奥硝唑纯度标准物质及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了奥硝唑纯度标准物质及其制备方法与应用。它的制备方法，包括如下步骤：1)对奥硝唑原料粉末取样，采用高效液相色谱面积归一化法测定其含量，得到奥硝唑原料粉末的纯度定值；2)测定奥硝唑原料粉末中水、非挥发性杂质和有机挥发性杂质的质量百分含量，按照公式Ⅰ计算，得到奥硝唑纯度标准物质的纯度定值1，记为PHPLC‑AN；PHPLC‑AN＝P0×[100％‑Xw‑Xn‑Xv]公式Ⅰ；3)取奥硝唑原料粉末采用定量核磁法测定其含量，得到奥硝唑纯度标准物质的纯度定值2，记为PNMR；4)计算PHPLC‑AN和PNMR的平均值，即得到奥硝唑纯度标准物质的纯度定值。本发明专利技术能作为标准物质用于畜禽产品中药物残留的检测，为国家农产品质量安全风险评估与监测溯源体系的建立提供技术支持与物质保证。

Purity standard substance of ornidazole and its preparation method and Application

【技术实现步骤摘要】
奥硝唑纯度标准物质及其制备方法与应用
本专利技术涉及奥硝唑纯度标准物质及其制备方法与应用，属于化学计量中标准量值传递

技术介绍
禁限用药物在畜牧养殖过程中滥用情况严重，由于其具有较强的毒副作用和毒性作用，且在动物组织中的残留会通过食物链传给人类，长期微量摄入会引起多种疾病，对人类的健康造成危害。禁限用药物已成为农业部农产品质量安全风险评估与监测活动的重要参数，为保证测量结果的一致性、可比性、可溯源性以及量值的准确可靠，急需配套相应的标准物质。奥硝唑中文别名奥尼达唑，英文名称：Ornidazole，主要用做抗厌氧菌及抗原虫药。CAS：16773-42-5。分子式C7H10ClN3O3。相对分子量219.63，熔点86-90℃，沸点443.2℃。为白色至微黄色粉末，无臭，味苦，在甲醇、乙醇中易溶，在水中略溶。储存条件：2-8℃。为第三代硝基咪唑类衍生物，其发挥抗微生物作用的机理可能是：通过其分子中的硝基，在无氧环境中还原成氨基或通过自由基的形成，与细胞成分相互作用，从而导致微生物死亡。奥硝唑的分子结构式如式1所示。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供奥硝唑纯度标准物质及其制备方法与应用，本专利技术能作为标准物质用于畜禽产品中药物残留的检测，为国家农产品质量安全风险评估与监测溯源体系的建立提供技术支持与物质保证。本专利技术提供的奥硝唑纯度标准物质的制备方法，包括如下步骤：1)对奥硝唑原料粉末取样，采用高效液相色谱面积归一化法测定所述奥硝唑原料粉末中奥硝唑的质量百分含量，得到所述奥硝唑原料粉末的纯度定值；2)测定所述奥硝唑原料粉末中水分质量百分含量、非挥发性杂质质量百分含量和有机挥发性杂质质量百分含量，结合步骤1)中测定的所述奥硝唑原料粉末的纯度定值，按照如下公式Ⅰ计算，得到奥硝唑纯度标准物质的纯度定值1，记为PHPLC-AN；PHPLC-AN＝P0×[100％-Xw-Xn-Xv]公式Ⅰ；其中，P0为奥硝唑原料粉末的纯度定值，Xw为水分质量百分含量，Xn为非挥发性杂质质量百分含量，Xv为有机挥发性杂质质量百分含量；3)取所述奥硝唑原料粉末采用定量核磁法，测定所述奥硝唑原料粉末中奥硝唑的质量百分含量，得到奥硝唑纯度标准物质的纯度定值2，记为PNMR；4)计算所述奥硝唑纯度标准物质的纯度定值1和所述奥硝唑纯度标准物质的纯度定值2的平均值，即得到奥硝唑纯度标准物质的纯度定值。上述的方法中，步骤1)中还包括对所述奥硝唑原料粉末取样采用JJG1006-1994《一级标准物质技术规范》的要求采用方差分析法进行均匀性检验的步骤。上述的方法中，步骤1)中还包括对所述奥硝唑原料粉末取样采用直线拟合法进行稳定性检验的步骤；所述稳定性检验根据JJG1006-1994《一级标准物质技术规范》中的要求进行。