一种口含型烟草制品对牙龈卟啉单胞菌影响的检测方法技术
Detection method for influence of oral tobacco products on Porphyromonas gingivalis
【技术实现步骤摘要】
一种口含型烟草制品对牙龈卟啉单胞菌影响的检测方法
本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种口含型烟草制品对牙龈卟啉单胞菌影响的检测方法。
技术介绍
据全国第三次口腔健康流行病学调查结果显示，慢性牙周炎(chronicperiodontitis，CP)的患病率达到80％以上，而且是35岁以上人群牙齿缺失的主要原因。现代医学研究表明，慢性牙周炎多是由于患者口腔卫生环境差，咬合创伤等因素引起的牙周组织渐进性破坏，初期多表现为口臭、牙龈红肿、出血，久之不治疗则会导致牙齿松动、牙槽骨破坏、甚至是拔牙，此外它还关系到心、肺、肾等重要脏器的功能。牙周组织损害与多种龈下微生物有关，其中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis，P.gingivalis)被认为是慢性牙周炎最重要的致病菌之一，该菌常在牙周炎患者龈下菌斑和唾液中检出，在牙周健康人群中也能检测到。牙龈卟啉单胞菌具有脂多糖、荚膜多糖、菌毛、牙龈蛋白酶等一系列致病因子，能够成功侵袭宿主细胞，并逃避免疫系统。口含型无烟气烟草制品是一种湿润的烟草粉末制品，起源于19世纪瑞典。瑞典口含烟产品呈现细的颗粒状...
【技术保护点】
一种口含型烟草制品对牙龈卟啉单胞菌影响的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤（1），配制人工唾液，并向人工唾液中添加牙龈卟啉单胞菌，使牙龈卟啉单胞菌在人工唾液中的量为1*10
【技术特征摘要】
1.一种口含型烟草制品对牙龈卟啉单胞菌影响的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤（1），配制人工唾液，并向人工唾液中添加牙龈卟啉单胞菌，使牙龈卟啉单胞菌在人工唾液中的量为1*104-1*106CFU/mL，得到含牙龈卟啉单胞菌的人工唾液；步骤（2），采用步骤（1）得到的含牙龈卟啉单胞菌的人工唾液对口含烟烟草制品进行提取，提取多次，分别收集提取液；步骤（3），将步骤（2）收集到的各提取液与步骤（1）的含牙龈卟啉单胞菌的人工唾液一起放入厌氧培养箱于37℃下进行共培养；之后分别提取各培养液中的牙龈卟啉单胞菌DNA，同时提取牙龈卟啉单胞菌的标准菌株原始DNA；步骤（4），以浓度梯度稀释10倍的牙龈卟啉单胞菌的标准菌株原始DNA作为模板进行荧光定量PCR分析，之后绘制牙龈卟啉单胞菌荧光定量PCR标准曲线；同时，分别以各培养液中的牙龈卟啉单胞菌DNA作为模板进行荧光定量PCR分析，空白对照模板采用灭菌双蒸水，根据标准曲线计算各培养液中的牙龈卟啉单胞菌DNA的含量；其中，荧光定量PCR分析所使用的上游引物为5’-tacccatcgtcgccttggt-3’；下游引物为5’-cggactaaaaccgcatacacttg-3’；探针为FAM-atttatagctgtaagataggc-TAMRA。2.根据权利要求1所述的口含型烟草制品对牙龈卟啉单胞菌影响的检测方法，其特征在于，步骤（2）的具体方法为：向口含烟烟草制品0.8-1.2g中注入步骤（1）的含牙龈卟啉单胞菌的人工唾液于37℃下恒温震荡进行提取，提取多次，每次提取所用的含牙龈卟啉单胞菌的人工唾液10mL，每次提取时间为5min，分别收集提取液。3.根据权利要求2所述的口含型烟草制品对牙龈卟啉单胞菌影响的检测方法，其特征在于，所述的震荡速度为150-300rpm；提取次数为3次。4.根据权利要求2所述的口含型烟草制品对牙龈卟啉单胞菌影响的检测方法，其特征在于，步骤（3）的具体方法为：（3.1）共培养：取步骤（2）收集到的各提取液与步骤（1）的含牙龈卟啉单胞菌的人工唾液，每种液体均分为3等份，分别放入厌氧培养箱于37℃下进行共培养，每种液体3等份的培养时间分别为0h、2h、6h三个时间段；（3.2）培养液中的牙龈卟啉单胞菌DNA的提取：取出步骤（3.1）的培养后的培养液在4℃离心，去上清液，再加入微生物PCR裂解液，混合均匀后，置于75-85℃下热变性15min，然后再次离心，取上清液，即得到培养液中的牙龈卟啉单胞菌DNA；所述的微生物PCR裂解液的加入体积为培养液体积的5%；（3.3）牙龈卟啉单胞菌的标准菌...
【专利技术属性】
技术研发人员：高茜，段沅杏，赵伟，杨继，田永峰，管莹，米其利，朱洲海，夭建华，
申请(专利权)人：云南中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：云南,53
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