort模型组和对照组pool 样,按pool 样:bufferA=1:3比例(即样品25 μL,bufferA75 μL)混合,共100 μL;0.22μm滤膜过滤后,STR/ort模型和对照两组混合血清样本分别用LC分离去除高丰度蛋白;③调节蛋白样品浓度:收集LC分离后的非高丰度组分,经超滤管超滤浓缩脱盐,取超滤管内容物测定蛋白含量,调整蛋白浓度至同一水平,并经SDS‑PAGE电泳证实后,STR/ort模型和对照组各取100μg 血样进入下一步实验;④iTRAQ试剂标记:血样进行酶解、还原烷基化等处理后,分别加入iTRAQ 113、114标记,冻干后 ...
【技术特征摘要】
1.一种iTRAQ标记在骨关节炎模型中的使用方法,其特征在于:由以下步骤组成:①样本准备:STR/ort模型小鼠和对照小鼠各10只养至20周龄(成年),每只鼠经眼球取血0.9-1.5mL;血样4℃静置1h后,5000r/min离心5min,取上清液,按50μL/管装入0.2mLEP管,做好标注,-80℃保存备用;②高效液相(LC)去除高丰度蛋白:样品预处理,STR/ort模型小鼠和对照小鼠各10份血清分别等体积混匀成STR/ort模型组和对照组pool样,按pool样:bufferA=1:3比例(即样品25μL,bufferA75μL)混合,共100μL;0.22μm滤膜过滤后,STR/ort模型和对照两组混合血清样本分别用LC分离去除高丰度蛋白;③调节蛋白样品浓度:收集LC分离后的非高丰度组分,经超滤管超滤浓缩脱盐,取超滤管内容物测定蛋白含量,调整蛋白浓度至同一水平,并经SDS-PAGE电泳证实后,STR/ort模型和对照组各取100μg血样进入下一步实验;④iTRAQ试剂标记:血样进行酶解、还原烷基化等处理后,分别加入iTRAQ113...
【专利技术属性】
技术研发人员:于思创,王海云,
申请(专利权)人:南宁科城汇信息科技有限公司,
类型:发明
国别省市:广西,45
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