等温单向生长的基因合成方法技术

本发明专利技术涉及的是一种基因工程技术领域的等温单向生长的基因合成方法。具体包括以下步骤：（１）根据目标ＤＮＡ序列设计并合成用于延伸的寡核苷酸链，或者纯化合成的寡核苷酸链；（２）在多种酶的协同作用下进行等温生长，合成目标ＤＮＡ长链；（３）以步骤（２）中所得的产物为模板进行ＰＣＲ扩增，获取目标序列长度的ＰＣＲ产物。本发明专利技术具有成功率高，出错率低，设计简单，适用面广，自动化高等特点，因而具有潜在的低成本优势，对于基因合成的推广，生物工程，生物医学和生物信息学等领域的发展存在潜在的应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及的是一种基因工程
的方法，特别是一种。
技术介绍
随着生物技术及医学的发展，设计或改造基因正得到越来越多的关注。传统的基因扩增、克隆、重组和突变技术只能得到自然界已有或类似的DNA序列，要实现对基因的自由设计，必须对基因进行人工合成。基因的人工合成包括两个步骤一是用酶法将化学合成的寡核苷酸链进行人工拼接，得到较长的序列；二是以较长序列为基础，进一步拼接得到更长的DNA序列，直至达到需要的长度。对于较短的DNA序列(＜1kb)来说，一般无需步骤二。在基因人工合成中，步骤一是合成的关键步骤。目前主要有两种方法可以实现步骤一，分别是连接酶法和PCR法。基因人工合成最初使用的是连接酶法(Khorana HG.Science.V203，614-625.1979)。在连接酶法中，引物序列之间存在互补的部分，可以相互杂交形成存在缺刻(nick)的长序列，这些缺刻可以在连接酶(T4 DNA ligase，Taqligase等)的作用下被去除，从而得到连续的长DNA序列。由于所有的连接酶都需要5’磷酸化的末端和3’羟基进行连接，所以在反应之前，用于连接的中间引物需要进行5’磷酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种等温单向生长的基因合成方法，其特征在于，具体包括以下步骤：（１）、根据目标ＤＮＡ序列设计并合成用于延伸的寡核苷酸链，或者纯化合成的寡核苷酸链；（２）、在多种酶的协同作用下进行等温生长，合成目标ＤＮＡ长链，（３）、 以步骤（２）中所得的产物为模板进行ＰＣＲ扩增，获取目标序列长度的ＰＣＲ产物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：林继伟，李海阔，王小兵，张晓东，胡钧，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]