上述的方法中，所述高效液相色谱面积归一化法的色谱条件如下：色谱柱：SB-aq(250mm×4.6mm,5.0μm)；流动相：由乙腈和乙酸水溶液组成，乙腈与乙酸水溶液的体积份数比为13:87，乙酸水溶液中的乙酸与水的体积份数比为0.001:100；流速：1.0mL/min；进样量：20μL；UV波长：312nm；所述奥硝唑原料粉末测定时配制为100～500mg/L的奥硝唑甲醇溶液。本专利技术中，HPLC：岛津LC-20A系统。上述的方法中，所述定量核磁法采用内标法，所述奥硝唑纯度标准物质的纯度定值2按照如下公式Ⅱ进行计算：式Ⅱ中：PNMR为采用核磁共振法测得的被测物的纯度；Ix为所述奥硝唑原料粉末指定峰的积分面积；Istd为内标物指定峰的积分面积；nstd为内标物指定峰的核群核个数；nx为所述奥硝唑原料粉末指定峰的核群核个数；Mx—所述奥硝唑原料粉末的分子量；Mstd—内标物的分子量；mstd—添加的内标物的质量；mx—所述奥硝唑原料粉末的称样量；Pstd—内标物的纯度。本专利技术中，所述内标物为苯甲酸。上述的方法中，采用卡尔费休法测定所述奥硝唑原料粉末中的水分含量；所述奥硝唑原料粉末中非挥发性杂质质量百分含量采用微波消解-电感耦合等离子体质谱法、微波消解-电感耦合等离子体发射光谱法和离子色谱法测定；所述微波消解-电感耦合等离子体质谱法测定非挥发性杂质中的As、Se、Cd、Mn、Sn、Li、Cr、Cs、Ni、Pb、Sr、Rb、Ti和Ba中至少一种的含量；所述微波消解-电感耦合等离子体发射光谱法测定所述非挥发性杂质中的Cu、Ca、Mg、K、Na、P、Mn、Mo、Zn、Fe和Co中至少一种的含量；所述离子色谱法测定氯离子、硝酸根离子和硫酸根离子的含量；采用顶空气相色谱测定所述奥硝唑原料粉末中所述有机挥发性杂质质量百分含量。上述的方法中，步骤2)中还包括对奥硝唑纯度标准物质的定值进行不确定度分析的步骤。本专利技术还提供了上述的方法得到的定值的所述奥硝唑纯度标准物质。本专利技术中，所述奥硝唑纯度标准物质的质量百分含量的纯度定值为99.9％。本专利技术进一步提供了所述奥硝唑纯度标准物质在如下1)-6)任一项中的应用：1)作为标准物质应用于农产品生产流通领域中兽药和/或饲料产品中奥硝唑成分检测；2)食品领域中畜禽产品中奥硝唑药物残留检测；3)检测实验室质量控制；4)作为标准物质对分析仪器校准；5)分析方法确认评价；6)对给定材料赋值。本专利技术具有以下优点：本标准物质候选物通过订购相应的市售标准品，并根据其理化特性减压干燥处理，充分摇匀，经定性与初步分析满足要求后，干燥条件下分装。采用液相色谱-面积归一化法(UV检测器)和定量核磁法两种不同原理的方法对标准物质的纯度进行定值，通过使用满足计量学特性要求的制备方法、测量方法和计量器具，保证标准物质特性量值的溯源性。附图说明图1为本专利技术奥硝唑纯度标准物质6个月稳定性监测结果。图2为本专利技术阿昔洛韦短期稳定性监测结果，其中图2(a)为20℃条件下短期稳定性结果，图2(b)为40℃条件下短期稳定性结果，图2(c)为60℃条件下短期稳定性结果。图3为本专利技术不同浓度条件下奥硝唑色谱图，其中图3(a)为100mg/L的奥硝唑甲醇溶液的色谱图，图3(b)为500mg/L的奥硝唑甲醇溶液。图4为本专利技术甲醇空白与奥硝唑候选物样品的色谱图，其中图4(a)为甲醇空白的色谱图，图4(b)为奥硝唑候选物样品的色谱图。图5为非挥发性杂质含量测，其中图5(a)为氯离子的标准曲线，图5(b)为硝酸根的标准曲线，图5(c)为硫酸根离子的标准曲线。图6为奥硝唑(2000mg/L)的离子色谱图。图7为奥硝唑中挥发性杂质含量测定，其中图7(a)为奥硝唑顶空色谱图，图7(b)为空气空白的顶空色谱图，图7(c)为奥硝唑与单标对比的顶空气相色谱图。图8为奥硝唑的定量核磁谱图，其图8(a)为奥硝唑的定量核磁谱图(1H-NMR谱)，图8(b)为苯甲酸标准物质的定量核磁谱图(1H-NMR谱)，图8(c)为奥硝唑和内标混合后的定量核磁谱图(1H-NMR谱)。图9为奥硝唑纯度标准物质定值不确定度来源分析及评定流程图。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中，标准物质候选物奥硝唑购于TCI公司，批号为LotSFHEL，标签纯度为99.9％(HPLC)和99.9％(Nona本文档来自技高网...

