具有降低的过敏原性和保留的Ｔ－细胞反应性的Ｐｈｌ　ｐ　５ａ衍生物制造技术

本发明专利技术涉及早熟禾亚科（Ｐｏｏｉｄｅａｅ）第５组过敏原变体的制备和用途，其特征在于和已知的野生型过敏原相比，具有降低的ＩｇＥ反应性以及基本保留的与Ｔ－淋巴细胞的反应性。这些低过敏原性的过敏原变体可用于草类花粉过敏患者的特定免疫疗法（弱敏性）或用于草类花粉过敏的预防免疫疗法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及早熟禾亚科(Pooideae)第5组过敏原变体的制备和用途，其特征在于和已知的野生型过敏原相比，具有降低的IgE反应性以及基本保留的与T-淋巴细胞的反应性。这些低过敏原性的过敏原变体可用于草类花粉过敏患者的特定免疫疗法(弱敏性)或用于草类花粉过敏的预防免疫疗法。
技术介绍
I型变态反应具有世界范围的重要性。在工业化国家，最高达20％的人群遭受诸如过敏性鼻炎、结膜炎或支气管哮喘的困扰。这些变态反应由空气中存在的过敏原(空气过敏原)引起，这些过敏原由例如植物花粉、螨、猫或狗等各种来源释放。而最高达40％的I型变态反应又表现为特异性的与草类花粉过敏原的IgE反应性(Friedhoff等.，1986，J.Allergy Clin.Immunol.78，1190-2002)。触发I型变态反应的物质是蛋白、糖蛋白或多肽。经粘膜吸收后，这些过敏原与致敏人群的结合在肥大细胞表面的IgE分子反应。如果2个IgE分子经过1个过敏原彼此连接，就导致效应细胞的介导分子(例如组胺、前列腺素)和细胞因子的释放，然后引起相应的临床症状。根据具有抗一些单个的过敏原分子与变态反应患者的IgE抗体反应的相对频率，可以看出主要过敏原和次要过敏原的差别。在梯牧草(Phleum pratense)的病例中，迄今为止，Phlp1(Petersen等.，1993，J.Allergy Clin.Immunol.92789-796)，Phl p 5(Matthiesen and Lwenstein，1991，Clin.Exp.Allergy21，297-307；Petersen等.，Int.Arch.AllergyImmunol.98105-109)，Phl p6(Petersen等.，1995，Int.Arch.Allergy Immunol.108，49-54)，Phl p2/3(Dolecek等.，1993，FEBS 335(3)，299-304)，Phl p4(Haavik等.，1985，Int.Arch.Allergy Appl.Immunol.78260-268；Valenta等.，1992，Int.Arch.Allergy Immunol.97287-294，Fischer等.，1996，J.Allergy Clin.Immunol.98189-198)和Phl p13(Suck等.，2000，Clin.Exp.Allergy30324-332；Suck等.，2000，Clin.Exp.Allergy301395-1402)迄今被确定为主要过敏原。在梯牧草(Phleum pratense)中占优势的主要过敏原为Phl p1和Phl p 5，Phl p 5以5a和5b两种形式存在，其分子量不同并且由各自的基因编码。推断的Phl p 5a和Phl p 5b的氨基酸序列已经通过重组DNA技术的方法得以确定。Phl p 5a为约32kD的蛋白质并且与85-90％的草类花粉过敏患者的IgE抗体反应。Phl p 5a以一系列同源变体形式存在，其相互间因点突变而不同而可能对应于不同的等位形式。相关草类，如黑麦草(Lolium perenne)、草地早熟禾(Poapratensis)及其他的花粉包含与Phl p 5a同源的过敏原且一起已知为第5组过敏原。这些草类第5组过敏原的高级结构同源性相应地引起与草类花粉过敏患者的IgE抗体高的分子交叉反应性。对变态反应有效治疗的经典方法是特异性的免疫治疗和脱敏治疗(Fiebig，1995，Allergo J.4(6)，336-339，Bousquet等.