一种具有溶藻活性的链霉菌JXJ0035及其应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物应用技术领域，具体涉及一种具有溶藻活性的链霉菌及其在蓝藻水华控制中的应用，该菌的保藏号为CGMCC No.13636，该菌的菌丝体、孢子和胞外产物均具有较强的溶藻活性，可以应用于抑制蓝藻水华。

A Streptomyces JXJ0035 with algal activity and its application

The present invention relates to the technical field of application of microorganism, in particular to a Streptomyces with lytic activity and its application in the control of cyanobacterial blooms in the preservation number of the bacteria was CGMCC No.13636, mycelium, spores and extracellular metabolites of the bacteria have strong activity of algae solution, can be used to restrain cyanobacterial blooms.

【技术实现步骤摘要】
一种具有溶藻活性的链霉菌JXJ0035及其应用
本专利技术涉及微生物应用
，具体涉及一种具有溶藻活性的链霉菌及其在蓝藻水华控制中的应用。
技术介绍
随着全球水体富营养化的加剧，有害蓝藻水华爆发日趋频繁，中国是蓝藻水华的重灾区。蓝藻水华造成了严重的环境问题和巨大的经济损失，并严重威胁了人类健康，因此，蓝藻水华的防治引起了人们广泛重视。虽然长期控制污染源是水华防治的最有效方法，但由于经济原因，对绝大部分国家尤其是发展中国家来说，该方法不切实际，因此，有必要开发蓝藻水华短期防治技术。目前水华防治方法包括物理方法、化学方法和生物方法三种。物理方法主要有黏土等吸附法、机械除藻法和超声波法等，但物理除藻法处理藻的能力有限，且工作量大、能耗高、可能具有潜在的二次污染，只能作为蓝藻水华的辅助性防治方法。化学除藻法主要是利用包括硫酸铜等金属盐和除草剂等除藻，虽然快速高效，但这些化学杀藻剂选择性差，对其它水生生物均有较大的毒性，且在水环境中容易富集，因此二次污染问题严重。在这些常规蓝藻水华防治方法不甚理想的情况下，寻找高效环保的蓝藻水华防治技术势在必行。溶藻放线菌在蓝藻水华防治上的研究引起了越来越多的关注，目前报道的溶藻放线菌主要是其中的链霉菌，溶藻链霉菌能够分泌各种天然溶藻活性成分，发挥抑藻或杀藻作用。天然溶藻化合物对水华蓝藻的选择毒性强，容易降解，不易造成二次污染，而链霉菌是生理活性物质的最大产生菌，因此筛选高效溶藻链霉菌，并利用它们或它们产生的高效溶藻化合物研制高效、环境友好的杀藻剂具有巨大的潜力。铜绿微囊藻(Microcystisaeruginosa)是最常见和危害最大的水华蓝藻藻种，以该藻种为指示藻，筛选高效溶藻链霉菌，对蓝藻水华的有效治理具有重要的实践价值。
技术实现思路
本专利技术的目的是要提供溶藻链霉菌及分离富集溶藻链霉菌产生的高效溶藻活性物质，用以高效和安全地控制蓝藻水华。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一株具有溶藻活性的链霉菌(Streptomycessp.)JXJ0035，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCCNo.13636，保藏日期为2017年01月17日。保藏机构地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编：100101，电话：86-10-64807355。本专利技术涉及的链霉菌(Streptomycessp.)JXJ0035，在高氏1号培养基、营养琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)、麦芽膏-酵母膏培养基(ISP2)、燕麦粉琼脂培养基(ISP3)和甘油天冬酰胺琼脂培养基(ISP5)都上生长良好，气丝较发达，灰白色，基丝淡黄色，产生水溶性淡黄色色素，孢子丝为螺旋状，螺旋圈数为3-7，孢子椭圆形，表面光滑，直径0.6-0.9×1-1.7μm，生长温度5-37℃(最适28℃)。经16SrRNA基因序列分析和同源性比较，得知其与Streptomyceslushanensis相似性最高(98.2％)，故鉴定为链霉菌属(Streptomyces)的成员，命名为链霉菌JXJ0035，该菌种的16SrRNA基因在GenBank中的登录号是的KY613503，具体请见SEQIDNO：1。本专利技术提供的一种链霉菌JXJ0035可以应用于抑制蓝藻水华。本专利技术还提供了一种链霉菌JXJ0035发酵液的制备方法：将链霉菌JXJ0035接种于斜面培养基，28℃恒温培养箱中培养至孢子成熟，再将成熟孢子接入液体种子培养基中，28℃、160rpm摇床培养2d后，按照10％(v/v)的接种量接入发酵培养基，于28℃、160rpm摇床培养10-11d，即得链霉菌JXJ0035发酵液，此发酵液包含了具有杀藻活性的活菌丝体和菌株分泌的溶藻活性成分。所述斜面培养基中各组分的质量比为：葡萄糖0.2-0.6％，麦芽浸膏粉0.3-0.7％，酵母浸膏粉0.2-0.6％，琼脂1-2％，pH为7.4，水补足；所述液态种子培养基中各组分的质量比为：葡萄糖0.2-0.6％，麦芽浸膏粉0.3-0.7％，酵母浸膏粉0.2-0.6％，pH为7.4；所述的发酵培养基中各组分的质量比为：葡萄糖1-2％，大豆豆粕粉0.5-1.5％，酵母浸粉0.1-0.3％，淀粉0.5-1.5％，蛋白胨0.1-0.3％，麦芽浸粉0.1-0.3％，NaCl0.3-0.5％，K2HPO40.04-0.06％，MgSO4·7H2O0.04-0.06％，水补足，调pH7.8，再加CaCO30.1-0.3％。本专利技术还提供了一种链霉菌JXJ0035活干菌丝体杀藻剂的制备方法：将链霉菌JXJ0035发酵液在4500rpm的条件下离心，将沉淀菌丝体在真空冷冻条件下干燥，即得到活干菌丝体杀藻剂。本专利技术还提供了一种链霉菌JXJ0035孢子粉杀藻剂的制备方法：先将链霉菌JXJ0035接种在PDA等固体培养基上，待孢子大量形成后，采用加热或真空冷冻法除去培养基中的水分，得到吸附在固体培养基基质上的孢子粉杀藻剂，由于放线菌孢子抗逆性较强，因此孢子粉杀藻剂便于保藏和运输。本专利技术还提供了一种链霉菌JXJ0035的溶藻活性成分的提取方法：将链霉菌JXJ0035发酵液在4500rpm的条件下离心，得到上清液，再将上清液用AmberliteXAD-16大孔吸附树脂柱吸附活性成分，然后用1倍柱体积的去离子水洗脱，除去多糖类等水溶性物质，再用1倍柱体积的30％甲醇水溶液洗脱，再用100％甲醇洗脱，收集100％甲醇洗脱液，减压蒸馏除去甲醇，得到链霉菌JXJ0035的溶藻活性成分。试验表明，链霉菌JXJ0035的菌丝体、孢子和发酵上清液均具有较强的溶藻活性，特别是对危害最大的水华蓝藻微囊藻属的藻种，诸如铜绿微囊藻、惠氏微囊藻和水华微囊藻等，同时对其它丝状水华蓝藻也具有一定的溶藻活性，诸如水华束丝藻、浮游颤藻、水华鱼腥藻、点形念珠藻和小颤藻等。链霉菌JXJ0035的菌丝体、孢子和由发酵上清液制备的溶藻活性成分粗提物均可用于蓝藻水华的防治。说明书附图图1为链霉菌JXJ0035不同发酵时间的发酵上清液对铜绿微囊藻FACHB-905的溶藻效率；图2为链霉菌JXJ0035的菌丝体对铜绿微囊藻FACHB-905的溶藻效率；图3为加入铜绿微囊藻藻液的链霉菌JXJ0035孢子在藻液中萌发，并生长形成大量菌丝体，导致藻细胞大量死亡，其中圆圈内是菌丝体包裹的藻细胞。装片用番红染料染色；图4为链霉菌JXJ0035发酵上清液对9种不同水华蓝藻的溶藻效率，其中1，MicrocystisaeruginosaFACHB-905；2，MicrocystiswesenbergiiFACHB-1112；3，MicrocystisviridisFACHB-1284；4，Microcystisflos-aquaeFACHB-1285；5，OscillatoriatennuisFACHB-247；6，OscillatoriaplanctonicaFACHB-708；7，NostocpunctiformeFACHB-252；8，Anabaenaflos-aquaeFACHB-1092；9，Aphanizomenonflos-aquaeFACHB-1171；图5为链霉菌JXJ0035产生的溶藻化合物紫外检测本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有溶藻活性的链霉菌(Streptomyces sp.)JXJ 0035，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCC No.13636，保藏日期为2017年01月17日。

