趋化因子CCL4作为制备治疗骨折药物的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种趋化因子CCL4作为制备治疗骨折药物的应用。本应用使用趋化因子CCL4作为制备治疗骨折药物，通过药物中的CCL4成分能有效促进人的骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化，从而快速修复受损骨组织，具有较好的疗效。此外方法简单，只需直接向患者骨折部位进行注射即可，并且治疗周期短。

Chemokine CCL4 as a preparation for the treatment of fracture drugs

The present invention discloses an application of chemokine CCL4 as a preparation for the treatment of fracture drugs. In this study, chemokine CCL4 is used as a drug for the treatment of fracture. It can effectively promote the differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cells into osteoblasts, and quickly repair damaged bone tissue by CCL4 components. In addition, the method is simple. It only needs to be injected directly to the fracture site of the patient, and the treatment cycle is short.

【技术实现步骤摘要】
趋化因子CCL4作为制备治疗骨折药物的应用
本专利技术属于药品
，涉及趋化因子CCL4作为制备治疗骨折药物的应用。
技术介绍
骨折是临床上比较常见的骨科疾病，每个人一生至少一次骨折的机会。随着中国老龄化的加剧，骨质疏松症是一种日益重要的公共卫生问题。毫无疑问，髋关节骨折的发生率已经随之迅速增长。来自北京的一项重要研究表明，从2002年到2006年，年龄超过50岁人群，髋关节骨折发生率，女性增加了58％，男性增加了49％。同时，该研究还比较了1990-1992年间与2002-2006年间髋部骨折发病率，年龄超过50岁的女性髋部骨折增加了2.76倍，男性增加了1.61倍。并且髋关节骨折发生率增加，常常导致死亡率增加。新加坡中国健康研究(SCHS)发现，那些已经发生髋部骨折的患者，在随后五年内死于其他疾病的风险较未发生过骨折的人高很多。因此，除了意外导致的骨折，毫无疑问，在人口老龄化的今天，骨质疏松症及其导致的脆性骨折，在今后的几十年中将成为一项严重的健康问题。骨折的愈合是一个“瘀去，新生，骨合”的过程，骨折的愈合过程一般分为炎症反应期、修复期和缩型期三个阶段。具体如下：1.血肿形成骨组织和骨髓都富含血管，骨折后常伴有大量出血，填充在骨折的两断端及其周围组织间，形成血肿。一般在数小时内血肿发生血液凝固。和其他组织的创伤一样，此时在骨折局部还可见轻度中性粒细胞浸润。2.纤维性骨痂形成大约在骨折后的2～3天，从骨内膜及骨外膜增生的纤维母细胞及新生毛细血管侵入血肿，血肿开始机化。这些增生的组织逐渐弥合，填充并桥接了骨折的断端，继而发生纤维化形成纤维性骨痂，或称暂时性骨痂(provisionalcallus)。肉眼上骨折局部呈梭形肿胀。约经1周左右，上述增生的肉芽组织及纤维组织部分可进一步分化，形成透明软骨。3.骨性骨痂形成骨折愈合过程的进一步发展，是骨母细胞产生新生骨质逐渐取代上述纤维性骨痂。开始形成的骨质为类骨组织，以后发生钙盐沉着，形成编织骨(wovenbone)，即骨性骨痂。纤维性骨痂内的软骨组织，发生钙盐沉着而演变为骨组织，参与骨性骨痂的形成。此时所形成的编织骨，由于其结构不够致密，骨小梁排列比较紊乱，故仍达不到正常功能需要。4.骨痂改建或再塑上述骨痂建成后，骨折的断端仅被幼稚的、排列不规则的编织骨连接起来。为了符合人体生理要求而具有更牢固的结构和功能，编织骨进一步改建成为成熟的板层骨，皮质骨和髓腔的正常关系也重新恢复。改建是在破骨细胞的骨质吸收及骨母细胞新骨质形成的协调作用下进行的。在一般情况下，经过上述步骤，骨折部恢复到与原来骨组织一样的结构，达到完全愈合。目前骨折治疗方法主要有保守疗法及手术治疗方法。根据骨折部位及骨折类型，治疗所采用的方法也不同。但是这些治疗方法，骨折愈合需要的时间比较长。近年来随着组织工程学和生物医学的发展，一些生长因子例如BMP、TGF-β、FGF、神经生长因子NGF等均报道在老鼠的骨折模型中可促进骨折愈合。此外，基因改造的骨髓间充质干细胞(MSCs)已经用于骨折的治疗，并且展示出了诱人的治疗前景。趋化因子，也称做趋化激素、趋化素或者化学激素，是一种小分子的细胞因子家族蛋白。CCL4是趋化因子的一种，又名MIP-1β，参与多种免疫应答和炎症应答，作为白细胞的趋化剂和活化剂发挥作用。趋化因子CCL4通常应用于细胞的迁移领域，可用于细胞治疗，而趋化因子在骨折治疗领域的应用目前从未报道过。