【技术保护点】
奥硝唑纯度标准物质的制备方法，包括如下步骤：1)对奥硝唑原料粉末取样，采用高效液相色谱面积归一化法测定所述奥硝唑原料粉末中奥硝唑的质量百分含量，得到所述奥硝唑原料粉末的纯度定值；2)测定所述奥硝唑原料粉末中水分质量百分含量、非挥发性杂质质量百分含量和有机挥发性杂质质量百分含量，结合步骤1)中测定的所述奥硝唑原料粉末的纯度定值，按照如下公式Ⅰ计算，得到奥硝唑纯度标准物质的纯度定值1，记为PHPLC‑AN；PHPLC‑AN＝P0×[100％‑Xw‑Xn‑Xv]公式Ⅰ；其中，P0为奥硝唑原料粉末的纯度定值，Xw为水分质量百分含量，Xn为非挥发性杂质质量百分含量，Xv为有机挥发性杂质质量百分含量；3)取所述奥硝唑原料粉末采用定量核磁法，测定所述奥硝唑原料粉末中奥硝唑的质量百分含量，得到奥硝唑纯度标准物质的纯度定值2，记为PNMR；4)计算所述奥硝唑纯度标准物质的纯度定值1和所述奥硝唑纯度标准物质的纯度定值2的平均值，即得到奥硝唑纯度标准物质的纯度定值。

【技术特征摘要】
1.奥硝唑纯度标准物质的制备方法，包括如下步骤：1)对奥硝唑原料粉末取样，采用高效液相色谱面积归一化法测定所述奥硝唑原料粉末中奥硝唑的质量百分含量，得到所述奥硝唑原料粉末的纯度定值；2)测定所述奥硝唑原料粉末中水分质量百分含量、非挥发性杂质质量百分含量和有机挥发性杂质质量百分含量，结合步骤1)中测定的所述奥硝唑原料粉末的纯度定值，按照如下公式Ⅰ计算，得到奥硝唑纯度标准物质的纯度定值1，记为PHPLC-AN；PHPLC-AN＝P0×[100％-Xw-Xn-Xv]公式Ⅰ；其中，P0为奥硝唑原料粉末的纯度定值，Xw为水分质量百分含量，Xn为非挥发性杂质质量百分含量，Xv为有机挥发性杂质质量百分含量；3)取所述奥硝唑原料粉末采用定量核磁法，测定所述奥硝唑原料粉末中奥硝唑的质量百分含量，得到奥硝唑纯度标准物质的纯度定值2，记为PNMR；4)计算所述奥硝唑纯度标准物质的纯度定值1和所述奥硝唑纯度标准物质的纯度定值2的平均值，即得到奥硝唑纯度标准物质的纯度定值。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)中还包括对所述奥硝唑原料粉末取样采用JJG1006-1994《一级标准物质技术规范》的要求采用方差分析法进行均匀性检验的步骤。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤1)中还包括对所述奥硝唑原料粉末取样采用直线拟合法进行稳定性检验的步骤。4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：所述高效液相色谱面积归一化法的色谱条件如下：色谱柱：SB-aq(250mm×4.6mm,5.0μm)；流动相：由乙腈和乙酸水溶液组成，乙腈与乙酸水溶液的体积份数比为13:87，乙酸水溶液中的乙酸与水的体积份数比为0.001:100；进样量：20μL；UV波长：312nm；所述奥硝唑原料粉末测定时配制为100～500mg/L的奥硝唑甲醇溶液。5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于：所述定量核磁法采用内标法，所述奥硝唑纯度标准物质...

【专利技术属性】
技术研发人员：周剑，王敏，杨梦瑞，王彤彤，张丽媛，
申请(专利权)人：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11