【技术特征摘要】
1.一种具有溶藻活性的链霉菌(Streptomycessp.)JXJ0035，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCCNo.13636，保藏日期为2017年01月17日。2.如权利要求1所述的链霉菌(Streptomycessp.)JXJ0035在抑制蓝藻水华中的应用。3.根据权利要求2所述的链霉菌(Streptomycessp.)JXJ0035在抑制蓝藻水华中的应用，其特征在于：所述的蓝藻为铜绿微囊藻。4.一种链霉菌(Streptomycessp.)JXJ0035发酵液的制备方法，其特征在于：将链霉菌JXJ0035接种于斜面培养基，28℃恒温培养箱中培养至孢子成熟，再将成熟孢子接入液体种子培养基中，28℃、160rpm摇床培养2d后，按照体积比10％的接种量接入发酵培养基，于28℃、160rpm摇床培养10-11d，即得链霉菌JXJ0035发酵液。5.根据权利要求4所述的一种链霉菌(Streptomycessp.)JXJ0035发酵液的制备方法，其特征在于，所述斜面培养基中各组分的质量比为：葡萄糖0.2-0.6％，麦芽浸膏粉0.3-0.7％，酵母浸膏粉0.2-0.6％，琼脂1.5-2％，pH为7.4，水补余至100％；所述液态种子培养基中各组分的质量比为：葡萄糖0.2-0.6％，麦芽浸膏粉0.3-0.7％，酵母浸膏粉0.2-0.6％，水补余至100％，pH为7.4；所述发酵...

【专利技术属性】
技术研发人员：张方，唐振华，吴晓帏，刘湛红，
申请(专利权)人：九江市环境保护监测站，
类型：发明
国别省市：江西,36