技术实现思路
为了解决上述现有技术问题，本专利技术提供一种趋化因子CCL4作为制备治疗骨折药物的应用，具体方案如下：趋化因子CCL4作为制备治疗骨折药物的应用。优选地，所述药物中以CCL4为唯一活性成分。优选地，所述药物组分包括CCL4和PBS溶液。优选地，所述药物组分包括CCL4和生理盐水。优选地，所述药物中CCL4的浓度为40-60ng/ml。最佳地，所述药物中CCL4的浓度为50ng/ml。上述应用，所述药物是在现有技术的基础上，采用西药制剂常规方法制备成任何可药用的注射剂。上述应用，所述注射剂每次使用剂量是100μl，直接皮下注射到患者的骨折部位。可以根据患者的骨折面积相应调整每次注射的剂量，骨折面积越大，每次注射的剂量越多。上述应用，所述注射剂每隔1天-3天注射一次。更佳地，所述注射剂每隔2天注射一次。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本应用使用趋化因子CCL4作为制备治疗骨折药物，通过药物中的CCL4成分能有效促进人的骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化，从而快速修复受损骨组织，具有较好的疗效。此外方法简单，只需直接向患者骨折部位进行注射即可，并且治疗周期短。附图说明图1是CCL4制剂对间充质干细胞的毒性研究；图2是间充质干细胞的ALP活性检测；图3是成骨分化相关的标记基因检测；图4是间充质干细胞的钙结节检测；图5是间充质干细胞的X-ray检测；图6是间充质干细胞的micro-CT检测。具体实施方式为了更好地理解本专利技术，下面通过实施例进一步说明本专利技术的作用，而非本专利技术的限制。实施例11.材料和方法1.1骨髓来源的间充质干细胞的培养取36岁，男性健康志愿者捐献的骨髓，通过Ficoll-Hypaque密度梯度离心收集单核细胞，用PBS洗涤两次后，将这些单核细胞直接种于细胞培养瓶中，加入含100U/ml青霉素、100U/ml链霉素及10％胎牛血清(Invitrogen公司)的α-MEM(Invitrogen公司)培养基，置于37℃、5％CO2的温箱中孵育，继续培养5-7天(换液周期为3天/次)，可以观察到间充质干细胞集落形成。细胞扩增后，取P3～P8代用于相关实验。1.2药物PBS，CCL4均购于美国SigmaChemical公司。1.3统计计量资料用均数±标准差表示，采用SPSS16.0软件行ANOVA方差分析并以LSD-t检验进行组间比较，P<0.05可认为具有统计学意义。1.4CCL4制剂对间充质干细胞毒性的研究将CCL4溶于PBS溶液，配制成0,5,10,20,50,100ng/ml的浓度梯度。为验证不同浓度的CCL4制剂对间充质干细胞的毒性，我们以MTT法测定细胞的活力。将间充质干细胞接种于96孔板内，并用不同浓度的CCL4制剂处理72小时后，在培养基中加入5mg/ml的MTT，孵育4h后在显微镜下读数。存活率＝活细胞数/总细胞数*100％。如图1所示，结果表明，在CCL4浓度为1-100ng/ml范围内，CCL4对细胞活性略有抑制，但无显著的毒性作用，表明该药物对间充质干细胞是安全的。实施例21材料和方法1.1骨髓来源的间充质干细胞的培养取36岁，男性健康志愿者捐献的骨髓，通过Ficoll-Hypaque密度梯度离心收集单核细胞，用PBS洗涤两次后，将这些单核细胞直接种于细胞培养瓶中，加入含100U/ml青霉素、100U/ml链霉素及10％胎牛血清(Invitrogen公司)的α-MEM(Invitrogen公司)培养基，置于37℃、5％CO2的温箱中孵育，继续培养5-7天(换液周期为3天/次)，可以观察到间充质干细胞集落形成。细胞扩增后，取P3～P8代用于相关实验。1.2药物PBS，CCL4均购于美国SigmaChemical公司。1.3统计计量资料用均数本文档来自技高网...

【技术保护点】
趋化因子CCL4作为制备治疗骨折药物的应用。

【技术特征摘要】
1.趋化因子CCL4作为制备治疗骨折药物的应用。2.根据权利要求1所述的趋化因子CCL4作为制备治疗骨折药物的应用，其特征在于，所述药物中以CCL4为唯一活性成分。3.根据权利要求2所述的趋化因子CCL4作为制备治疗骨折药物的应用，其特征在于，所述药物组分包括CCL4和PBS溶液。4.根据权利要求2所述的趋化因子CCL4作为制备治疗骨折药物的应用，其特征在于，所述药物组分包括CCL4和生理盐水。5.根据权利要求1所述的趋化因子CCL4作为制备治疗骨折药物的应用，其特征在于，所述药物中CCL4的浓度为40-60ng/ml。6.根据权利要求1所述的趋化因子CCL4作为制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：张锦芳，吴中泽，
申请(专利权)人：深圳市喆邦生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44