，1998，J.Allergy Clin.Immunol.102(4)，558-562)。在这些方法中，把天然过敏原提取物以逐步增加剂量的方式给病人皮下注射。不过，该方法必须承受变态反应甚至过敏性休克的风险。为了把这些风险降低到最小程度，现在采用类变应原形式的新颖制备物。与未处理过的提取物相比，这些化学修饰的过敏原提取物明显地降低IgE反应性，但具有一致的T细胞反应性(Fiebig，1995，Allergo J.4(7)，377-382)。使用通过重组方法产生的过敏原，有可能更实质性地优化治疗方法。通过重组方法产生高纯度的过敏原的确定的混合剂，如果需要与各个病人相匹配，可以代替来源于天然过敏原的提取物，因为除了各种过敏原外，后者还含有相对大量的免疫原性但不伴有过敏原性的蛋白。用表达产物获得安全脱敏疗法的真实前景，可通过特异突变重组过敏原来实现，在这些过敏原中，IgE表位被特异地缺失，而不损坏治疗所须的T细胞表位(Schramm等.，1999，J.Immunol.162，2406-2414)。通过治疗方法影响过敏患者中扰乱的Th细胞平衡的另一个可能是，用编码相关过敏原(免疫治疗性DNA疫苗)的可表达的DNA进行治疗。给啮齿类注射编码过敏原的DNA，已经得到了对过敏原特异的免疫应答的初步实验证据(Hsu等.，1996，Nature Medicine 2(5)，540-544)。本专利技术的目的在于提供蛋白质和DNA水平的具有降低的IgE活性而同时T-细胞反应性基本保留的早熟禾亚科(Pooideae)第5组过敏原的新变体，并且因此适于特异性的免疫疗法和免疫治疗的DNA接种。附1早熟禾亚科(Pooideae)种类Phl p 5a同源cDNA序列相关区域的对比黑麦草(Lol p)、草地早熟禾(Poa p)、普通小麦(Tri a)和大麦(Hor v)编号DNA插入的核苷酸位点Phl p 5a、Poa p 5和Lol p 5序列来自国家生物技术信息中心(NCBI)，Bethesda，USA“Gen-Bank”数据库的cDNA序列Hor v和Tri a序列来自基因组研究所(TIGR)，Rockville，USA EST数据库的EST序列黑色边框与Phl p 5a(基于GenBank AJ555152)一致的序列带点的边框对应于氨基酸94-113(基于GenBank AJ555152)的缺失带长划的边框对应于氨基酸175-198(基于GenBank AJ555152)的缺失图2早熟禾亚科(Pooideae)种类Phl p 5a同源氨基酸序列的对比(相关的序列区域，由DNA序列推断)黑麦草(Lol p)、草地早熟禾(Poa p)、普通小麦(Tri a)和大麦(Hor v)编号DNA插入的核苷酸位点Phl p 5a、Poa p 5和Lol p 5序列来自国家生物技术信息中心(NCBI)，Bethesda，USA“Gen-Bank”数据库的cDNA序列Hor v和Tri a序列来自基因组研究所(TIGR)，Rockville，USA EST数据库的EST序列黑色边框与Phl p 5a(基于GenBank AJ555152)一致的序列带点的边框对应氨基酸94-113(基于GenBank AJ555152)的缺失带长划的边框对应氨基酸175-198(基于GenBank AJ555152)的缺失图3组氨酸融合蛋白形式的纯化的缺失突变体的SDS-PAGE1)标记2)rPhl p 5a wt(His)3)Phl p 5a DM-Δ94-113(His)4)Phl p 5本文档来自技高网...

【技术保护点】
早熟禾亚科（Ｐｏｏｉｄｅａｅ）的第５组过敏原变体，其特征在于和已知的野生型过敏原相比，具有降低的ＩｇＥ反应性以及基本保留的与Ｔ－淋巴细胞的反应性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：M瓦尔德，O克罗姆维尔，A南迪，H卡莱尔特，B韦伯，H费比希，
申请(专利权)人：默克专利股份公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]